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1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析
被引量:
6
1
作者
付向晶
王丹阳
+9 位作者
王兴龙
张渭东
宋祥军
刘阳坤
唐文雅
慕国辉
刘海金
贺生芳
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期1773-1779,共7页
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533...
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
NSP2基因
GP5基因缺失
序列分析
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职称材料
1种高效纳米抗体生产方法的建立
2
作者
贺生芳
付向晶
+5 位作者
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1487-1493,共7页
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳...
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
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关键词
纳米抗体
融合标签
自剪切Intein
表达纯化
双抗夹心ELISA
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职称材料
题名
1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析
被引量:
6
1
作者
付向晶
王丹阳
王兴龙
张渭东
宋祥军
刘阳坤
唐文雅
慕国辉
刘海金
贺生芳
杜恩岐
杨增岐
机构
西北农林科技大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期1773-1779,共7页
基金
"十一五"国家科技支撑计划项目(2006BAD06A08)
文摘
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
NSP2基因
GP5基因缺失
序列分析
Keywords
porcine reproductive and respiratory syndrome virus
NSP2 gene
deletion in GP5gene
sequence analysis
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
1种高效纳米抗体生产方法的建立
2
作者
贺生芳
付向晶
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
机构
西北农林科技大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1487-1493,共7页
基金
西北农林科技大学引进人才科研启动基金(Z111021006)
文摘
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
关键词
纳米抗体
融合标签
自剪切Intein
表达纯化
双抗夹心ELISA
Keywords
nanobody(Nb)
fusion tags
self-cleavage intein
expression and purification
doubleantibody sandwich ELISA
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析
付向晶
王丹阳
王兴龙
张渭东
宋祥军
刘阳坤
唐文雅
慕国辉
刘海金
贺生芳
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
下载PDF
职称材料
2
1种高效纳米抗体生产方法的建立
贺生芳
付向晶
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
下载PDF
职称材料
已选择
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