巨噬细胞与三株念珠菌作用后MyD88和CARD9基因表达的研究

目的:通过检测三株不同白色念珠菌作用下,巨噬细胞激活的关键下游信号传导分子CARD9、MyD88基因表达水平以及所产生的活性氧ROS差异,探讨巨噬细胞对三株白色念珠菌杀伤能力产生差异的可能原因。方法:将骨髓来源小鼠巨噬细胞分别与三株念珠菌以1∶10的比例共培养,30min、1h、2h和4h收集巨噬细胞,荧光定量PCR检测MyD88、CARD9基因的表达差异,采用流式细胞术检测所产生的ROS量。结果:RT-PCR结果显示,巨噬细胞与三株白色念珠菌共培养早期MyD88基因表达水平,3683组最高;CARD9基因表达水平,3630组最高;随着时间的增长,不同组别的MyD88基因相对表达无明显变化,而CARD9基因共培养2h相对表达量SC5314组高于3630组及3683组(P<0.01);4h,3683组相对表达量高于3630组、SC5314组(P<0.01)。流式细胞检测结果显示ROS荧光强度3630组>3683组>SC5314组(P<0.05)。结论:CARD9是白色念珠菌PAMPs与PRRs识别及产生抗念珠菌感染关键分子ROS信号通路的关键分子,其表达水平的差异有可能是导致巨噬细胞对不同念珠菌杀伤能力产生差异的机制之一。

分泌型天冬氨酸蛋白酶基因表达差异及其影响因素

分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)是白色假丝酵母菌最重要的毒力因子之一,由sap基因家族编码。在体外培养和体内外白色假丝酵母菌感染过程中,sap基因家族各成员间存在着表达和调控上的差异。本文就白色假丝酵母菌sap基因家族分子及其结构特点、sap基因表达差异及其影响因素作一综述。

缺氧相关的长链非编码RNA LINC00970在唾液腺腺样囊性癌中的表达及其作用

目的探讨唾液腺腺样囊性癌(SACC)中长链非编码RNA(lncRNA)LINC00970表达与缺氧的关系及其作用。方法低氧(1%O2)诱导48 h后,lncRNA芯片检测SACC-83细胞中缺氧诱导的lncRNA,并用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)验证。使用临床样本分析LINC00970在SACC组织中的表达及其与预后的关系。LINC00970敲低质粒转染SACC-LM和SACC-83细胞后,细胞增殖检测(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖能力和克隆形成能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测E-cadherin、Vimentin、Snail和N-cadherin的表达。荧光定量PCR、Western blot和Transwell等实验均重复3次所得均值为该样本测量值,使用SPSS 20.0软件进行统计学分析。SACC组织细胞与正常唾液腺组织中LINC00970相对表达量差异,采用配对t检验分析;比较沉默LINC00970对SACC-83和SACC-LM细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力的影响,以及LINC00970沉默对上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的影响,应用独立t检验进行统计学分析。采用Kaplan-Meier法计算LINC00970的表达与SACC患者总生存时间的相关性,并绘制生存曲线。P<0.05为差异有统计学意义。结果lncRNA芯片及实时荧光定量PCR结果显示,LINC00970是SACC-83细胞中在缺氧反应性表达最高的lncRNA(15.13±0.57 vs 1.08±0.06),差异有统计学意义(t=24.56,P<0.001)。临床样本数据分析显示,LINC00970在SACC组织表达显著高于正常唾液腺组织(0.49±0.41 vs 0.08±0.16,t=2.53,P<0.001),且LINC00970高表达患者生存率明显低于LINC00970低表达患者(HR=0.42,P=0.03)。SACC细胞敲低LINC00970后,缺氧促进的侵袭和迁移能力受抑制,且缺氧升高后的间质标志物N-cadherin表达下调,而缺氧诱导降低的上皮标志物E-cadherin恢复上调。结论缺氧可诱导SACC细胞中LINC00970的表达,其高表达与SACC患者的不良预后密切相关,LINC00970可能通过调控EMT从而促进细胞侵袭和迁移。