LY294002和RAD001对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖与凋亡的影响

目的研究mTOR和PI3K特异性抑制剂RAD001和LY294002对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖与凋亡的影响。探讨PI3K/AKT/m TOR信号通路上下游不同靶点联合阻滞对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的抗肿瘤效应及其机制。方法体外RAD001和LY294002单独或者联合使用,通过MTT实验计算药物半数抑制浓度IC50。应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡。结果 (1)LY294002和RAD001抑制MDA-MB-231细胞的活力值且呈剂量依赖性。(2)LY294002和RAD001的IC50使MDA-MB-231细胞停滞在G1期(P<0.05),联用的效应比单独用更显著(P<0.05)。(3)LY294002和RAD001单独使用时能显著增加人体MDA-MB-23细胞的凋亡率(P<0.05)。联用时与单一药物使用相比,MDA-MB-231细胞的凋亡率显著增加,联合用时MDA-MB-231细胞凋亡率为52.67%。结论 PI3K/AKT/m TOR信号通路上下游不同靶点联合干预时两药的阻滞效应呈现相加作用,能够充分发挥抗肿瘤效应,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖并诱导细胞凋亡。

大规模平行测序无创基因检测用于胎儿染色体非整倍体异常产前诊断的临床价值

目的探讨大规模平行测序无创基因检测在胎儿染色体非整倍体异常产前诊断中的临床应用价值。方法选择预约做产前诊断的高危孕妇914例,按危险因素分为唐氏综合征筛查高危组563例,高龄妊娠组245例和其他原因组106例。抽取孕妇外周血,提取血浆DNA,制备测序文库,用高通量测序仪器检测,结果与人类的参考基因组比对;同时采集胎儿羊水,经细胞培养后行羊水细胞染色体核型分析。结果 914例孕妇经大规模平行测序技术检出21-三体综合征高风险8例,18-三体综合征高风险3例,13-三体综合征高风险1例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的阳性预测值均为100%,而假阳性率均为0。914例样本中,检出45,X高风险3例、47,XXX和47,XXY高风险各2例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测45,X的假阳性率为0.11%,阳性预测值为66.7%,47,XXY和47,XXX的假阳性率均为0.22%,阳性预测值均为50%。结论大规模平行测序技术对胎儿常染色体非整倍体疾病的诊断,具有极高的阳性预测值,但对胎儿性染色体非整倍体异常的阳性预测值较低;只能作为一种高级筛查性检测而不是确诊方法。

二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的作用及机制探讨

本研究旨在探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞生物学特性的影响及可能的作用机制。采用不同浓度的二甲双胍处理NB4细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过细胞黏附实验分析药物对细胞黏附能力的影响。采用细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化抑制剂U0126预处理NB4细胞,Western blot观察ERK磷酸化水平的变化,同时检测细胞凋亡和黏附能力的改变。结果表明,二甲双胍能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,增强细胞的黏附能力。5μmol/L U0126预处理有效抑制NB4细胞中ERK的磷酸化,降低5 mmol/L二甲双胍诱导的细胞凋亡并减弱细胞的黏附能力。结论:二甲双胍对NB4细胞有抑制增殖、促进凋亡和黏附的作用,MEK/ERK信号通路可能是二甲双胍在NB4细胞中的分子作用机制之一。

初诊急性髓系白血病骨髓CD34^+ CD38^-细胞群比例是初次诱导缓解率的预后因素

为了研究非M3急性髓系白血病(AML non-M3)CD34+CD38-细胞群及其G0期比例与临床和实验室特征的关系,使用流式细胞仪检测40例初治AML non-M3骨髓单个核细胞CD34和CD38的表达,测定各群细胞的细胞周期,并分析CD34+CD38-细胞群及其G0期比例与临床实验室特征及初次诱导缓解率的关系。结果显示,CD34+CD38-细胞群及其G0期的比例与染色体核型、初诊WBC计数及FLT3/ITD阳性均无明显相关性,但与诱导治疗后骨髓中幼稚细胞比例相关。诱导停疗第7天骨髓中有幼稚细胞患者CD34+CD38-细胞比例为(12.47±26.26)%,诱导停疗第7天无幼稚细胞患者CD34+CD38-细胞比例为(2.62±7.20)%(p=0.031)。诱导停疗第1天骨髓中可见幼稚细胞患者CD34+细胞群比例为(17.40±21.20)%,而诱导停疗第1天无幼稚细胞患者该比例为(5.64±6.96)%(p=0.001)。CR组患者治疗前CD34+CD38-细胞群的比例为(2.51±9.72)%,明显低于非CR组患者(24.92±27.04%)(p=0.001)。而在AML non-M2b患者中,CR组患者治疗前CD34+CD38-细胞群的比例为(1.60±4.82)%,较非CR组患者更为降低(p<0.001)。单因素分析显示,诱导化疗后是否取得CR与年龄(p=0.022)、CD34+CD38-细胞群比例(p=0.008)、诱导停疗第7天骨髓幼稚细胞比例(p=0.011)相关。多因素分析显示,仅有CD34+CD38-细胞群的比例与是否获得CR有相关趋势(p=0.052)。结论:初治AML患者CD34+CD38-细胞群的比例是AML初次诱导缓解率的预后因素。

永远的三峡

2002年11月6日9时50分,长江三峻工程导流明渠截流顺利合龙。这次截流是世界水利水电工程中综合难度最大的一次截流,但进展十分顺利,整个截流只用了40分钟。按照原定计划,2003年6月,三峡工程第二期工程竣工,人类历史上最大的水利工程——三峙水利枢纽工程水库将开始蓄水至135米。到那时,长江两岸自三峡大坝以西600公里内、海拔135米以下的一切都将消失在水面下。为了留下三陕截流前的最后影像,我们从宜昌沿着古栈道一路逆江而上,感受了长江三峡带给我们的激情、豪迈和些许分别的离愁。

一例眼发育异常伴小型脑膜膨出胎儿的遗传学分析

胎儿眼发育异常是由于胚胎时期眼的生长发育停滞或发育异常出现外观畸形、组织器官缺陷或功能障碍,称为眼先天发育异常。胎儿先天性眼部异常少见,包括无眼畸形和小眼畸形等。无眼和小眼畸形发病受多种因素影响,病因主要有染色体畸形(三倍体,9、13、18-三体,染色体缺失等),环境因素(胎儿先天感染、胎儿酒精综合征)及基因综合征(常染色体显性或隐性遗传的某些畸形)。眼部异常虽然是非致死性畸形,但患有眼部畸形的胎儿一旦出生,后果极其严重。

单核苷酸多态性微阵列技术在自然流产遗传学分析中的应用

目的探讨单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)技术在自然流产遗传学分析中的应用价值。方法选取2016年1月至2017年2月在杭州市第一人民医院就诊的自然流产患者43例,对流产绒毛或胎儿组织应用SNP-array技术进行检测,同时选取15例人工流产妇女作为对照组。结果 43例自然流产样本成功检测43例,成功率为100%,发现染色体异常16例,异常检出率为37.2%(16/43),其中染色体数目异常12例,结构异常4例。对照组15例人工流产样本检测全部成功,未发现染色体异常。结论 SNP-array技术可以作为自然流产物遗传学分析的方法之一,可为患者的病因诊断与再生育风险评估提供指导,具有较好的临床应用价值。

细菌人工染色体微珠技术在产前诊断中的应用

目的探讨细菌人工染色体微珠(BACs-on-Beads,Bo Bs)技术在产前诊断中的应用价值。方法对379例接受侵入性产前诊断的孕妇羊水样本行产前Bo Bs检测和羊水细胞染色体核型分析。结果 379例样本共检出24例异常样本,异常率为6.3%(24/379),其中15例染色体数目异常样本为两种技术共同检出,5例染色体微缺失/微重复样本为Bo Bs技术单独检出,另4例染色体结构异常样本为核型分析单独检出。结论 Bo Bs技术能快速,准确地检测出目标染色体非整倍体以及微缺失/微重复,Bo Bs检测联合染色体核型分析有利于提高染色体异常检出率,具有较高的临床应用价值。

抑癌基因PTEN与其假基因PTENPl在急性白血病细胞中的表达及其相关性研究

目的探讨抑癌基因PTEN与其假基因PTENP1在急性白血病（AL）细胞中的表达情况及两者之间的相关性，并观察在白血病细胞系中PTENP1对PTEN的调控作用。方法应用实时定量PCR方法检测138例初诊AL患者及15名正常对照者骨髓细胞中PTEN与PTENP1mRNA的表达水平。构建PTENP13’UTR的慢病毒载体pCDH1-PTENP13’UTR—GFP，磷酸钙共沉淀法转染293T细胞，病毒原液感染HL-60细胞，流式细胞术分选获得混合克隆。实时定量PCR检测两组不同克隆PTENP1mRNA表达变化，Western blot检测两组不同克隆PTEN蛋白表达变化，MTT法检测细胞增殖抑制率。结果与正常对照组相比，AL患者骨髓细胞PTEN及PTENP1mRNA表达水平均明显降低（P〈0．05）。相关性分析显示，PTEN与PTENP1mRNA表达水平呈正相关（P〈0．05）。将PTENP1阳性急性髓系白血病（AML）组患者（108例）按NCCN2011年AML治疗指南进行预后分组，各组之间PTEN及PTENPl表达水平无明显差异。pCDH1一PTENP13’UTR—GFP病毒原液感染的HL一60细胞，与对照组（pCDH1一GFP）相比，前者感染的HL-60细胞PTENP1mRNA水平明显升高，PTENmRNA水平亦有升高，但PTEN蛋白表达和细胞增殖无明显变化。结论AL患者骨髓细胞PTEN及PTENP1mRNA表达水平降低，两者的表达存在相关性。PTENP1可能在mRNA水平对PTEN的表达具有调控作用。

抑制素A在孕中期唐氏综合征产前筛查中的应用

目的评价抑制素A在孕中期唐氏综合征产前筛查的应用价值。方法选取已知妊娠结局的27例唐氏综合征和800例正常孕妇的冻存标本,采用免疫化学发光方法检测孕妇血清中甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、游离雌三醇(uE3)和抑制素A(Inhibin-A)的水平,结合孕妇信息分析孕中期血清学三联筛查(AFP、hCG、uE3)和四联筛查(AFP、hCG、uE3、Inhibin-A)胎儿发生唐氏综合征的风险概率。结果唐氏综合征组孕妇血清抑制素A的MOM中值显著高于正常孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05);以1/270作为阳性切割(cut-off)值时,四联筛查唐氏综合征的检出率为81%,较三联筛查的检出率提高7%;假阳性率为4.6%,较三联筛查的假阳性率降低0.8%。ROC曲线显示,四联筛查曲线下面积(0.972)大于三联筛查曲线下面积(0.968)。结论血清抑制素A是一种有效的孕中期产前筛查血清标志物,孕中期血清学唐氏综合征四联筛查效率优于三联筛查。

p14^(ARF)和p27^(KIP1)基因甲基化与鼻咽癌的临床相关性研究

目的探讨鼻咽癌组织中p14ARF和p27KIP 1基因启动子区甲基化状态在鼻咽癌早期分子诊断和治疗中的作用。方法应用甲基化特异性PCR方法对65例鼻咽癌组织(鼻咽癌组)和30例正常鼻咽上皮组织(对照组)中的p14ARF和p27KIP 1基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组中p14ARF和p27KIP 1基因启动子区甲基化阳性率分别为18.5%(12/65)和61.5%(40/65),两者总检出率为67.7%(44/65);而对照组中均未检测到p14ARF和p27KIP 1基因启动子区甲基化;鼻咽癌组中p14ARF和p27KIP 1基因启动子区甲基化与其临床分期和病理特征均无明显相关性(P>0.05)。同时,p14ARF基因甲基化和p27KIP 1基因甲基化无明显相关性(r=0.05,P>0.05)。结论 p14ARF和p27KIP 1基因甲基化可能是鼻咽癌早期分子事件,可作为鼻咽癌发生的早期诊断指标及甲基化基因治疗的靶点。

一例软骨发育异常胎儿的遗传学分析

目的对1例软骨发育异常的胎儿进行遗传学分析,为产前诊断及评估其家庭的再发风险提供依据。方法对1例软骨发育异常的胎儿行G显带染色体核型分析、单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism-based arrays,SNP-Array)检测、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)及FGFR3基因突变检测。胎儿父母行外周血染色体核型分析、SNP-Array及FISH检测,以明确胎儿基因组变异的来源。结果胎儿脐血染色体核型为46,XY。脐血SNP-Array结果显示染色体Xp22.33区段存在3.7Mb微缺失,8q24.12区段存在538.4kb微重复,其缺失区段包含SHOX和ARSE等软骨发育相关基因;FGFR3基因未发生c.1138G>A/C突变。根据胎儿及其父母SNP-array检测和FISH验证,胎儿携带的8q24.12微重复遗传自母亲,Xp22.33微缺失为新发突变。结论 Xp22.33微缺失是造成胎儿软骨发育异常的遗传学因素,因其为新发突变,在其家庭复发风险低。

孕中期发现胎儿生长受限且产前诊断为Williams-Beuren综合征2例报告并文献复习

胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)是指受母体、胎儿、胎盘等病理因素影响,胎儿生长未达到其应有的遗传潜能,通过产前超声估测胎儿体重或腹围低于相应胎龄第10百分位诊断,常是导致围产儿死亡和患病的重要原因,还可能带来远期不良结局[1]。Williams综合征(williams syndrome)也称Williams-Beuren综合征(WBS)。

产前诊断22q11.2区域微重复11例表型分析

目的分析11例22q11.2区域微重复胎儿的产前诊断结果及出生后表型特征。方法2016年1月至2020年2月在杭州市第一人民医院进行产前诊断、染色体核型以及染色体微阵列分析(CMA)者共2969例,结果为22q11.2区域微重复胎儿共11例。对胎儿表型、遗传学结果、妊娠结局及出生后临床表现进行回顾性分析。结果11例胎儿在22q11.2区域内有经典的3.0 Mb微重复[即腭面心综合征(DiGeorge and velocardiofacial syndromes,DGS/VCFS)]6例、1.5 Mb近端微重复1例及远端小片段微重复4例。家系遗传背景:遗传7例,新发2例,未验证(拒绝验证)者2例。胎儿超声检查显示:结构异常2例(室间隔缺损和无脑儿),胎儿生长受限2例,无结构异常7例。妊娠结局:引产4例,其中2例为产科筛查高风险、经典的3.0 Mb微重复、超声检查未见异常,1例为高龄、经典的3.0 Mb微重复、超声检查诊断为胎儿生长受限,1例为胎儿超声检查异常、远端小片段微重复、超声检查无脑畸形;足月分娩7例(经典的3.0 Mb微重复3例、1.5 Mb近端微重复1例及远端小片段微重复3例),出生后均进行随访,异常表型3例(生长发育落后等),无明显异常表型4例。结论22q11.2微重复胎儿的临床表型无特异性,出生后表型多样,需加强专业遗传咨询和长期随访,孕妇及其家属需充分了解可能出现的临床表型并做出知情选择。

17例骨骼发育异常胎儿的产前诊断与遗传分析

目的探讨骨骼发育异常胎儿的产前遗传学检测策略。方法收集2015年12月至2019年11月在浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院产前超声检查中检出骨骼发育异常并行遗传学检测的17例胎儿的资料,分析遗传学检测结果和妊娠结局。结果12例胎儿股骨长/足底长<0.9,13例通过遗传学检测找到骨骼畸形的病因,包括1例染色体非整倍体、3例致病性微缺失微重复、9例基因变异,涉及FGFR3、COL1A2、GPX4及ALPL基因。结论对产前超声股骨短小的胎儿,在染色体核型和微阵列分析基础上,对FGFR3基因及骨病相关基因进行测序可提高阳性检出率。