落新妇苷通过促进IL-10表达保护小鼠缺血再灌注损伤肝脏

目的:观察落新妇苷对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用,对其机制进行初步探讨。方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(I/R)、落新妇苷小剂量(10mg/kg)干预组和落新妇苷大剂量(40mg/kg)干预组。缺血前24h和1h干预组小鼠腹腔注射分别给予10或40mg/kg的落新妇苷,建立肝左、中叶70%部分肝缺血再灌注模型,模型组和假手术组给予同样体积的生理盐水。小鼠肝脏左叶缺血90min、再灌注6h后各实验组采集血液和肝脏组织样本。检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)的活性作为肝功能损伤的指标,同时用ELISA检测肝组织中MPO含量。观察肝脏组织病理学改变。Western印迹检测肝组织中IL-10蛋白含量,半定量RT-PCR检测IL-10 mRNA表达情况。结果:落新妇苷干预能有效降低部分肝脏热缺血再灌注小鼠血清ALT水平,能有效降低缺血肝脏中MPO含量,改善肝组织病理表现。干预组肝组织中IL-10蛋白表达与I/R模型对照组比较均渐次升高,与半定量RT-PCR结果相符(小剂量干预组P<0.05;大剂量干预组P<0.01)。结论:落新妇苷干预能减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤后的炎症反应,有效改善肝功能和肝脏病理损害;机制可能在于其能促进缺血再灌注损伤肝组织中IL-10的高表达。

双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞

目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,最长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.

落新妇甙对缺血再灌注损伤肝脏HO-1表达的影响

目的:通过观察落新妇甙对肝脏热缺血再灌注损伤中血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响,探讨其缺血再灌注保护作用的分子机制.方法:C57BL/6小鼠随机分为4组(n=8):假手术组(Sham)、模型组(I/R)、落新妇甙小剂量(10 mg/kg)干预组和落新妇甙大剂量(40 mg/kg)干预组.缺血前24和1 h干预组小鼠腹腔注射分别给予10或40 mg/kg的落新妇甙,建立肝左、中叶70%部分肝缺血再灌注模型,模型组和假手术组给予同样体积的生理盐水.小鼠肝脏左叶缺血90 min、再灌注6 h后各实验组采集血液和肝脏组织样本.检测血清中丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)活性,Western blot检测肝组织中核因子B(nuclear factor B,NF-B)和HO-1蛋白含量,半定量RT-PCR检测上述分子mRNA表达情况.结果:落新妇甙小、大剂量干预后血清ALT含量较I/R对照组均明显下降(假手术组:142U/L±25 U/L;模型组:3521 U/L±270 U/L;落新妇甙小剂量干预组:1766 U/L±179 U/L;落新妇甙大剂量干预组:1067 U/L±101 U/L,P<0.01);落新妇甙小、大剂量干预组肝组织中NF-B蛋白表达与I/R模型对照组比较均渐次降低;落新妇甙小、大剂量干预组肝组织中HO-1蛋白表达与I/R模型对照组比较均渐次升高,亦与半定量RT-PCR结果相符(假手术组:0.53 U/L±0.07 U/L;模型组:1.00 U/L±0.11 U/L;落新妇甙小剂量干预组:1.17 U/L±0.16 U/L;落新妇甙大剂量干预组:1.57 U/L±0.07 U/L小剂量干预组P<0.05;大剂量干预组P<0.01).结论:落新妇甙干预能降低缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)引起的血清A LT水平升高;落新妇甙干预能降低I R I肝组织中NF-B蛋白的高表达,促进IRI肝组织HO-1蛋白和mRNA的表达,显示其保护作用与促进HO-1的表达密切相关.

免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞及初步鉴定

目的：应用免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞,观察其分选效果,建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞（hMAPCs）的方法.方法：取健康成人志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,在自制培养基下贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A（GlyA）免疫微磁珠（miniMACS）负分选,锥虫蓝拒染实验计数MACS分选前后细胞活力.流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度;流式细胞仪分析培养细胞CD29、CD44、CD34和HLA-DR表达情况.结果：通过MACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约（5～10）×104/ml hMAPCs,分选后的hMAPCs细胞生长良好,最长传代到第20代.分选前后细胞活力分别为（96.7±1.7）%和（96.0±2.4）%,无明显差异;流式细胞仪分析获取的CD45-、GlyA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪检测hMAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%.结论：CD45、GlyA免疫微磁珠负分选可从骨髓中分离高纯度的hMAPCs;分选后hMAPCs在自行研制的培养基中有较强的增殖能力.

青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用Kamada’s"二袖套法"建立SD→SD大鼠原位肝移植模型,随机分为假手术组、对照组、低剂量(40mg/kg)和高剂量(80mg/kg)青藤碱组,分别观察移植术后1周存活率,检测术后2、6、12、24h血清ALT,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数(AI),RT-PCR检测肝脏组织中的TNF-α、IL-1β mRNA的含量,并观察移植肝脏病理学改变。结果:与对照组比较,青藤碱低剂量、高剂量组术后1周存活率显著提高(75%、75%vs12.5%,P<0.01);在各个时间点,青藤碱治疗组的ALT水平明显低于对照组(P<0.01),肝组织中的TNF-α、IL-1β mRNA表达与对照组相比均显著降低(P<0.01),肝脏病理学形态也明显改善。结论:青藤碱可以通过抑制TNF-α、IL-1β等炎症性细胞因子合成,抑制肝细胞凋亡,减轻肝细胞及肝窦内皮细胞的损伤,达到保护肝移植缺血再灌注损伤的效果。

补救性肝移植治疗小肝癌疗效分析

目的探讨符合Milan标准的原发性肝癌切除术后复发行肝移植治疗的可行性及意义。方法收集2000年1月至2008年10月肝癌肝部分切除术后复发小肝癌肝移植(salvage liver transplan-tation,SLT)13例,初次小肝癌(d≤5cm)行肝移植(primary liver transplantation,PLT)32例的资料进行回顾性比较分析。结果 SLT组手术难度、手术时间、术中失血量、住院时间及住院费用均超过PLT组,但围手术期两组并发症发生率无明显差异。术后随访(26±2.6)个月,SLT组和PLT组分别有4例(30.8%)和10例(31.3%)死亡。SLT组6个月、1年、2年生存率分别为84.6%(11/13)、76.9%(10/13)、69.2%(9/13),PLT组分别为93.8%(30/32)、87.5%(28/32)、68.8%(22/32)。结论首次部分肝切除对以后的肝移植手术无明显影响,小肝癌患者行肝部分切除术及补救性肝移植术均为较好的治疗方法。

快速康复外科理论在胆道外科围手术期的应用

目的探讨快速康复外科理论(FTS)在胆道围手术期应用的安全性及可行性。方法将我科收治的316例择期胆道手术患者,随机分为观察组(154例)和对照组(162例),比较两组的各项临床观察指标。结果观察组不同术式术后排气时间、切口愈合时间、住院时间均短于对照组(P<0.05),治疗费用和恶心呕吐、咽喉疼痛、肺部感染和尿路感染的发生率均低于对照组(P<0.05),两组其他并发症的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论快速康复外科理论应用于胆道外科手术安全可行,较传统围手术期治疗有明显优势,可加速患者的康复进程。

人骨髓来源多能成体祖细胞ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞的分化

目的:探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPCs)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性．方法:(1)间接共培养:将第4代ZHJ-MAPCs和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养．分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPCs的ALB、AFP、CK-18、CK-19等肝细胞特征性表型表达情况,并设阳性对照和阴性对照,计数阳性细胞比率;(2)直接共培养:将CFSE荧光(绿色)标记的第4代ZHJ-MAPCs与L02(密度均为1×107／L)按照各50％比例混合行直接共培养．5 d后用SABC-Cy3免疫荧光(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ—MAPCs表达ALB,AFP,CK-18的情况．同样设阳性对照和阴性对照．结果:(1)间接共培养:AFP在ZHJ-MAPCs间接共培养第1天即表现为强阳性,随后表达逐渐减弱．ALB在共培养第1天有可疑阳性,第3天出现较强的阳性,第5天达到高峰．CK-18在培养第1、3天检测均为阴性,至第5天开始出现阳性,第7天表达较前增强．CK-19在各时间点均为阴性着色．(2)直接共培养:胞质内呈黄色荧光ALB和CK18的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPCs在共培养5 d时出现较多,而AFP阳性表达则仅出现在极个别细胞,该结果与阳性对照细胞荧光表达类似．结论:人骨髓来源的ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化,且直接共培养有提前趋势．

人骨髓来源多能成体祖细胞与人肝细胞体外直接共培养向肝样细胞分化的实验研究

目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPCs)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性。方法直接共培养:将CFSE荧光(绿色)标记的ZHJ-MAPCs与L02(密度均为1×104/ml)按照各50%比例混合行直接共培养。5 d后用SABC-Cy3免疫荧光(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPCs表达ALB,AFP,CK-18的情况。并设阳性对照(单独培养的L02细胞)和阴性对照(单独培养未经诱导的ZHJ-MAPCs)。结果在共培养第5天检测ALB和CK18时出现较多胞浆内呈黄色荧光的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPCs,而在检测AFP时阳性细胞较少。结论ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02行直接共培养能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化。

颈部食管-胃吻合对患者心肺功能的影响

目的 探讨食管癌切除、颈部吻合术后对患者心肺功能的影响。方法 对 6 2例心电图正常患者连续心电监测 ,并用彩色多谱勒超声及肺功能仪对反映心肺功能的主要指标进行手术前、后发生变化的研究。结果 术前与术后心功能主要指标左室短轴缩短率 (FS)、E峰至室间隔间距(EPSS)、每次搏出量 (SV)、每分钟排血量 (CO)、射血分类(EF)、E峰速度 /A峰速度比值 (E/A) ,用力肺活量 (FC)、1秒钟用力呼气流量 (EFV1)、最大通气量 (MVV)、用力呼气流量(FEF)均有相应变化 ,随时间逐渐消失。结论 食管癌切除、食管 胃颈部吻合对心肺功能确有较大影响 。

簇毛麦3V染色体短臂特异分子标记的开发与应用

普通小麦野生近缘物种簇毛麦(Haynaldia villosa L.2 n=14,VV)3V染色体短臂(3VS)携带抗小麦条锈病基因。开发高密度的3VS特异标记是准确鉴定和追踪3VS、推进抗病基因转移和利用的重要基础。为了开发更多的均匀分布于3VS染色体臂不同区段的分子标记,本研究利用簇毛麦和小麦品种中国春参考基因组序列与基因注释信息,通过比较3VS与3AS、3BS、3DS同源基因序列内含子序列差异,选择同一内含子长度差异大于10%的区域开发了104个跨越内含子(intron targeting,IT)的分子标记,在簇毛麦、簇毛麦-硬粒小麦双二倍体、硬粒小麦中引1286、中国春、普通小麦-簇毛麦二体异附加系DA1V-DA7V、小麦-簇毛麦T3VS·3DL易位系中进行扩增,筛选出3VS特异、扩增条带清晰且稳定性好的IT分子标记43个。为了验证上述标记的有效性,选择位于3VS不同区段的12个标记对[DS3V(3D)×中国春ph1b]的F_(3)群体中的148个ph1b纯合的单株进行分析,共筛选得到6种类型涉及3VS的结构变异体。进一步利用GISH/FISH技术对上述材料进行鉴定,结果与分子标记结果相吻合,证明利用外源染色体特异分子标记可有效筛选涉及外源染色体结构变异体。

人骨髓间充质干细胞亚群ZHJ-MAPCs特征表型及细胞遗传学分析

目的:对经过CD45,血型糖蛋白-A免疫微磁珠体外负分选纯化并传代培养的ZHJ-MAPCs进行体外部分细胞学鉴定,了解其特异性标志物表达及增殖、传代过程中的遗传学稳定性。方法:实验于2004-01/12在珠江医院中心试验室完成。①原代冻存的ZHJ-MAPCs经复苏培养、传代。②利用流式细胞仪对其进行CD29,CD44,CD34和HLA-DR流式细胞分析,以对照管作为空白定标,计算10000个细胞,记录标本的阳性细胞百分率。③分别在传代至第6代和第13代时进行细胞核型分析了解细胞核型变化。④细胞计数及细胞活力检测方法:细胞数/mL=四个大方格总数/4×104×稀释倍数。细胞存活率=5g/L锥虫蓝染色阴性细胞/100个细胞/高倍镜×100。结果:①流式细胞仪检测结果:流式细胞仪检测ZHJ-MAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%。②细胞核型分析结果:ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征,染色体干系数目在第6,13代均为55～58条,占80%,染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间,镜下见细胞均发生染色体变异,且变异形态多样。结论:①ZHJ-MAPCs具有骨髓间充质干细胞的特征及较高的纯度。②ZHJ-MAPCs在增殖传代过程中表现出非正常二倍体特征,染色体数介于超二倍体和亚三倍体之间,染色体变异形态多样。

落新妇甙对肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景:肝脏是对缺血再灌注损伤最敏感的器官之一。黄酮类化合物落新妇甙可作为递氢体清除氧自由基,从而可能在减轻肝脏缺血再灌注损伤等方面发挥作用。目的:观察落新妇甙对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用,对其机制进行初步探讨。方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组、模型组、小剂量干预组和大剂量干预组。干预组小鼠于缺血前24h和1h分别给予10或40mg/kg的落新妇甙腹腔注射,然后建立70%部分肝缺血再灌注模型。采集血液和肝脏组织样本。检测血清丙氨酸氨基转移酶活性,ELISA测血清肿瘤坏死因子α水平,化学比色法测定肝组织中超氧化物歧化酶、丙二醛含量。肝脏组织病理学检测。Westernblot检测肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白含量,RT-PCR检测肿瘤坏死因子αmRNA。结果与结论:落新妇甙干预能有效降低血清丙氨酸氨基转移酶水平,干预组肝组织丙二醛含量较模型对照组明显下降(P<0.01);而超氧化物歧化酶含量明显上升(P<0.01);干预组血清肿瘤坏死因子α含量较模型组对照组明显下降(P<0.01);小、大剂量干预组肝组织中肿瘤坏死因子α蛋白表达与模型组模型对照组比较渐次降低,与半定量RT-PCR结果相符(小剂量干预组P<0.05,大剂量干预组P<0.01)。落新妇甙保护肝脏热缺血再灌注损伤显示出剂量-效应关系趋势。结果提示,落新妇甙干预能减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤后的炎症反应和脂质过氧化损伤,有效改善肝功能和肝脏病理损害;机制可能在于其能抑制缺血再灌注损伤肝组织中肿瘤坏死因子α的高表达。

食管-胃颈部吻合术后远期并发胃溃疡

食管切除,食管-胃颈部吻合术后远期并发胃溃疡者较少见,我科近年来收治3例,现报告如下:

肝移植术后胆道并发症的治疗

目的 探讨处理原位肝移植术后胆道并发症的有效方法.方法 叫顺性分析2001年1 1月至2012年3月南京军区福州总医院收治的316例原位肝移植（其中1例施行二次肝移植）患者的临床资料.供肝获取时采用HTK＋ UW液冷灌注,UW液保存,切取供肝后UW液灌洗胆道.尸体肝移植中采用经典原位肝移植或背驮式肝移植,活体肝移植采用左半肝移植或右半肝移植.胆道重建方式采用胆管空肠Roux-en-Y吻合或胆管胆管对端吻合.2006年前选用普通T管引流,2006年后选用6F小儿吸痰管或硬膜外导管进行T管引流,术后3～6个月予以拔除.术中常规放置经胃空肠造瘘管,术后早期开始肠内营养.术后常规采用他克莫司＋麦考酚吗乙酯＋肾上腺皮质激素3联免疫抑制治疗方案或他克莫司＋麦考酚吗乙酯＋西罗莫司＋激素4联免疫抑制治疗方案.通过移植随访中心随访2年,了解患者胆道并发症情况、预后和进行用药指导.2006年前50例患者与2006年及之后267例患者胆汁漏发生率的比较采用x2检验.结果 患者供肝热缺血时间为2 ～6 min,冷缺血时间为3～10 h.尸体肝移植患者中,经典肝移植291例次,背驮式肝移植24例次;胆管空肠Roux-en-Y吻合5例次,胆管胆管端端吻合310例次.活体肝移植患者中,左半肝移植和右半肝移植各1例,均采用胆管胆管端端吻合.术后采用3联免疫抑制治疗方案311例,4联免疫抑制治疗方案5例.316例原位肝移植患者中,38例发生胆道并发症.胆道并发症分类：胆汁漏18例,缺血性胆道损伤引起的肝内外胆管狭窄6例,单纯吻合口狭窄6例,保存性损伤所致汇管区小胆管炎症、胆汁淤积4例,胆管结石合并胆管炎2例,单纯胆道感染2例.2006年以前患者胆汁漏发生率为14.00％ （7/50）,高于2006年及以后患者的4.12％ （11/267）,两者比较,差异有统计学意义（x2=7.676,P＜0.05）.38例胆道并发症患者中,治愈及好转35例,死亡3例.18例胆汁漏患者中,15例采用保守治疗后痊愈;3例采用手术治疗（其中1例经通畅引流,加强抗感染、营养支持等处理后好转,但于术后1个月突发腹腔大出血,手术探查发现肝动脉破裂出血,最终死于失血性休克所致MODS;2例行腹腔引流术,1例治愈,1例合并腹腔感染,最终死亡）.6例缺血性胆管损伤引起的肝内外胆管狭窄患者中,1例行二次肝移植后取得良好效果,5例经保守或行ERCP或经PTCD导管球囊扩张术治疗后好转.6例单纯吻合口狭窄患者中,3例经保守或行ERCP或经内镜下柱状气囊扩张、取石、支架置入治疗后好转;1例因肝癌复发放弃治疗后死亡;1例予手术探查,行吻合口成形＋T管引流术效果良好;1例手术探查切除复发肿瘤,行胆肠吻合后痊愈.4例保存性损伤所致汇管区小胆管炎症、胆汁淤积患者采取保肝、减轻黄疸等保守治疗后痊愈.2例胆管结石合并胆管炎患者,1例行ERCP支架置入痊愈;1例经保守治疗后TBil有所下降,未予进一步处理.2例单纯胆道感染患者均经抗感染等保守治疗痊愈.结论 多数患者胆道并发症可经非手术治疗取得满意疗效;而对非手术治疗效果不佳的患者,再次行胆道探查术是较为确实可靠的治疗手段;对于部分严重缺血性胆道损伤导致移植肝失功能的患者,二次肝移植是唯一的选择.

人骨髓来源多能成体祖细胞与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞分化的实验研究

目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞（hMAPCs）在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性，为其在组织工程学研究和临床医学中的广泛应用奠定基础。方法（1）取健康成人志愿者适量骨髓采用CD45、糖化蛋白A（GlyA）免疫微磁珠负分选，纯化培养CD45^-、GlyA^-hMAPCs。（2）间接共培养：将分别接种于盖玻片上的传代hMAPCs和人肝细胞系L02（密度均为1×10^5／ml）按照各50％比例共置于直径10cm培养皿中，培养液共通，实现间接共培养。分别于第1、3、5、7天免疫细胞化学鉴定hMAPCs的Alb、AFP、细胞角蛋白18（CK18）、细胞角蛋白19（CK19）等肝细胞特征性表型表达变化情况，并设阳性对照（单独培养的L02细胞）和阴性对照（单独培养未经诱导的hMAPCs），计数阳性细胞比率。（3）直接共培养：将CFSE荧光（绿色）标记的hMAPCs与L02（密度均为1×10^4／ml）按照各50％比例混合后接种于激光共聚焦显微镜检查专用培养皿内，实现直接共培养。5d后用SABC-Cy3免疫荧光（红色）双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察hMAPCs表达Alb、AFP、CK18的情况。同样设阳性对照（单独培养的CFSE标记L02细胞）和阴性对照（单独培养的CFSE标记MAPCs）。镜下表达黄色荧光的细胞即是向肝细胞分化的MAPCs，为阳性细胞；单纯表达绿色荧光的细胞为未分化的MAPCs；单纯表达红色荧光的细胞为L02细胞。结果（1）间接共培养结果：AFP作为不成熟肝细胞的表型标志，在间接共培养第l天表现为强阳性表达，随后逐渐减弱，至第7天，AFP的阳性表达已经很少。而Alb在第l天有可疑阳性表达，第3天，Alb即出现较强的阳性表达，第5天，Alb的阳性表达就达到高峰，第7天，密集生长的细胞仍广泛的阳性表达Alb。第l、3天检测CK18均为阴性，至第5天CK18开始出现阳性表达，第7天CK18阳性表达较前增强。CK19在各时间点均为阴性着色。阳性对照细胞Alb及CK18有较强的阳性表达，AFP弱阳性表达，CK19阴性表达。阴性对照细胞均为阴性表达。（2）直接共培养结果：Alb和CK18检测时，较多细胞质内出现黄色荧光表达，而AFP阳性荧光表达则仅出现在极个别细胞质内，该结果与阳性对照细胞荧光表达类似，而阴性对照细胞未见有阳性荧光表达。结论（1）与人肝细胞系L02间接共培养能够诱导人骨髓来源的MAPCs向成熟肝样细胞定向分化。（2）与人肝细胞系L02直接共培养能够诱导人骨髓来源的MAPCs向成熟肝样细胞定向分化，且时间有提前趋势。

落新妇甙对热缺血再灌注损伤肝脏肿瘤坏死因子α与白细胞介素-10表达的影响

目的 观察落新妇甙对热缺血再灌注（I/R）损伤肝脏Th1、Th2型细胞因子表达的影响. 方法 C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组,落新妇甙小剂量（10 mg/kg）干预组和大剂量（40mg,/kg）干预组.干预组小鼠于缺血前24h和1 h分别给予10mg/kg或40mg/kg的落新妇甙腹腔注射,建立70%部分肝I/R模型.收集肝组织标本,Western blot检测肝组织中肿瘤坏死因子（TNF）α,白细胞介素（IL）-10蛋白含量,RT-PCR检测肝组织TNF α、IL-10 mRNA的水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 与I/R模型对照组比较,小、大剂量落新妇甙干预组肝组织中TNF α蛋白表达水平依次降低,与TNF α mRNA的半定量RT-PCR结果 相符（相对表达量分别为1.74±O.12与1.56±0.09、0.82±0.12,P值均〈0.05） 而IL-10蛋白表达水平依次升高,与IL-10 mRNA的半定量RT-PCR结果 相符（相对表达量分别为0.96±0.08与1.11±0.17、1.47±0.08,P值均〈0.05）.结论 落新妇甙干预能抑制I/R损伤肝组织中Th1型细胞因子TNFα的高表达,同时促进Th2型细胞因子IL-10的表达.