一种A型流感病毒NP抗原快速检测试剂的建立

目的建立一种适合现场检测需要的A型流感快速诊断试剂。方法以自制的抗A型流感（Flu A）病毒核蛋白（NP）单抗为原料，建立快速检测A型流感病毒的双抗体夹心酶免疫渗滤试验，并对其灵敏度和特异性进行了初步评价。结果该试剂对不同地区流行的各种亚型的A型流感病毒株均有较高的反应性，而对非Flu A病毒株无交叉反应。比较该试剂与BD公司的两种流感快速诊断试剂，发现该试剂对随机选取的3株Flu A病毒的检测分析灵敏度高出Directigen EZ FluA试剂5～125倍，对2株Flu A病毒的分析灵敏度高出Directigen Flu A试剂约20倍。另外，用该试剂对57份含漱液标本和170份动物拭子标本进行检测，结果显示：本试剂的灵敏度（〉85％）和特异性（〉95％）均优于当前主流的商品化A型流感快速诊断试剂。结论利用抗Flu A NP单抗为原料建立了A型流感快速诊断试剂，该试剂的应用无需任何专用仪器，操作简便快速，可满足现场检测需要。

一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立

利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景。

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较

利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂“H5-HA（Ag）Dot-ELISA（H5-Dot）”对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测，结果：①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别，气管拭子的检出率最高，泄殖腔拭子次之，粪便拭子最低（P〈0．05），因此建议现场采样时应尽可能采集气管拭子标本；②陆禽标本检出率显著高于水禽标本（P〈0．05），对病毒培养阳性的陆禽气管拭子检出率达80％（95％CI：70．6％～87．8％），对水禽气管拭子标本的检出率为38％（95％CI：26．9％～49．4％），可能与标本中病毒滴度高低有关；③有症状与无症状陆禽标本的检出率无显著差异。另外，H5-Dot试剂对333份非H5病毒气管拭子标本的特异性为99．4％（95％CI：97．9％～99．9％）。这些结果表明，H5-Dot是一种较为可靠的H5亚型禽流感病毒早期快速检测方法，在缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的H5N1禽流感病毒防控第一线具有重要推广价值。

海藻酸钙-几丁聚糖微胶囊的形态与粒径

以静电法通过高压成型装置制备了海藻酸钙-几丁聚糖微胶囊,重点考察了海藻酸钠浓度、凝胶化时间、成膜前冲洗液的种类、几丁聚糖溶液的pH值对微囊形态与粒径的影响.实验结果表明,与生理盐水、甘露醇及直接成膜相比,成膜前采用蒸馏水冲洗胶珠制备出的微囊大小均匀、表面光洁、球形度好;几丁聚糖溶液pH值对微囊形态,甚至膜强度有很大的影响,应根据实际应用需要选取适当的pH值,初步探讨了微囊的控制释放性能.

醌类化合物的超临界流体萃取研究进展

综述了国内近20年来超临界流体萃取技术应用于醌类化合物分离的研究进展,重点介绍了超临界流体萃取技术在中草药中醌类化合物的分析测定方面的应用,分析了影响醌类成分提取效果的主要因素,优化萃取温度和萃取压力能够改善琨类化合物的分离效果,夹带剂的使用则有效地提高了超临界流体的萃取能力。

基于全自动管式化学发光免疫检测系统的人结核感染T细胞检测方法的建立

目的建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。方法将一株γ-干扰素单抗标记在磁微粒上,另一株γ-干扰素单抗标记在吖啶酯上,然后将检测体系与已有的细胞刺激培养体系相结合。结果本研究成功建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。以ELISA平台检测试剂的检测结果作为参考,该方法的灵敏度为98.3%,特异性为99.2%,总体符合率达到98.8%。结论该方法具有更高的分析灵敏度(可达0.27 pg/m L)、更宽的线性范围(1 pg/m L^5 000 pg/m L)、更好的重复性(批内与批间变异系数均<6.0%)及更易实现高通量检测,为临床诊断结核感染提供了有力的工具。

肠道病毒EV71 IgM抗体参考品的建立

目的建立肠道病毒EV71 IgM抗体检测用血清国家盘。 方法 通过收集手足口病感染早期患者的咽拭子和血清,对咽拭子病毒进行分离、鉴定、基因分型,通过血清中和试验及酶联免疫吸附试验（捕获法）的验证,确定EV71 IgM抗体阳性样品,组建EV71 IgM抗体国家参考品盘,并经3家实验室对国家参考品进行协同标定和确认。结果 12名患儿的咽拭子中均分离到EV71病毒,在RD细胞上引起细胞病变。 通过套式PCR扩增、序列测定后进化树分析确认均为流行的C4基因亚型 。每名患儿的双份血清均可中和EV71病毒,抗体效价为1∶512 － 1∶2048。 通过捕获法进行EV71 IgM抗体检测结果均为阳性 。 以此12份样品为原料制备EV71 IgM抗体阳性参考品,同时以12份EV71 IgM抗体阴性血清制备阴性参考品,建立了由12份阳性参考品、12 份阴性参考品、1 份最低检出限参考品和1份精密性参考品组成的肠道病毒EV71 IgM抗体参考血清盘。 通过3家实验室协同标定,各实验室间差异均无统计学意义。 结论 建立了EV71 IgM抗体检测参考血清盘,为相关检测试剂的质量控制和评价提供了标准。

一种糖类抗原242全自动管式化学发光定量免疫检测试剂的建立

目的建立一种全自动测定血清糖类抗原242(CA242)的管式化学发光定量免疫检测试剂。方法采用均相磁微粒标记技术与高灵敏的吖啶酯化学发光技术,依据双抗体夹心原理,以4株单克隆抗体为原料进行配对单抗筛选,从而建立CA242化学发光磁微粒测定试剂,并在全自动管式化学发光仪上对其灵敏度、精密度、回收率与相关性等进行初步评价。结果筛选的最优单抗配对7C10(包被)-3H1(标记)的反应活性最高,且CA19-9和CA50对CA242检测的干扰很小。该试剂的分析灵敏度为0.69 U/ml,高浓度样本精密度为3.0%,低浓度样本精密度为5.7%,回收率为101.5%。与当前主流的商品化试剂的定量相关性良好(y=1.027x–0.2991,r=0.9911,P<0.05)。结论利用抗CA242单抗为原料建立CA242全自动管式化学发光定量免疫检测试剂,该试剂性能良好,所有检测操作均由仪器自动完成,可满足目前临床医学的高通量检测需求。

大肠杆菌可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原的制备及应用

旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法。基于pGEX-6P-1载体和大肠杆菌E.coliER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,评价纯化抗原活性,筛选特异性单克隆抗体,初步建立并评价SCCAg抗原检测方法。结果显示,pGEX-6P-1载体和E.coliER2566菌株可用于建立较高效的可溶性表达和纯化SCCAg抗原的方法,获得了具有较高纯度和活性的重组SCCAg抗原,筛选获得特异性单克隆抗体并初步建立了SCCAg管式化学发光检测方法。建立了有效的基于大肠杆菌表达系统的可溶性表达和纯化SCCAg的方法。

国产细胞角蛋白19片段CYFRA21-1化学发光定量检测试剂盒的性能评估

目的对厦门万泰凯瑞生物技术有限公司的细胞角蛋白19片段非小细胞肺原相关抗原21-1（CYFRA21-1）化学发光定量检测试剂盒进行分析性能评估。方法依据《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则》等文件对试剂盒的敏感性、线性范围、可报告范围、准确度、精密度、交叉反应等性能进行评估,同时与电化学发光法平行比对,检测配对血清/血浆结果的一致性。结果该试剂盒检测最低限为0.1ng/mL;线性范围为0.1-1 000.0ng/mL;可报告范围达0.1-2 000.0ng/mL;批内精密度为6.15%-9.46%,批间精密度为7.57%-11.00%;回收率达99.60%;与多种常见肿瘤抗原无交叉反应;轻度溶血、胆红素小于或等于340μmol/L、三酰甘油小于或等于18.1μmol/L及类风湿因子小于或等于400U/mL时,对试剂无显著干扰;与电化学发光法检测总符合率为98.56%,一致性良好（P〈0.05,Kappa=0.965）;血清、血浆标本检测一致性良好（P〈0.05,Kappa=0.936）。结论厦门万泰凯瑞生物技术有限公司生产的细胞角蛋白19片段CYFRA21-1化学发光定量检测试剂盒各项性能评估良好,可满足临床检测要求。

江苏省肠道病毒71型分离株的分子遗传演化特征

肠道病毒71型（EV71）是小RNA病毒科肠道病毒属成员,其感染主要引起患者手足口病（handfoot-mouth disease,HFMD）,个别患者可引起无菌性脑膜脑炎等并发症.自1998年EV71在中国台湾暴发以来,EV71病毒在亚洲的流行呈上升趋势.流行病学资料表明,不同地区不同症状的EV71病毒性疾病的暴发可能与毒株间的差异等因素有关[1].为了解EV71病毒的遗传和变异特征,本实验室对2009年在江苏手足口病流行地区分离到的一株EV71型病毒株（Jiangsu01,GenBank：FJ600325.1）的基因组核苷酸序列进行了遗传进化分析,从分子水平为EV71病毒的流行以及所致疾病的防控提供理论基础.

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速诊断试剂的改进与初步评价

H5N1病毒高度变异,为确保本中心研制的H5N1禽流感病毒抗原快速诊断试剂对不同变异分支的H5N1病毒,特别是实时流行株的高度检测准确性,本研究根据抗原活性变异情况对中心开发的第一代H5抗原快速诊断试剂进行了改进。改进后的第二代H5抗原快速诊断试剂(H5-Dot-2nd)对25株代表亚洲地区流行的不同进化分支的H5N1禽流感病毒检测均为阳性,其中12株检测下限达到0.01HA;而对20株32HA滴度的非H5亚型流感病毒株检测均为阴性;不同机构的评价结果显示,H5-Dot-2nd的灵敏度比国外同类试剂高出10～1000倍,对非H5现场标本特异性达到99.0%(399/403)。上述结果提示,H5-Dot-2nd对历年来特别是当前流行株均具有很好的检测灵敏度,能更好地满足流感疫情监控的需要。

化学发光法用于甲型流感检测的效果评价

目的考核甲型流感化学发光检测试剂的灵敏度和特异性。方法分别利用病毒分离培养液和入境人群的鼻咽拭子标本考查甲型流感试剂盒的检测灵敏度和特异性。结果化学发光法对H1、H3、H5、H7、H9等亚型的甲型流感病毒株均有很好的检出率,灵敏度明显优于Flu A-DOT和Directigen EZ Flu A;对102份入境人群鼻咽拭子标本的检测灵敏度为97.62%。结论甲型流感化学发光检测试剂具有很好的灵敏度和特异性,适用于口岸现场的甲型流感快速筛查。