右旋糖酐40制备过程中细菌内毒素含量的影响因素

右旋糖酐40生产中分离纯化采用乙醇沉淀和超滤方法,将细菌内毒素作为分离纯化的一项指标,对影响因素进行探究,将细菌内毒素含量引入右旋糖酐40原料药产品标准,并且达到国际标准。随着乙醇浓度的增加,相应沉淀产品的细菌内毒素含量逐渐降低;在乙醇分步沉淀中,随着乙醇浓度逐级提高,分离产品的细菌内毒素含量也在降低。分离纯化用水和环境因素均会影响右旋糖酐40分离纯化的细菌内毒素指标。乙醇沉淀分离纯化的右旋糖酐40产品,细菌内毒素含量均<6.00 EU/g,最低含量<3.00 EU/g,优于国际标准(≤10 EU/g),重均分子量和分子量均符合《中国药典》质量标准。100 kDa+20 kDa二膜组合超滤分离纯化的右旋糖酐40的细菌内毒素含量可以达到10 EU/g以下。100 kDa+20 kDa+50 kDa三膜组合超滤分离纯化,右旋糖酐40的细菌内毒素含量达到3 EU/g以下,重均分子量及分子量分布达到《中国药典》标准。改进右旋糖酐40生产工艺,提高产品品质,细菌内毒素含量引入右旋糖酐40原料药质量指标,使其达到和超过国际最高质量标准。

碱性木聚糖酶产酶菌株—芽胞杆菌M-26的选育

从造纸厂的废水中采集样品,以木聚糖为唯一碳源初筛菌株,然后用刚果红透明圈平板选育,最后通过摇瓶发酵选育出碱性木聚糖酶高产菌株M-26,基础产酶活力达330 IU/mL;通过菌种形态学、培养特征和16S rDNA鉴定为短小芽胞杆菌;酶学性质研究表明:最适作用温度和pH分别为55℃和8.0,且具有一定的耐碱性;通过发酵条件研究,M-26最高产酶活力可达625 IU/mL。

M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

从Bacillus pumilus M-26发酵液中分离纯化碱性木聚糖酶,进行酶学性质研究,同时制备工业用碱性木聚糖酶制剂。首先将M-26发酵液进行硫酸铵盐析,制备工业用碱性木聚糖酶干品;然后进行sephadexG-25层析脱盐和cellulose DE-52层析得以纯化。硫酸铵的饱和度50%,酶制剂的酶活可达9 000 IU/g,收率为85%;分离纯化使酶的比活为126.32 IU/mg蛋白,纯化倍数为19.89,酶的回收率12.83%;分子量约为20 ku;M-26碱性木聚糖酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 8.0,具有一定的耐碱性;该酶无纤维素酶活性,Fe2+对其有激活作用;Mn2+、Zn2+、Fe3+、Cu2+对其具有抑制作用。短小芽胞杆菌M-26碱性木聚糖酶具有纸浆生物漂白应用前景。

短小芽胞杆菌产碱性木聚糖酶发酵条件的研究

碱性木聚糖酶在碱性条件下催化水解木聚糖,广泛应用于造纸、纺织等领域。着重对短小芽胞杆菌M-11产碱性木聚糖酶的发酵条件进行初步的探索。研究了菌株的生长曲线、确定最佳接种龄为16 h、最佳接种量为1%;确定最适碳源浓度为7%、最适单一氮源为氯化铵、其浓度为1.0%、最适无机盐为氯化铁、其浓度为3 mmol/L;在此基础之上进行6因素3水平的正交试验,确定最适产酶培养基组成:麸皮5%,接种量3%,氯化铵1.2%,氯化铁3.5 mmol/L,硫酸镁0.03%,氯化钠5 mmol/L,磷酸氢二钾0.4%;最适培养条件:接种龄16 h,初始pH 8.0,温度37℃,300 mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min,发酵周期48 h。通过对发酵条件的优化使发酵液酶活达613 IU/mL。无机氮源为其最适氮源,因此短小芽胞杆菌M-11在碱性木聚糖酶的产品开发上优于短小芽胞杆菌M-26。

木聚糖酶的开发与应用

木聚糖酶是可以降解木聚糖的水解酶,分为内切酶和外切酶。木聚糖是以木吡喃糖为单位的由β-1,4键连接的半纤维素,在自然界中含量占生物量的30%。不同微生物产生的木聚糖酶,具有不同的酶学特征及应用领域。利用微生物发酵开发木聚糖酶应用于造纸工业、食品工业、饲料工业、制药工业等众多领域,既有利于资源利用,又利用环境保护。

纳豆激酶的分离纯化及酶学性质研究

目的 分离纯化纳豆激酶并进行酶学性质研究。方法 从纳豆中分离纯化具有纤溶活性的纳豆激酶 ,采用氯化钠溶液浸提、硫酸铵盐析及 sephadex G- 1 5 0凝胶过滤分离纯化纳豆激酶 ,纯化倍数 5 0倍 ,纤维蛋白平板法测其比活。结果 纳豆激酶比活为 6 0 0 U·mg-1,回收率 40 %。酶学性质研究表明 ,最适反应温度为 5 0℃ ,5 5℃以下稳定 ,最适反应 p H为 8.0 ,在 p H 6～ 1 0溶液中基本稳定 ,分子量约 2 8k D。酶作用机理初探表明 ,纳豆激酶不仅具有纤溶性 ,还有抗凝血性。

核酸叶面肥对大田小麦生理效应的研究

核酸叶面肥是酵母RNA在麦芽根酶作用下水解,以核苷为主的核酸小分子制备而成。在前期对小麦喷施浓度及对小麦干旱胁迫条件研究基础之上,为进一步对核酸叶面肥对大田小麦生理效应进行研究。研究表明:核酸肥在碳水化合物调运方面的作用显著,主要表现为提高了源端的碳水化合物输出能力和灌浆中后期库端淀粉的累积,提高了小麦产量和面筋品质,为核酸叶面肥的大面积推广应用做好大田试验基础。

麦芽根在核酸水解中的应用研究

研究麦芽根中酸性磷酸单酯酶 ,5’ 磷酸二酯酶及核酸水解酶的酶学特性 ,以 5’ 核苷酸和核酸水解率为指标 ,初步确定了核糖核酸 (RNA)在麦芽根作用下水解为单核苷酸的最适条件 :温度、PH值。

核酸叶面肥在蔬菜生产中应用

核酸叶面肥是以核酸为原料生产的生物有机叶面肥,主要成分为核苷、核苷酸、嘧啶和嘌吟等核酸小分子、蛋白质、糖和矿质元素,其无公害,无污染,适于发展绿色食品生产。以油麦菜作为研究对象,进行叶绿素、根系活力、株重、叶数和叶长经济性状研究,确定核酸叶面肥的最适喷施浓度,为核酸叶面肥在蔬菜生产中的应用奠定基础。

腺苷-β-环糊精包合物的研制

目的研究腺苷-β-环糊精包合物的制备方法。方法对包合条件进行选择;考察包合物形态以及包合物在50g·L-1葡萄糖溶液中的体外释放行为。结果确定包合条件为,包合主∶客分子比为1∶2,包合时间为2h,温度为50℃,包合率达55%以上,包合物在50g·L-1葡萄糖溶液中4h释放为95%。结论腺苷-β-环糊精包合物可明显提高腺苷的稳定性,具有一定的缓释作用。

碱性木聚糖酶在麦草浆漂白中的应用研究

将碱性木聚糖酶应用于造纸工艺中,使传统的化学漂白向着生物漂白改进,以减少废水中含氯有毒物的排放,有利于环境保护。用麦草浆作为研究对象,进行碱性木聚糖酶预处理麦草浆的条件研究(浆浓、时间、pH、温度及酶用量)和生物漂白工艺条件研究。碱性木聚糖酶用于纸浆生物漂白的工艺条件:5%浆浓,1h,pH9.6,50℃,20IU/g绝干浆,5.5%有效氯用量。

右旋糖酐发酵条件的研究

右旋糖酐广泛应用于医药、食品工业。本研究着重对肠膜状明串珠菌Lm-1226产右旋糖酐发酵条件进行初步的探索。研究了菌株的生长曲线、确定最佳接种龄为36h、最佳接种量为10%;确定最适碳源浓度为18%、最适氮源浓度为0.30%~0.32%、无机盐最适浓度:Na_2HPO_40.22%~0.24%,KH_2PO_40.13%~0.15%;在此基础之上进行四因素三水平的正交试验,确定最适产酶培养基组成:白沙糖20%、接种量10%、蛋白胨0.30%、磷酸氢二钠0.24%、膦酸二氢钾0.14%;最适培养条件:接种龄36h,初始p H7.0,温度25℃,发酵周期32 h。通过对发酵条件的优化使发酵液右旋糖酐达8.5 g·100 mL^(-1),蔗糖的利用率90%。

核酸叶面肥制备的研究

核酸类小分子对植物具有增强根系活力,对麦芽根中核酸酶的提取及酶动力学性质进行研究,将酵母核糖核酸降解为核苷为代表的核酸类小分子,制成核酸叶面肥。首先对麦芽根中核酸酶的提取及酶学性质进行研究;其次选择适宜的RNA水解条件:RNA浓度2%,pH为5.6,温度为65℃,时间为3.5h;最后将水解液进行后处理:升温至100℃,煮沸10m in,灭酶,同时将pH调至7.0,放置3h,冷却沉降,除杂、浓缩、喷雾干燥得核酸叶面肥成品。通过研究取得核酸叶面肥的制备工艺。

右旋糖酐蔗糖酶酶学性质研究

肠膜状明串珠菌Lm-1226发酵产右旋糖酐蔗糖酶,发酵液经过硫酸铵盐析分离提取右旋糖酐蔗糖酶,进行酶学性质研究。首先进行Lm-1226发酵产右旋糖酐蔗糖酶产酶进程研究,28h酶活力最高。盐析分离提取右旋糖酐蔗糖酶,硫酸铵饱和度15%时酶活力最高。酶学性质研究,右旋糖酐蔗糖酶作用的最适pH和温度分别为pH5.4和30~35℃;在55℃以下相对稳定,在pH4.6~p H8.0范围内相对稳定,具有较好的酸碱稳定性;。Mn2+具有显著的激活作用,对酶具有较强抑制作用。

Mn^(2+)对DNS法测定右旋糖酐发酵液中果糖含量的影响

在Mn^(2+)对肠膜状明串珠菌发酵产右旋糖酐的影响研究中出现的果糖和右旋糖酐随Mn^(2+)浓度变化的不一致而发现问题;随后通过Mn^(2+)对右旋糖酐蔗糖酶作用的影响研究中找出了DNS测定果糖是产生问题的原因;然后通过Mn^(2+)与DNS的发应进一步证实,Mn^(2+)本身的氧化还原型性导致其与DNS试剂产生反应而影响了果糖的测定;最后通过检测时以含有Mn^(2+)的培养基作为相对应发酵液的空白对照,检测结果表明果糖和右旋糖酐随Mn^(2+)浓度变化一致,但是同一发酵液样品中果糖含量和右旋糖酐含量的多少还存在问题,说明仅仅通过改变检测空白还不能消除Mn^2对果糖检测的影响,还需要进一步的研究。在利用DNS法测定样品中的还原糖时,一定要考虑具有氧化还原性的其他成分对检测结果的影响。

右旋糖酐水解改善右旋糖酐分子量分布的研究

在右旋糖酐原料药生产工艺改进研究中,遇到右旋糖酐发酵水平降低时,右旋糖酐盐酸水解的还原糖变化和重均分子量关系异常。随后进行了蔗糖和右旋糖酐盐酸水解的竞争性、右旋糖酐酶专一性、不同分子量右旋糖酐盐酸水解特异性、盐酸水解和右旋糖酐酶解制备右旋糖酐40等研究。结果表明蔗糖水解具有极强的竞争性,同一条件下,蔗糖的盐酸水解是右旋糖酐的8倍;右旋糖酐酶不降解蔗糖,专一性地降解右旋糖酐;从T-5到T-2000的盐酸水解基本保持在同一水平,T-10000远远高于其他;盐酸水解制备的右40分子量分布为,重均分子量33000~36000,10%大分子<120000,10%小分子>5000;右旋糖酐酶酶解制备的右旋糖酐分子量分布为,重均分子量38000~42000,10%大分子<110000,10%小分子>7000,右旋糖酐酶解制备右40可以改善分子量分布;盐酸水解制备右40的收率大于右旋糖酐酶解制备右40,因此右旋糖酐酶解制备右40等原料药工艺需要进一步研究。

Bell氏面瘫106例疗效观察

目的 :根据面神经电图 (ENOG)检查 ,将Bell氏面瘫分成两组 ,观察三种治疗方案的疗效。方法 :A组示ENOG患侧损失在90 %以下。B组示ENOG患侧损失在 90 %以上 ;Ⅰ表示用扩血管营养神经药物治疗组 ,Ⅱ表示用扩血管营养神经药物加用皮质激素治疗组 ,Ⅲ表示在药物治疗的基础上加用面神经减压术治疗组。结果 :A组药物治疗好于B组 ,且部分B组患者需手术治疗。AⅡ、BⅡ组的药物疗效好于AⅠ、BⅠ组。结论 :以 90 %为ENOG检查的临床值是准确的。ENOG损失在 90 %以下时 ,用药物治疗大多可获得好的疗效。ENOG损失在 90 %以上时 ,药物治疗虽可获得一定的疗效 ,但仍有部分患者需手术治疗。