酵母的生物工程及其在发酵工业中的应用

酵母菌与发酵密切相关,生物化学上曾将酵母的无氧呼吸过程称为发酵。近年来,新的发酵产品不断涌现,除有机酸外,还有抗生素、氨基酸、核苷酸、甾体激素、酶制剂、多糖、单细胞蛋白、维生素、色素、毒素、生物碱、甜味剂、香味剂、杀虫剂、植物生长激素和免疫促进剂等等。

产气气杆菌茁霉多糖酶的研究——Ⅰ.酶的提纯和性质

产气气杆菌（Aerobacter aerogenes）10016的茁霉多糖酶（pullulanase E.C.3.2.1.41）用 Sephadex G100凝胶过滤、聚丙烯酰胺垂直板型凝胶电泳进行纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的纯酶。纯酶作用的最适温度为50℃,最适 pH 为5.3—5.8,耐热性较差,50℃4小时后仅存活力10%。纯酶在 pH4.3—8.6稳定。酶作用于糯米淀粉的米氏常数 Km 为2.0×10-2克/毫升。用聚丙烯酰胺薄层凝胶等电聚焦测定酶的等电点 pI 为3.8,用 SDS 凝胶电泳测定酶的分子量为51,000—52,000;此酶是一种糖蛋白;含糖总量为6.5—7.0%;纯酶能专一性的水解茁霉多糖、糯米淀粉,也能分解糊精,而不作用于糖原、纤维二糖以及环状糊精。

细菌大质粒的快速分离

早期用于分离质粒DNA的方法大多数不适用于大质粒的分离。近几年来,随着遗传学实验方法的改进,从事分子生物学研究的科学家相继开发出多种快速、简便的大质粒分离技术,从很多不同种属的细菌中分离到许多大质粒,为分子遗传学的发展做出了贡献。 Eckardt报道了一种分离方法,首先将细菌细胞在Ficoll—溶菌酶混合液中初步软化,再将样品加到琼脂糖凝胶的加样孔中,用SDS裂解,然后进行电泳分离。

N-糖基化引起葡萄糖淀粉酶不同型的差异

红曲霉葡萄糖淀粉酶具有多型性,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上有5条蛋白带(E_1——E_5) E_3,E_4,和E_5均为糖蛋白,含糖量分别为7%和9%.用ConA-Sephafose分高纯化红曲霉葡萄糖淀粉酶时,被α-甲基D-葡萄糖苷依亲和力由小到大的顺序将E_3,E_4和E_5洗脱下来,也说明他们的含糖量E_5>E_4>E_3.糖肽之间的连结方式除O-糖苷键外,还有N-糖苷键、我们试图用内切或外切糖昔酶切去糖链,以查明糖基化对多型性的影响.

N-GIycosylation-induced Difference Between Multiple Forms of Glucoamylase

Glucoamylase from Monascus rubiginosus has been found to exist in multiple forms on PAGE pattern （E1-E5）. Both major molecular forms E3 and E4 are glycoproteins.Sugar content as mannose （%） is 7 for E3 and 9 for E4, respectively,