臭氧和臭氧水消炎杀菌在治疗人体伤口疾病中的应用

文章综述了国内外溶解臭氧水对微生物、皮肤伤口炎症的控制效果和人体应用的安全性、已有产品的应用情况和所需改进的状况,为在中国普及和应用以氧气为原料、无化学残留溶解臭氧水对人体皮肤、粘膜的伤口和牙齿的无痛消毒方法奠定基础。臭氧水冲洗伤口除杀灭有害微生物外,还能有效抑制人体组织炎症,是结合杀菌和消炎为一体的无化学残留无痛杀菌消炎剂,值得在中国普及和应用。

小分子透明质酸在老年皮肤粘膜保健及炎症防御中的应用

透明质酸是一种酸性粘多糖,根据分子量大小又分成大、中、小分子透明质酸。大、中分子透明质酸作为皮肤保健美容产品已被皮肤保健领域广泛接受,但近年来容易被皮肤粘膜吸收的有生物活性的小分子透明质酸日益受到重视,其功能明显优于大、中分子透明质酸,尤其是小分子透明质酸有可以促进皮肤抗微生物感染和自身防护能力的特殊功效。本文针对小分子透明质酸的制备方法及其在老年皮肤粘膜保健和皮肤粘膜炎症防御方面的应用进行综述。

Klac PNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达

嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的目的PNP基因连接至分泌表达载体pBSA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43。结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL。为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃。在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了12%。来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础。

新型轮式传气-膜生物反应器处理生活污水

通过轮式拖带传气法制备水中高浓度溶解氧,并结合膜生物反应器,开发轮式传气-膜生物反应器并应用于生活污水处理。结果表明,相对普通曝气法,轮式拖带传气法能够明显提高传氧速率,并能够产生超饱和溶解氧(DO>100%),并推测轮式拖带气液传递机制。通过传气转轮为好氧微生物快速生长提供充足的溶解氧,同时通过环形水流设计形成不同溶解氧浓度梯度的功能区并对膜组件产生冲刷清洗作用,提高溶解氧利用效率并减少膜污染。此新型轮式传气-膜生物反应器能够有效去除生活污水中的COD和氨氮,出水水质稳定,达到中水回用标准。

3种口腔用臭氧水生成装置性能的研究

目的研制15腔用的臭氧水生成装置，检测其生成臭氧水的安全性、稳定性和杀菌效果。方法制造3种15腔用的臭氧水生成装置的样机，分别检测生成臭氧水的浓度、pH值、溴酸盐和亚硝酸盐含量，以及臭氧气体泄露情况、臭氧水中细菌的含量及通过试管内定量杀菌试验检测臭氧水的杀菌率。结果成功制造了3种口腔用臭氧水的生成装置——臭氧漱口水器、臭氧刷牙器、氧气源臭氧冲洗机，可在水温18~28℃范围内生成浓度分别为0．5-1．29mg／L、0．38--0．50mgm和1．8-3．2mg／L的稳定溶解的臭氧水，无气体臭氧泄漏。并且无论臭氧水浓度高低，水均呈中性，溴酸盐和亚硝酸盐的含量也低于国家饮用水标准，且对自来水有天然杀菌作用，生成臭氧水为无菌水。体外的试管内杀菌实验证实3种装置生成的臭氧水是一种高效、快速的杀菌剂。结论研制的口腔用臭氧水生成装置可以制备出安全、稳定且具有高效杀菌作用的臭氧水。

人血浆抗利尿激素放射免疫分析法

用抗利尿激素抗血清建立人血浆抗利尿激素放射免疫分析法,用Iodogen法制备标记化合物^(125)I-sAVP,比放射强度达1369mCi/mg,-25℃可储存1个月。标准曲线灵敏度为0.15pg/管,血浆AVP最小可测量为0.6pg/ml,测定范围为0.6～11.0pg/ml。用丙酮—石油醚法提取血浆AVP,回收率为75.6％,批内和批间变异系数分别为9.8％和16.8％,提示提取是放射免疫法测定人血浆AVP的必须步骤。本法所得结果能充分反映正常人血浆AVP的生理波动。

流感病毒及其疫苗传代细胞制备研究进展

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,目前,对流感病毒预防尚无十分有效的方法,接种流感疫苗是预防流感病毒传播的主要手段之一。采用生物反应器传代细胞培养不但能快速提供高质量疫苗来应对随时爆发的流感,而且基于传代细胞培养的流感病毒与临床样本更为相似,并能避免受染鸡胚感染的危险性。因此可利用传代细胞培养来规模化生产更为高效的流感疫苗。以下主要从流感病毒及其危害,传代细胞制备流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备流感疫苗的前景和展望等方面做一综述。

胰高血糖素样肽-1及其类似物的生物学活性测定方法

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)因其独特的生理功能成为治疗2型糖尿病最有潜力的药物之一,有很好的开发前景。本文对GLP-1及其类似物的生物学活性,如稳定性、免疫学活性、体外和体内生物学活性的测定方法进行了综述,为GLP-1及其类似物的应用开发研究提供参考。

生物活性透明质酸片段治疗慢性咽炎初步探讨

目的探讨生物活性透明质酸片段短期治疗慢性咽炎的临床效果。方法将68例慢性咽炎患者按简单随机法分为两组，治疗组48例采用生物活性透明质酸片段在间接喉镜下长针注射器直接喷涂咽部和经鼻喷人咽部治疗，对照组20例采用大分子透明质酸间接喉镜下长针注射器直接喷涂咽部和经鼻喷入咽部治疗，比较两组治疗3～5d后症状和体征改善情况。结果（1）临床症状改善情况：治疗3d后，治疗组显效32例，有效16例，总有效率100％，对照组有效4例，总有效率20％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；治疗5d后，治疗组显效48例，总有效率100％，对照组有效12例，总有效率60％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）临床体征改善情况：治疗5d后，治疗组显效36例，有效12例，总有效率100％，对照组有效4例，总有效率20％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论生物活性透明质酸片段能迅速抑制咽喉部炎症，是治疗慢性咽炎的有效制剂。

35 kDa透明质酸片段B-HA对白细胞移走与活性氧水平的影响

旨在开发一种组织渗透性好的35 kDa生物活性透明质酸片段(bioactive hyaluronic acid fragment,B-HA),并围绕着B-HA对白细胞移走与活性氧水平的影响展开研究,探究其临床抗炎机制,为B-HA在临床领域的应用提供试验依据。使用重组人透明质酸酶PH20切割高分子量透明质酸,制备低分子量35 kDa的透明质酸片段B-HA;使用伽马相机动态采集小鼠体内放射性元素标记的99m Tc-B-HA的组织分布;使用最接近人体临床研究的新鲜提取的人外周血中性粒细胞和单个核细胞(淋巴细胞为主),采用琼脂糖微滴法探究B-HA对人中性粒细胞和单个核细胞移走的影响。99m Tc-B-HA组织分布显示,B-HA静脉注射后血液半衰期仅为5 min,除绝大部分进入代谢器官肝脏,其余大部分分布在淋巴器官脾脏;300μg/mL的B-HA促进了新鲜提取的人外周血单个核细胞移走(P<0.05),300μg/mL的B-HA在有(P<0.001)和没有(0.001<P<0.05)内毒素LPS存在的情况下均明显抑制外周血中性粒细胞的移走,40μg/mL的B-HA抑制了人外周血中性粒细胞产生活性氧水平(P<0.01)。

重组人碱性磷酸酶表达及其调节人白细胞释放TNF-α活性研究

为获得高纯度糖化蛋白人肠碱性磷酸酶(IAP)并研究其新生物活性和药学意义,采用黑曲菌和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达嵌合人肠碱性磷酸酶(recAP),获得稳定表达细胞株和高纯度recAP。recAP呈剂量依赖型灭活内毒素(LPS),使致炎物质ATP脱磷产生终产物腺苷。利用新鲜提取的人类白细胞和脐静脉内皮细胞系(HUVECs)建立抗炎生物活性模型。ELISA结果表明,recAP在LPS存在或不存在情况下均明显抑制TNF-α分泌,ATP脱磷终产物腺苷明显抑制TNF-α分泌。非LPS依赖的recAP抑制人类白细胞TNF-α分泌是一种碱性磷酸酶新活性测定方法。

炎症控制和创口治疗护理临床效果研究

目的探讨抗炎高浓度溶解臭氧水和抗炎生物活性透明质酸（B-HA）和治疗护理创口的临床效果和意义。方法本文作者采用公认的局部反复冷敷创口的炎症控制方法为阳性对照，研究了抗炎高浓度溶解臭氧水（1．5-2．5mg／L）和B—HA（1％）治疗护理创口的临床效果。结果抗炎高浓度溶解臭氧水和B．HA治疗护理创口的临床效果与局部反复冷敷相同。结论高浓度溶解臭氧水和B—HA治疗护理创口疗效明显，对临床实践和家庭护理均有实际应用价值。

生物活性透明质酸B-HA牙膏对青春期牙龈炎控制效果研究

目的研究生物活性透明质酸(bioactive hyaluronic acid,B-HA)牙膏刷牙治疗青春期牙龈炎的效果。方法纳入青春期牙龈炎患者40例,随机分为试验组和对照组(n=20)。试验组采用含有1%B-HA的牙膏刷牙,2次/d;对照组采用普通牙膏(牙膏成分除透明质酸外成分均一致)刷牙,2次/d。记录出血指数(bleeding inde,BI)、探诊深度(probing depth,PD),并比较2组龈沟液中天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)浓度变化并进行统计学分析。结果试验组第3天和第7天的AST含量低于对照组(P<0.05);试验后第3、7天试验组龈沟液中AST浓度均较其治疗前降低(P<0.05,P<0.01),对照组试验后第3天龈沟液中AST浓度较其治疗差异无统计学意义(P>0.05),第7天有所降低(P<0.05)。结论生物活性透明质酸B-HA牙膏能改善青春期牙龈炎患者的临床指标,降低龈沟液中AST含量,相对于普通牙膏更为有效快速。

小分子量透明质酸片段的4种分子量检测方法的对比研究

目的建立小分子量透明质酸片段的分子量及其分布的测定方法。方法采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、琼脂糖凝胶电泳法、凝胶渗透色谱与多角度激光散射联用(GPC-MALLS)以及特性粘度法对透明质酸注射液的分子量进行测定。结果GPC-MALLS法得到的分子量变异系数小于5%,测定结果精确度较高,分布宽度Mw/Mn较小;HPGPC法得到的分子量偏低且分布宽度Mw/Mn较大,但结果的变化趋势与GPC-MALLS法及电泳的直观结果相一致;特性粘度法对于介于10~100kDa分子量范围内的样品,测得的数值差异较大。结论GPC-MALLS结合凝胶电泳法是最好的测定小分子透明质酸片段的分子量和分布范围的方法。

低分子透明质酸片段对红细胞聚集诱发作用及其种属特异性

旨在开发一种组织渗透性好的35 kDa透明质酸片段(HA35),探究HA35对红细胞的生物活性作用及其种属特异性。分别利用足量或轻度过量的重组人透明质酸酶PH20和牛提取透明质酸酶PH20,酶解切割平均分子量1600 kDa的透明质酸原料,制备一种能通过220 nm孔径的平均分子量35 kDa的透明质酸片段HA35,并进一步使用HA35与人和不同动物的红细胞共同孵育,研究HA35对红细胞的生物活性作用及其种属特异性。结果表明:HA35和其他平均分子量不同的透明质酸片段,通过CD44受体诱发人和多种实验动物的红细胞呈钱串状聚集,但存在种属特异性。HA35和其他平均分子量不同的透明质酸片段,诱发红细胞钱串状聚集的透明质酸片段的最小浓度与其分子量呈负相关,这种负相关关系首次被用来准确测定低分子透明质酸片段的分子量。HA35不仅诱发人和动物红细胞钱串状聚集,还诱发红细胞沉降率增加,被用于HA35产品的生产质控。

应用一次性生物反应器大规模培养BHK-21细胞

采用20mL、220mL、10L、100L一次性激流&灌注式生物反应器连续灌注培养BHK-21细胞,通过控制pH、DO等工艺参数,得到稳定的培养BHK-21细胞的大规模培养工艺。从20mL、200mL、10L到100L实现了细胞数的逐级放大,认为该工艺为细胞反应器大规模生产动物疫苗奠定了技术基础。

激流—灌注式反应器大规模培养Vero细胞工艺研究

反应器培养Vero细胞以微载体(Cytodex等载体)及NBS公司CellGen310酯片培养为主,培养工艺对设备、技术要求高,一次性投资大,微载体和酯片处理繁琐,耗材价格昂贵,生产成本高。实验采用一次性激流-灌注式生物反应器大规模培养Vero细胞,通过控制DO、pH等条件,开发出便捷、稳定的大规模培养工艺,为疫苗工业采用大规模细胞培养工艺生产疫苗奠定基础。

35 kDa透明质酸片段对脂多糖致犬炎症的作用

为了探究35 kDa透明质酸片段(bioactive hyaluronic acid,B-HA)对犬的生物活性作用,选用比格犬作为试验对象,建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致犬炎症模型。选用30只雄性比格犬,随机分为LPS+生理盐水组(样本数n=15)和LPS+B-HA组(n=15),分别检测LPS注射前及注射后3 h的犬血中性粒细胞和淋巴细胞水平、血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)和白介素17(Interleukin-17,IL-17)水平以及相关临床体征。结果表明:B-HA明显抑制了LPS诱导的犬血中性粒细胞激活后吸附血管壁而引起的血中性粒细胞数下降,提示B-HA抑制了LPS诱导的外周血中性粒细胞激活并透过血管壁向炎症区域移走和聚集;B-HA注射抑制了LPS诱导的血清炎症因子TNF-α和IL-17的升高。

调节慢性炎症防治衰老相关疾病的研究进展

衰老是应激、损伤、感染、免疫反应衰退以及代谢障碍等综合作用积累的结果。细胞在衰老的过程中会分泌大量的炎性因子。相关研究表明,老年人的皮肤及粘膜对细菌、病毒感染、外伤等等方面的抵抗和防御能力明显低于青年人,炎性因子不断增多,加速细胞衰老。由此可见,控制慢性炎症可能是干预衰老的有效途径。生物活性透明质酸可能通过诱导防卫素分泌和与CD44/TLR4受体结合,抑制细菌生长和炎症进展,从而发挥抗衰老作用。本文对有关慢性炎症和衰老之间的关系的研究进行综述,探讨生物活性透明质酸对慢性炎症的调节作用及其抗衰老机制。

富含GC的DNA片段在哺乳动物细胞基因超高表达调控中的重要作用

通过在结构基因或基因启动子的5’和/或3’端加入天然1.006kb或人工合成0.733kb的富含GC的DNA片段(包括内含子),所构建的稳定表达载体在实验室规模实现了20多种蛋白质在哺乳动物细胞中超高表达.该实验提供了证据表明,非编码的富含GC的DNA片段(包括内含子)是一种超级"染色质开放元件",在哺乳动物细胞基因表达中起关键作用.实验还进一步表明,哺乳动物细胞的基因表达调控在染色质水平主要与DNA的一级结构,即DNA的GC含量有关.