血红素加氧酶1(HO-1)基因敲除影响小鼠肺脏免疫细胞组成平衡并加重脂多糖诱导的急性肺损伤

目的 评价血红素加氧酶1(HO-1)基因缺失对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠肺脏免疫细胞组成及炎症性损伤的影响。方法 选取C57BL/6野生型(WT)小鼠和同背景HO-1条件敲除(HO-1^(-/-))小鼠,按照随机数字法分为WT对照组、 LPS处理的WT组、 HO-1^(-/-)对照组和LPS处理的HO-1^(-/-)组。LPS处理的WT组和LPS处理的HO-1^(-/-)组分别经尾静脉注射LPS(15 mg/kg)建立ALI模型,WT对照组和HO-1^(-/-)对照组经尾静脉注射同等体积生理盐水。造模12 h后,处死小鼠并收集各组肺组织。HE染色观察肺组织病理变化。PCR检测肺组织肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和IL-6 mRNA表达。流式细胞术检测肺组织中性粒细胞(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6G^(+)Ly6C^(-))、总单核细胞(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6C^(hi))、促炎性单核细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6C^(hi)CCR2^(hi))、总巨噬细胞(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+))、 M1巨噬细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+)CD86^(+))、 M2巨噬细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+)CD206^(+))、总T细胞(CD45^(+)CD3^(+))、 CD3^(+)CD4^(+)T细胞亚群、 CD3^(+)CD8^(+) T细胞亚群和髓源性抑制细胞(MDSC, CD45^(+)CD11b^(+)Gr1^(+))百分比。结果 与相应对照组相比,LPS处理的WT和HO-1^(-/-)小鼠,肺组织炎症损伤加重;TNF-α、 IL-1β和IL-6 mRNA水平增加;中性粒细胞、总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 MDSC和总巨噬细胞比例显著增加;CD3^(+)、 CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例显著降低。静息状态下,与WT对照组小鼠相比,HO-1^(-/-)对照组小鼠肺脏中性粒细胞、单核细胞、促炎性单核细胞比例增加;CD3^(+)和CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例降低。与LPS处理的WT小鼠相比,LPS处理的HO-1^(-/-)小鼠肺组织TNF-α和IL-1β mRNA表达水平更高,总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 M1巨噬细胞和M1/M2比值显著增加;CD3^(+)CD8^(+) T细胞百分比显著降低。结论 HO-1的缺失影响ALI小鼠肺脏免疫系统功能,加重LPS刺激后的炎症性损伤。

实时荧光PCR熔解曲线法快速鉴定嗜肺军团菌

目的建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。方法根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。结果 15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43℃,1株Tm值为45℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。结论实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。

人乳头瘤病毒分型检测应用于宫颈癌筛查研究进展

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,发病率仅次于乳腺癌,在发展中国家,宫颈癌发病率位于女性恶性肿瘤之首。据调查,全世界每年约有50万人罹患宫颈癌,30万患者死亡,其中80%发生在发展中国家[1];中国每年新发病例约10万,

体检人群小麦不耐受阳性率及其组分的分析研究

目的分析体检人群小麦免疫球蛋白G(IgG)抗体水平,探讨体检人群小麦不耐受的阳性率与性别、年龄间的关系,分析其不耐受组分。方法采用乙醇-丙酮法对小麦蛋白进行提取,用粗提小麦蛋白包被96微孔板,酶联免疫吸附试验检测122例体检者小麦蛋白IgG水平,SDS-PAGE电泳分析其蛋白组分,并用酶免疫印迹方法分析提取液中与IgG特异度结合的主要蛋白组分。结果该地区体检人群小麦不耐受抗体阳性率为21.3%,其中男(18.52%)、女(23.53%)阳性率差异无统计学意义(P>0.05);少年组阳性率为26.47%,中年组17.24%,老年组为18.64%,其中少年组与中年组、老年组的差异均有统计学意义(P<0.05),而老年组和中间组之间差异无统计学意义(P>0.05);酶免疫印迹结果显示,小麦蛋白不耐受组分主要有4种,主要为麦谷蛋白,且个体间所针对的抗原差异无统计学意义(P>0.05)。结论体检人群中部分存在小麦蛋白IgG抗体;且小麦蛋白不耐受与性别无相关性,而与年龄有一定相关性;不同个体间小麦主要不耐受组分差异无相关性。

叉头转录因子O1在冬虫夏草预防糖尿病模型大鼠对比剂肾病中的机制

目的 探讨叉头转录因子(Fox)O1在冬虫夏草预防糖尿病模型大鼠对比剂肾病中的机制。方法 SD大鼠80只,随机选取20只为正常对照组(N组),其余60只腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)建立糖尿病模型,造模成功后再随机分为对比剂肾病组(M组)、冬虫夏草组(D组)、普罗布考组(P组)。10w后,N组和M组给予生理盐水灌胃,D组和P组分别给予冬虫夏草(3.0g/kg)和普罗布考(500mg/kg)灌胃。7d后,麻醉状态下,除N组外,其他三组给予碘克沙醇320(2.0g/kg)。取血标本测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取尿标本测尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因子(KIM)-1、白细胞介素(IL)-18;肾脏标本用于肾脏病理研究、氧化应激指标检测、蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)通路及FoxO1的研究。结果 与M组比较,D组Scr、BUN、NAGL、KIM-1、IL-18水平均明显降低(P<0.05),P组BUN、Scr、NAGL、IL-18含量明显降低(P<0.05),而KIM-1无明显变化(P>0.05)。与M组比较,D组丙二醛(MDA)含量明显降低,而一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)含量明显升高;P组MDA含量亦明显降低,NO、NOS和SOD含量明显升高(P<0.05),T-AOC无明显变化。与M组比较,D组和P组磷酸化(p-Akt)、p-mTOR、p-P70S6KmRNA及蛋白表达水平均明显升高,p-FoxO1mRNA水平和蛋白表达明显降低,p-FoxO1/FoxO1比值显著降低。结论 冬虫夏草可通过上调信号通路Akt/mTOR/P70S6K蛋白表达水平,进而促使FoxO1高表达,减少其磷酸化水平,减轻氧化应激和肾细胞凋亡,对糖尿病对比剂肾病大鼠的肾脏具有较好的保护作用。

山莨菪碱联合普罗布考对糖尿病大鼠造影剂肾损伤凋亡基因FAS/FASL表达的影响

目的研究山莨菪碱联合普罗布考对糖尿病大鼠造影剂肾损伤凋亡基因FAS/FASL及其蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法 SD大鼠45只,腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型,并随机分为对照组(N组)、造影剂肾病组(M组)、山莨菪碱组(A组)、普罗布考组(P组)、山莨菪碱联合普罗布考组(A+P组)。10周后P组及A+P组大鼠给予普罗布考灌胃,连续一周。A组和A+P组分别在注射造影剂前及注射后腹腔注射山莨菪碱。血标本检测Scr、BUN,尿标本检测NGAL、KIM-1、IL-18;取左肾组织用于病理研究,右肾组织采用RT-PCR法和Western Blot法检测FAS和FASL基因及蛋白表达水平。结果与M组比较,A组大鼠Scr、肾指数含量明显降低,而BUN、NAGL、KIM-1、IL-18含量均无明显变化;P组BUN、Scr、肾指数、NAGL、IL-18含量均明显降低,而KIM-1无明显变化;A+P组上述指标含量均明显降低。与M组比较,A组和P组大鼠肾脏组织FASL基因和蛋白表达水平均降低,而FAS基因和蛋白表达水平无变化;A+P组基因和蛋白表达水平均低于M组。结论山莨菪碱、普罗布考及两药联用均可下调CIN大鼠肾脏的FAS/FASL表达,减少肾细胞凋亡,减轻肾损伤;且两药联用具有协同作用。

血小板在机体病毒防御中的作用机制研究进展

血小板具有凝血和抗感染的物质基础,执行止血、抗炎、免疫调节等功能。血小板是骨髓中巨核细胞细胞质脱落下来的小块,在维持血管完整性和调节止血方面起至关重要的作用。除凝血、止血功能外,血小板在对抗病毒方面也起重要作用。血小板通过模式识别受体,如Toll样受体、C型凝集素受体2及NOD样受体等感知病原体或炎症的存在并做出应答,其内部颗粒释放出多种炎症介质、趋化因子和细胞因子等抗感染分子,调节免疫信号通路,诱导细胞分子的分泌,直接或间接参与病毒防御。病毒的侵袭导致血小板活化,活化的血小板直接吞噬病毒,导致血小板和白细胞聚集体形成,并通过释放活性氧抑制病原体。此外,活化的血小板具有抗原提呈作用,通过募集和协同免疫细胞,进一步加强机体抗感染能力,增强白细胞吞噬作用,以及活性氧的释放介导病毒感染过程中的免疫反应,在细胞和体液免疫中均发挥重要作用。

山莨菪碱预防糖尿病大鼠对比剂肾病的作用机制

目的探讨山莨菪碱预防糖尿病大鼠对比剂肾病的机制。方法SD大鼠40只,腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)建立糖尿病模型,并随机分为对照组(N组)、对比剂肾病模型组(M组)、山莨菪碱组(A组)、普罗布考组(P组,即阳性对照组)。10 w后P组大鼠给予普罗布考(500 mg/kg)灌胃,连续6 d。A组在注射对比剂泛影葡胺前及注射后的不同时间点腹腔注射山莨菪碱,共7次。24 h后,取血测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取尿检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL);取左肾分别用于病理检查和检测氧化应激指标;右肾用于Western印迹检测抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白在肾内的表达水平。结果与M组比较,A组Scr、BUN、MDA及NGAL含量均明显降低(P<0.05,P<0.01);NO、NOS含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。按N组、M组、A组、P组的顺序,抗凋亡蛋白Bcl-2、P-AKT、p-ERK、p-mTOR、p-P70S6K表达依次明显增加,而促凋亡蛋白Bax、P-JNK、caspase-3、caspase-9表达依次明显下降。结论山莨菪碱通过抗氧化应激、抑制脂质过氧化反应、抗凋亡等途径对糖尿病大鼠对比剂肾病具有较好的保护作用。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α在急性肾损伤中的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)是调控线粒体生发和功能的主要调节因子,亦是维持线粒体稳态的枢纽,它参与多种疾病的发生发展。肾小管线粒体功能障碍是急性肾损伤(AKI)发病的重要机制,PGC-1α与AKI的发生发展关系密切。该文主要对PGC-1α的分子特征及生理功能,PGC-1α、缺血再灌注、肾毒性与AKI的关系进行综述。

单核细胞表面人类白细胞抗原DR表达水平与慢性阻塞性肺疾病急性期感染的相关性研究

目的探讨人外周血单核细胞表面人类白细胞抗原DR(HLA⁃DR)表达水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性期感染的相关性。方法选取天津市南开医院慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者和体检健康者共37例,根据临床症状及感染指标分为对照组(15例)、急性期组(临床治疗干预前,22例)和稳定期组(临床干预后,16例)。采集患者外周静脉血,用流式细胞仪分析CD14^(+)单核细胞HLA⁃DR的表达水平,并与患者C反应蛋白(CRP)、白细胞计数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞计数、CD3^(+)T细胞百分比、CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比、CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比和CD4^(+)/CD8^(+)等进行相关性分析。结果与对照组比较,急性期组患者外周静脉血CD14^(+)单核细胞HLA⁃DR的表达水平降低(P<0.05)。与急性期组比较,稳定期组患者外周静脉血CD14^(+)单核细胞HLA⁃DR的表达水平升高(P<0.05),CRP的水平降低(P<0.05),白细胞计数、中性粒细胞百分比、中性粒细胞计数下降(均P<0.05),CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)增加(均P<0.05),CD3^(+)T细胞百分比、CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比无明显变化(均P>0.05)。相关性分析发现,急性期组患者外周静脉血CD14^(+)单核细胞HLA⁃DR的表达水平与CRP呈负相关,与CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比和CD4^(+)/CD8^(+)呈正相关。结论AECOPD患者CD14^(+)单核细胞HLA⁃DR表达水平降低,可作为评估患者免疫状态的辅助指标。

运用16s rRNA和非靶代谢组学揭示肠道菌群在脓毒症免疫调节及器官损伤中的作用

目的运用大鼠粪便16s rRNA测序和非靶向代谢组学分析脓毒症大鼠肠道微生物组成及代谢产物,初步探究肠道菌群及其代谢物对脓毒症炎症反应和多器官损伤的影响及潜在机制.方法将10只健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)和脓毒症模型组(CLP组),每组5只.通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型.制模后24h处死动物,取外周血采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺、肾组织病理改变并进行病理评分;取粪便样本,采用16s rRNA高通量测序和非靶代谢组学筛选可能在疾病结局中发挥重要作用的微生物群、代谢物和信号通路;Spearman相关分析对肠道菌群与非靶向代谢进行联合分析.结果与Sham组相比,CLP组肺组织和肾脏组织病理损伤程度明显加重[肺组织评分(分):3.60±0.80比0.00±0.00,肾组织评分(分):2.40±0.80比0.00±0.00,均P<0.01];外周血中TNF-α和IL-6含量明显升高[TNF-α(ng/L):248.12±55.98比143.28±36.57,IL-6(ng/L):260.26±39.47比116.01±26.43,均P<0.05];肠道菌群物种多样性显著降低;摩根菌属、拟杆菌属和大肠埃希菌-志贺菌属的相对丰度显著增加,毛螺菌NK4A136属、瘤胃球菌属、罗姆布茨菌属和罗氏菌属的相对丰度显著降低;肠道微生物群苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成及胆汁分泌显著增加,而初级胆汁酸生物合成显著降低;差异代谢物与差异菌群之间存在显著相关性.结论脓毒症可以造成大鼠肠道菌群和粪便代谢物特征发生明显变化,该结果为寻求治疗脓毒症的新靶点提供了转化研究基础.

嗜肺军团菌Ⅳ型分泌系统及其致病性研究进展

革兰阴性菌侵袭真核细胞,将毒力因子运送至菌体表面或宿主细胞内,这类转运过程需要细菌分泌系统的参与。目前已知革兰阴性菌有Ⅰ~Ⅳ型分泌系统。其中Ⅰ、Ⅱ型可将蛋白直接排泌于菌体外环境;但Ⅲ、Ⅳ型较为特殊,通过细菌的菌毛样结构与宿主细胞紧密结合形成一个孔道,将蛋白直接注入宿主细胞内。Ⅳ型分泌系统是革兰阴性菌最常见的分泌机制,

冬虫夏草预防糖尿病大鼠对比剂肾病机制研究

目的探讨冬虫夏草预防糖尿病大鼠对比剂肾病的机制。方法SD大鼠80只,腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)建立糖尿病模型,并随机分为对照组(C组)、对比剂肾病组(CIN组)、冬虫夏草低剂量组(L组)、冬虫夏草标准剂量组(M组)和冬虫夏草强化剂量组(H组)。L组、M组、H组大鼠分别给予冬虫夏草(2.0、2.5、3.0 g/kg)灌胃,C组、CIN组则以等量生理盐水灌饲,连续7天。7天后检测SCr、BUN、尿蛋白排泄率(UAE)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)及IL-18。取左肾测病理和氧化应激指标;右肾用于Western Blot检测抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白(包括:Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-Akt、p-mTOR、p-ERK、p-JNK、p-P70S6K)表达。结果与C组比较,CIN组SCr、BUN、UAE、MDA、NAGL、KIM-1、IL-18均明显升高,NO、T-SOD降低(P<0.05)。与CIN组比较,L组、M组、H组SCr、BUN、UAE、MDA均明显降低,NO、T-SOD升高(P<0.05);L组、H组NAGL、IL-18、降低(P<0.01),其中H组KIM-1均明显降低(P<0.01)。与L组、M组比较,H组SCr、BUN、UAE、MDA、NGAL、KIM-1、IL-18明显降低,NO、T-SOD升高(P<0.05)。与C组比较,CIN组Bcl-2、P-Akt、P-mTOR、P-P70S6K、P-ERK蛋白表达增加,Bax、P-JNK、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达减少(P<0.05)。与CIN组比较,Bcl-2、P-Akt、P-mTOR、P-P70S6K、P-ERK蛋白表达在L组、M组、H组逐渐增加,其中H组最高(P<0.05),Bax、P-JNK、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达L组、M组、H组逐渐减少,H组表达量最少(P<0.05)。结论冬虫夏草通过抗氧化应激、抑制脂质过氧化反应、抗凋亡等途径对糖尿病大鼠对比剂肾病发挥较好的保护作用,冬虫夏草强化剂量组优于低剂量组和标准剂量组。