HCV跨膜蛋白(P7)重组表达及化学发光法检测HCV感染者血清中抗P7抗体的建立与评价

目的:建立化学发光法检测丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清抗跨膜蛋白P7(anti-P7)抗体的方法,并进行应用评价。方法:以含有HCV 1b基因型P7核酸序列(Accession No:AJ238800)的质粒PUC-P7为模板,PCR扩增P7基因,构建重组质粒pGEX-KG-P7,P7融合蛋白经原核诱导表达、提取纯化后,间接法包被微孔板、制备化学发光法检测抗P7抗体试剂盒,并对其方法学指标进行评价。结果:质粒pGEX-KG-P7构建正确,经原核诱导表达获得相对分子质量约34 kD的P7融合蛋白,制备的化学发光法检测抗P7抗体试剂盒方法学指标为:精密度试验(批内变异系数2.97%~4.09%,批间变异系数3.75%~5.52%),空白限和检出限分别为1.56、5.99 RLIR,相关系数r=0.9989,分析测量范围(AMR)为1.252~18.774 RLIR,平均回收率为97.8%,类风湿因子等阳性血清标本对本试验无交叉反应,试剂盒15个月内稳定,45例HCV感染者血清抗P7抗体阳性率为20%(9/45)。结论:化学发光法检测HCV感染者血清中抗P7抗体试剂盒符合方法学要求,可用于HCV感染者筛查诊断、病情监测、预后评估、疾病机制和流行病学研究,P7蛋白在HCV感染者体内存在免疫应答现象。