沉默HDAC9对牙周膜干细胞增殖与成骨分化的影响

目的探讨沉默组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)对牙周膜干细胞(periodontal liga⁃ment stem cells,PDLSCs)增殖与成骨分化的影响。方法体外分离培养及鉴定PDLSCs,构建HDAC9的siRNA转染至PDLSCs中,实验分为阴性对照组(siNC组)和实验组(siHDAC9组),qRT⁃PCR检测干扰效果,流式细胞术检测细胞周期,CCK⁃8检测细胞增殖活性,Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti⁃gen,PCNA)的蛋白表达;qRT⁃PCR检测Runt相关转录因子2(runt⁃related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的mRNA表达,Western blot检测RUNX2的蛋白表达,茜素红染色检测矿化结节形成。结果相较于siNC组,siHDAC9组HDAC9 mRNA表达降低(P<0.01)。siHDAC9组PDLSCs增殖指数大于siNC组(P<0.01),增殖活性强于siNC组(P<0.05),PCNA的蛋白表达高于siNC组(P<0.01)。siHDAC9组RUNX2、ALP的mRNA表达高于siNC组(P<0.05),RUNX2蛋白表达高于siNC组(P<0.01),矿化结节数多于siNC组。结论沉默HDAC9可促进PDLSCs的增殖与成骨分化。

miR-21对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨miR-21对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨的影响,旨在为干细胞治疗牙周炎提供实验基础。方法酶解组织块法分离培养hPDLSCs,通过流式细胞仪检测表面分子CD34、CD45、CD90、CD105对hPDLSCs进行鉴定,采用Lipofectamine 2000将miR-21的mimics(pre-miR-21)、inhibitor(anti-miR-21)以及各自的阴性对照转染至hPDLSCs。实验分组:过表达组(mimics组)、过表达阴性对照组(mimics-NC组);抑制阴性对照组(inhibitor-NC组)、抑制组(inhibitor组)。实时荧光定量PCR检测miR-21转染效率;CCK-8、流式细胞术检测hPDLSCs的增殖;茜素红染色检测hPDLSCs的成骨能力和Western blot检测成骨相关基因Runx2的蛋白表达。结果miR-21的mRNA表达量mimics组较mimics-NC组明显升高,inhibitor组较inhibitor-NC组明显降低(P<0.05)。hPDLSCs增殖及S期细胞比例mimics组较mimicsNC组升高,inhibitor组较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。经茜素红染色后,mimics组矿化结节多于mimics-NC组;inhibitor组矿化结节少于inhibitor-NC组;Western blot检测mimics组Runx2蛋白表达高于mimics-NC组,inhibitor组Runx2蛋白表达量较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-21调控hPDLSCs的增殖和成骨向分化。

Fas配体过表达对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探讨Fas配体(Fas ligand,FasL)过表达对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外有限稀释克隆化培养人PDLSCs,构建FasL过表达质粒,转染至PDLSCs,实验分为对照组(Control组)、空载体对照组(NC组)、FasL过表达组(EX组),对各组进行成骨诱导,茜素红染色、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot检测PDLSCs成骨分化的能力。结果:EX组成骨分化能力较Control组和NC组有明显升高(P<0.05),Control组和NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FasL可以促进PDLSCs成骨分化。