发展中国家HIV/AIDS的流行状况及防治对策

据联合国艾滋病规划署（ＵＮＡＩＤＳ）发表的《世界艾滋病流行状况》的报告〔１〕，截止１９９７年底，全球感染艾滋病病毒（ＨＩＶ）的人数为３０６０万，已有１１７０万人死于ＡＩＤＳ。发达国家感染ＨＩＶ的人数已趋于稳定或有下降的趋势，而在新感染的ＨＩＶ人群中有...

脂质体——一种理想的抗HIV药物载体

脂质体——一种理想的抗ＨＩＶ药物载体戎隆富秦德安（华东师范大学生物系，上海２０００６２）关键词脂质体抗ＨＩＶ药物针对ＡＩＤＳ的致病病毒ＨＩＶ（Ⅰ型和Ⅱ型）复制周期中的不同阶段，已研制出多类抗ＨＩＶ药物，如：阻断ＨＩＶ与靶细胞（ＣＤ＋４Ｔ细胞、神经胶质...

羟基尿素—— 一种新的抗HIV药物

概述抗ＨＩＶ药物———羟基尿素的临床应用。

艾滋病—1(HIV—1)的性传播

艾滋病—１（ＨＩＶ—１）的传播途径有性接触、血液接触和母婴传播，性传播是ＨＩＶ—１流行性传播的主要途径。ＨＩＶ—１经性接触传播占全球３３４０万ＨＩＶ—感染者的７５％以上。对ＨＩＶ—１的性传播的研究，为预防ＨＩＶ—１经性接触传播有重要意义。本文分析了Ｈ...

反相高效液相色谱法检测齐多夫啶的血药浓度

目的 建立齐多夫啶血药浓度的反相高效液相色谱检测方法。方法 以shim pack ,VP ODS 5 μm 4 6× 15 0mm为分离柱 ,流动相∶四氢呋喃∶水∶三氟酸 (10∶89 8∶0 2 ) ,流速 1 0ml·min-1;检测波长 2 67nm。结果 齐多夫啶浓度在 0 0 2～ 2 0mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,日内及日间差均小于 5 % ,平均回收率为 96 4% ,血浆中最低检测极限为 10 μg·L-1。结论 本方法具有快速、灵敏、稳定的特点 。

半乳糖神经酰胺脂质体对HIV-1感染性的影响

目的 研究体外空白及包封抗HIV药物AZT和PFA 的GalCer脂质体 对HIV-1复制的影响。方法 通过HIV p24抗原测定、合胞体抑制实验、 融合阻断实验和对HIV感染细胞的保护作用实验等，观察了空白GalCer脂质体、 AZT-GalCe r脂质体和PFA-GalCer脂质体对HIV-1复制的影响。 结果空白GalCer脂 质体预处理细胞，能促进HIV-1感染CD4+ 细胞；空白GalCer脂质体预处理HIV-1，则抑 制了病毒吸附和结合宿主细胞；GalCer脂质体还具有阻断HIV-1感染细胞与正常CD4+细胞 间的融合作用；GalCer脂质体包封AZT或PFA不能显著提高药物体外抗HIV-1活性。 结论 空白GalCer脂质体预处理细胞，能促进HIV-1感染性；预处理HIV-1，则 抑制了病毒的感染。

聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性

目的 研究聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性。方法 通过分子筛高效液相 (SizeexclusionHPLC)、毛细管等电聚焦 (CIEF)、圆二色谱 (CD)以及荧光光谱等方法检测单聚PEG- GH的纯度、等电点、二级结构以及分子构象 ;采用妊娠兔肝细胞放射受体分析法 (RRA)检测单聚PEG GH的体外受体亲和力 ,采用未成年去垂体大鼠体重增加法检测体内生物活性。结果 分子筛高效液相图谱上仅出现一个峰 ,表明样品纯度很高 ,等电点范围为 5 .1～ 5 .2 ,与未修饰的rhGH的等电点相一致 ;CD谱与荧光光谱均表明单个mPEG ALD的修饰对rhGH的二级结构以及分子构象没有明显影响 ;与未修饰的rhGH相比 ,单聚PEG GH体外受体亲和力明显降低 ;但体内作用时间更长 ,且更加有效。结论 此结果为进一步研究和开发长效重组人生长激素提供了理论依据。

聚乙二醇修饰天花粉蛋白的初步研究

目的:研究聚乙二醇(PEG)修饰天花粉蛋白(TCS)的条件、纯化方法、生物活性及致过敏反应程度。方法:用SDS-PAGE检测反应条件对产物成分的影响,利用离子交换和分子筛凝胶层析对修饰产物进行分离纯化,通过SDS-PAGE和HPLC检测聚乙二醇化天花粉蛋白(PEG-TCS)的纯度,小鼠引产实验测定PEG-TCS体内生物学活性,用TCS和PEG-TCS作为抗原对豚鼠进行致敏和攻击。结果:在PEG修饰TCS的反应中,PEG与TCS的投料(质量)比和pH值是影响修饰效率的主要因素,修饰反应一般在24～48h内达到平衡;纯化的PEG-TCS经SDS-PAGE检测纯度大于95%,HPLC显示单一峰;小鼠引产实验表明,经过PEG修饰后的TCS,引产活性加强;豚鼠过敏反应实验表明,PEG-TCS具有极低的全身性过敏反应。结论:PEG修饰TCS的最佳反应条件为:TCS与PEG投料比为1:6,pH6．0,反应时间为48h,催化剂氰基硼氢化钠浓度为40mmol·L^(-1);PEG-TCS纯度大于95%; PEG-TCS体内活性能较好的保留,且全身性过敏反应降低。

聚乙二醇化天花粉蛋白抗生育活性及其过敏反应试验

目的:分析聚乙二醇修饰对天花粉蛋白抗生育活性和引起过敏反应的影响。方法:妊娠11-12d小鼠静脉给药,48h后解剖,计算引产率;豚鼠药物致敏5次,末次致敏14d、21d攻击,观察0．5h内过敏反应情况;大鼠皮内接种抗血清,24h后抗原加染料攻击,观察染料渗出情况。结果:与天花粉蛋白相比,聚乙二醇化天花粉蛋白在较低浓度(0．5mg/kg)就可达到引产目的(引产率>85％),且引起豚鼠和大鼠过敏反应的程度较低。结论:聚乙二醇化修饰能提高天花粉蛋白的体内活性,降低其免疫原性,在临床中有广阔的应用前景。

聚乙二醇化重组人干扰素α-2b体外抗乙肝病毒作用的研究

研究聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG-IFN)和重组人干扰素α-2b(IFN)的体外抗乙型肝炎病毒作用。以HepG2.2.15为细胞模型,采用MTT法考察两种药物对细胞的毒性作用;分别以高、中、低剂量的PEG-IFN和IFN每隔一日反复作用细胞,连续8d,采用ELISA法测定细胞上清液中的HBsAg来考察两种药物对病毒的抑制作用;将相同剂量的PEG-IFN和IFN模拟临床给药频率作用细胞一周,即PEG-IFN给药1次,IFN给药3次,观察细胞HBsAg的分泌情况,评价药效。PEG-IFN和IFN的TC50均>20000IU/mL,IC50分别为559.88、478.71IU/mL;反复给药时,高、中、低3个剂量组的PEG-IFN对病毒的抑制作用略低于同剂量的IFN;模拟临床给药一周后发现,PEG-IFN与IFN对病毒的抑制作用无明显差异。PEG-IFN和IFN在体外均可抑制HepG2.2.15细胞乙肝病毒的表达。

聚乙二醇修饰重组人生长激素的初步研究

目的 探讨聚乙二醇(MW20kD)修饰重组人生长激素(rhGH)的反应条件以及修饰产物的纯化方法。方法 在不同条件下,将聚乙二醇活性酯与rhGH反应,以单个PEG-GH的比例为指标,用SDS-PAGE和薄层扫描方法,确定其在反应产物中所占的比例;采用CM-SepharoseFF离子交换和SephacrylS-200分子筛凝胶层析法对修饰产物进行分离纯化。结果 聚乙二醇修饰rhGH的反应条件为pH8.0、rhGH与聚乙二醇的比例1:2(mg:mg)、反应时间2.0h;反应产物经两步纯化,所得的单个PEG-GH纯度大于95%。结论 初步确定了聚乙二醇修饰rhGH的反应条件和修饰产物的纯化方法。

齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体在小鼠的药动学研究

目的 研究半乳糖神经酰胺脂质体包封的齐多夫啶(azidothymidine ,AZT)在小鼠体内的药动学。方法 以半乳糖神经酰胺 (galactosyceramide ,GalCer)为主要膜材制备齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体 (AZT GalCer)并观察AZT Gal Cer及游离AZT在小鼠体内的药动学过程。结果 AZT GalCer组较游离AZT组血药浓度显著升高 ,特别是 30min后升高达数十倍 ;药物的Ke由 0 0 37h-1降至 0 0 2 1h-1,T1/2 由 19min延长至 35min ,AUC增加 2 .77倍。结论 齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体可提高齐多夫啶的血药浓度 ,延缓药物消除速度。

齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体的制备及理化性质研究

目的 制备齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体并对其理化性质进行研究。方法 采用两次乳化法 ,以半乳糖神经酰胺为主要膜材制备齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体并进行形态学观察、检测其包封率和稳定性。结果 透射电子显微镜下观察齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体为粒径均匀的球形或近球形的小单层颗粒 ;粒径范围为 6 0～ 2 70nm ,D5 0为 1 4 0nm ;包封率达72 5 % ,但 1 0d后快速下降。结论 齐多夫啶半乳糖神经酰胺脂质体制备方法可行 。

脂质体携载抗HIV-1药物

由于HIV耐药株的产生、特殊器官和细胞中HIV的隐匿、抗HIV药物的毒副反应及半衰期短等问题的出现 ,促使人们寻找高效低毒和具有靶向性的抗HIV药物。脂质体具有被动或主动靶向病毒复制活跃和贮存区、细胞内靶向和控制药物释放、延长药物半衰期、提高药效和降低毒副作用等优点 ,是潜在携载抗HIV药物的良好载体。

HPLC法测定PEG-rhIFNα-2b注射液中rhIFNα-2b的含量

目的:建立HPLC法检测聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG-rhIFNα-2b)注射液中重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)的含量。方法:采用硅胶基TSK G3000SW(7.8mm×300mm)凝胶柱;流动相为0.125mol·L-1PB-0.2mol·L-1NaCl-异丙醇(48.5∶48.5∶3,v/v);流速0.6mL·min-1;检测波长280nm;柱温25℃。结果:rhIFNα-2b在1～10μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9987);平均回收率为100.7%,RSD为1.7%(n=9)。结论:本方法准确可靠,分离效果好,操作简单、快速、重现性好,能够达到分析要求,可用于PEG-rhIFNα-2b的质量控制。

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药效学研究

比较研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)升高环磷酰胺所致外周血白细胞降低的Blab/c小鼠的白细胞效果。结果显示一次注射聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与多次注射重组人粒细胞集落刺激因子的药效作用相当,且各剂量间呈良好的量效关系。

聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性及药动学研究

目的研究聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性及药动学。方法用rhGH及其两种mPEG修饰物PGH1、PGH2免疫家兔,检测兔血清中的抗体滴度;对家兔单次背部皮下给药,定时取血清,建立rhGH及其修饰物的ELISA双抗夹心检测法,检测血清中的药物浓度,并计算药动学参数。结果经过mPEG修饰后,明显降低了rhGH的抗体滴度,缩短了抗体持续时间。在药动学研究中发现,其t1/2β从3.1h显著延长到PGH1的9.9h和PGH2的22.5h,其AUC也有很大的提高。结论mPEG修饰后可明显降低rhGH的免疫原性,延长药物在动物体内的半衰期,降低清除率,改善其药动学性质。且改善程度随mPEG相对分子质量的增大而增强。

高效液相色谱检测聚乙二醇化天花粉蛋白方法比较

目的:建立聚乙二醇化天花粉蛋白纯度的检测方法。方法:使用分子筛色谱法和反相高效液相色谱法测定了聚乙二醇天花粉蛋白。结果:聚乙二醇天花粉蛋白纯度分别为100%和98.14%。结论:高效液相色谱法简单易行、准确、灵敏度高,适用于聚乙二醇化天花粉蛋白纯度检测。

重组人粒细胞集落刺激因子的表达、纯化以及PEG修饰

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)经大肠杆菌温度诱导表达后,其表达产物以包涵体形式存在,包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到纯化的rhG-CSF。在一定的实验条件下用单甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)对rhG-CSF进行化学修饰,所得修饰产物经分离纯化后获得PEG20K-rhG-CSF偶联物。与修饰前的rhG-CSF相比较,尽管修饰后的rhG-CSF体外生物学活性下降至修饰前的20%左右,但其在体内的作用时间能够得到显著的延长,药效有了明显提高。