花生AhFAD8基因的克隆、表达及活性分析

α-亚麻酸对促进人体健康具有重要作用,花生ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD3、FAD7和FAD8)是催化亚油酸(18 2,LA)脱氢生成亚麻酸(18 3,ALA)的关键酶。研究利用电子克隆得到花生AhFAD8全长基因,采用RTPCR方法从花生未成熟种子中扩增出AhFAD8的全长cDNA,连接到毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中,转化毕赤酵母GS115得到工程菌GS115-AhFAD8并进行诱导表达,采用气相色谱分析GS115-AhFAD8脂肪酸成分,结果表明,工程菌GS115-AhFAD8中亚油酸去饱和率由25.9%上升到32.5%,上升25.5%,说明在毕赤酵母中表达的花生AhFAD8蛋白具有一定脱氢酶活性。

对甜菜夜蛾具有高毒力的Bt菌株筛选

依据对夜蛾科具有高毒力cry基因的序列,设计特异性引物对实验室保存的对鳞翅目害虫高效的菌株资源进行筛选。通过比较质粒图谱,对其多样性进行了研究。进一步测定Bt菌株对甜菜夜蛾的杀虫活性,筛选出高毒力的菌株。从192株菌株中筛选出15株对夜蛾科害虫具有高活性的菌株,包含的基因类型有:cry1A、cry1C、cry2A、cry9和vip3A类基因,晶体形态包含:双锥体形、方形、球形;其中2株菌表达130ku和60ku的蛋白,1株菌表达130ku和70ku的蛋白,其余菌株均表达约130ku的蛋白;这15株菌通过质粒图谱分析分为8种类型;3株菌对甜菜夜蛾幼虫具有高毒力,其中菌株PS3-C2对甜菜夜蛾LC50为1.87μg/mL。本研究成功筛选出对甜菜夜蛾具有高毒力的菌株3株,其中PS3-C2菌株与对照菌株KN11活性相当,为新型杀虫基因分离克隆与制剂的研发奠定了基础。