去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达(英文)

目的：探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法：用 10μ g/ml去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞系 MCF-7。处理后，在不同时间点，采用普通光镜、电子显微镜观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比，用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因 bcl-2的表达情况进行检测。结果：经 10μ g/ml去甲斑蝥素处理 12 h后，可观察到 MCF-7细胞变形、出泡，从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集，且随着药物作用时间的延长，凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比，凋亡抑制基因 bcl-2的表达降低。结论 :诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。

利用HSV-TK基因治疗肝癌的离体研究

利用ＤＮＡ重组技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因克隆至逆转录病毒载体（ＸＭ－６／ＴＫ）。经ＰＡ３１７细胞包装后，转染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２。结果显示，ＸＭ－６／ＴＫ转染ＨｅｐＧ２细胞与野生型相比，其生长特点和细胞形态未有改变。给予抗病毒药物－环氧鸟苷（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）后，转染细胞生长受到严重抑制，细胞数量明显降低。细胞学检查证实，ＧＣＶ处理后，转染细胞的死亡率显著增加。本结果提示。

利用原位杂交技术研究SIPAR在小鼠不同发育阶段的表达

目的检测对STAT3信号通路有调节作用的新基因SIPAR（STAT3 interacting protein as a represor）在小鼠胚胎发育过程中不同阶段的表达.方法采用地高辛标记探针的整体胚胎原位杂交方法.结果 SIPAR在dpc9.5的小鼠胚胎眼泡和听泡中有明显的表达,在dpc9.5～12.5的小鼠胚胎脊柱神经和脑部中枢神经都有表达,在dpc12.5小鼠胚胎脑、眼泡和脊柱中表达增强.结论 SIPAR主要集中表达在小鼠胚胎的神经系统,SIPAR可能与神经系统发育相关.

NOK通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路(英文)

NOK能激活包含JAK-STAT信号通路在内的多种促细胞有丝分裂信号通路.研究发现,在人胚肾细胞(HEK293T)中,NOK与STAT3具有直接的相互作用.进一步的实验表明,NOK能同STAT3蛋白除螺旋结构域及C端结构域外的其他4个结构域发生相互作用,而NOK的胞内区则介导了NOK同STAT3的相互作用.同时,免疫共沉淀实验显示,NOK能与JAK2发生相互作用.重要的是,共同表达NOK与JAK2蛋白对STAT3信号通路能产生一种非常显著的协同激活作用,但当共同表达NOK和JAK2的激酶活性缺失突变体时,并不产生这种协同激活效应.综上,实验结果显示,NOK可能同STAT3和JAK2形成一个复合物,通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路.

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤效应及其可能机制

用１０μｇ／ｍＬ去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）作用于人乳腺癌细胞，以ＭＴＴ法、流式细胞仪、台盼蓝排斥法和透射电镜等方法分别观察ＮＣＴＤ对癌细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明：ＮＣＴＤ对乳腺癌细胞的杀伤作用有时间和剂量依赖性，药物作用２４ｈ后，Ｇ１期细胞减少，Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增多，凋亡细胞百分比升高并可见到凋亡细胞的形态学变化。

微小隐孢子虫的基因检测实验研究

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)检测微小隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum)感染的特异性和敏感性。 方法用 Sheather's蔗糖梯度离心法从微小隐孢子虫感染者粪便标本中分离纯化卵囊。用酚 -氯仿法抽提卵囊总 DNA。针对本虫 18S r RNA基因片段设计 1对引物 ,对模板 DNA进行 PCR扩增 ,同时以蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardia lamblia)、溶组织内阿米巴 (Entamoeba histolytica)、阴道毛滴虫 (Trichomonas vaginalis)、刚地弓形虫 (Toxoplasma gondii)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)和旋毛虫 (Trichinella spiralis) ,以及人体血细胞等 DNA样本为对照。用琼脂糖电泳和溴乙腚染色对 PCR产物进行检测。 结果 仅微小隐孢子虫 DNA被扩增出一 5 0 0 bp的 DNA片段。其它对照 DNA样本均未出现扩增反应。 结论 PCR对隐孢子虫检测的特异性可高达 10 0 % ,敏感性也很强 ,可检测到 2 0 pg微小隐孢子虫卵囊的DNA。表明本实验建立的检测微小隐孢子虫的

SIPAR和STAT3相互作用并对其信号通路进行负调控

STAT3对细胞的生长、存活、增殖以及机体的发育都具有重要的作用. STAT3基因的失活可以引起多种疾病,而STAT3基因的过度激活又可以引发很多癌症. 为了对STAT3信号通路的调控做进一步的研究,采用酵母双杂交的方法,以STAT3蛋白全长作为诱饵蛋白,筛选了小鼠7天的胚胎文库. 得到了与STAT3相互作用的一个功能未知的蛋白质,将其命名为SIPAR (Stat3 interacting protein as a repressor). 免疫染色的实验结果表明,SIPAR是一种在核内分布为主,细胞质中也有少许分布的蛋白质. 荧光酶活性测定结果表明SIPAR对STAT3的转录活性具有抑制作用. 斑马鱼注射实验说明SIPAR基因表达严重影响了斑马鱼的正常发育.

三苯氧胺和白介素-6对人乳腺癌细胞凋亡的影响

应用雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株（ＭＣＦ７细胞），在体外培养条件下，观察三苯氧胺（ＴＡＭ）和重组人白细胞介素６（ＩＬ６）对该细胞凋亡的影响。样品经碘化丙啶（ＰＩ）染色后用ＥＰＩＣＳＥＬＩＴＥ流式细胞仪测定并分析。结果表明，ＴＡＭ和ＩＬ６皆可诱导ＭＣＦ７细胞凋亡，与对照组相比具显著性差异（Ｐ＜０．０１）。若将ＴＡＭ和ＩＬ６联合应用，其诱导ＭＣＦ７细胞凋亡数明显上升，与单药应用比较具非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），提示２药合用的效果不是简单的加成而是协同作用。

白血病抑制因子LIF第29位氨基酸突变导致其功能完全丧失(英文)

白血病抑制因子(LIF)为一种多功能细胞因子,在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用. LIF在所有的哺乳动物中都具有高度的保守性,某些氨基酸在不同物种中保持不变. LIF中29位氨基酸在所有的哺乳动物中都是Q. 为了研究Q对LIF功能的重要性,利用随机PCR的方法将29位氨基酸突变为R,并将突变后的LIF克隆到真核表达载体pcDNA6,在哺乳动物细胞中成功表达. 同时以克隆到的野生型LIF作为对照. 将分泌到细胞培养基中的野生型和突变LIF因子收集,通过EMSA实验以及荧光素酶报告系统检测,发现野生型LIF因子具有激活STAT3信号通路的生物学活性. 同时,3H-TdR掺入实验结果表明,野生型LIF因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系M1的增殖。而29位氨基酸突变的LIF因子则完全丧失了以上功能,但所发现的突变没有显性负的作用. 结果充分说明,LIF中高度保守的29位氨基酸对LIF功能的维持具有重要的作用.

基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的 建立基于JAK STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型 ,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物。方法 构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列 ,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体。通过将该载体分别转入体外培养的不同细胞系中使之稳定表达 ,建立具有激活STAT活性的药物筛选模型 ,并利用多个抗过敏和抗肿瘤药物样品进行检测。结果 建立多株药物筛选细胞模型 ,筛选方法简便 ,操作容易 ,灵敏度高 ,结果稳定。

肝刺激因子对肝癌细胞增殖的调节作用

初断乳雄性SD大鼠的肝匀浆以超速离心和柱层析法分离纯化肝刺激因子（HSS），观察其对肝癌细胞增殖、细胞表皮生长因子（EGF）受体表达及受体磷酸化的影响。结果表明，HSS具有明显的促肝癌细胞分裂增殖能力，提高细胞周期中S期细胞所占比例。HSS促肝癌细胞增殖作用与其促EGF受体表达有关，表现为：（1）HSS上调170kDEGF受体蛋白表达，此作用与EGF合用后明显加强，即是协同效应；（2）HSS上调EGF受体表达呈剂量-效应和时间-效应关系;（3）HSS可刺激EGF受体酪氨酸残基的磷酸化，调节受体活性。本研究结果提示，HSS可能是通过调节肝癌细胞EGF受体的表达及受体介导的信号传导通路而起到促增殖的作用。

北京市施工企业施工资料管理问题研究

施工资料是施工企业对工程档案约定俗称的叫法,是工程建设过程中形成的宝贵信息资源,但其管理制度和工作并不完善,没有引起施工企业和管理人员足够的重视,它对工程的重要价值和作用也没有真正被体现和发挥出来。加强施工资料的管理就要从多方面努力,为北京市现代化建设作出应有的贡献。

HSV-TK/GCV系统杀伤肝癌细胞的在体研究

目的和方法：将可产生含有ＨＳＶＴＫ基因逆转录病毒的包装细胞与ＢＥＬ７４０２肝癌细胞混合后，接种于裸鼠皮下，复制肝癌模型。确定ＨＳＶＴＫ基因转移后，给予动物注射ＧＣＶ，观察ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统基因治疗实验性肝癌的在体疗效。结果：在体条件下，逆转录病毒可将ＨＳＶＴＫ基因部分转导至肝癌细胞；ＧＣＶ作用后，ＴＫ＋中瘤细胞的生长受到明显抑制；电镜观察发现，ＧＣＶ杀伤ＴＫ＋肿瘤细胞的作用主要体现在细胞核；虽然组化染色分析表明ＴＫ基因转移效率只有１０％～３０％，但测量肿瘤体积显示ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统杀伤肝癌细胞的效果依然明显，故其作用机制可与“旁观者效应”有关。结论：ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ“自杀”

失能老人长期照护实务——慢性疾病护理

冠心病 【症状】 疲乏、无力。不明原因的疲乏、无力,不想动或嗜睡。 气短。感到空气不够用或呼吸困难,这种气短有活动时加重,休息时减轻,平卧时加重,坐位时减轻的特点。