1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异功能分析

目的分析1例Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因复合杂合变异的功能特性,探索囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物对CLCNKB基因错义突变的挽救作用。方法回顾性分析2019年9月2日至南京医科大学附属儿童医院肾脏内科就诊的1例Ⅲ型Bartter综合征患儿的临床表现、生长发育情况、实验室检查结果及CLCNKB基因变异情况等。在人胚胎肾293细胞(HEK293)中分别转染野生型和变异型CLCNKB基因,并运用蛋白免疫印迹法检测各组ClC-Kb蛋白的表达水平,运用非配对t检验比较野生型与突变型之间蛋白表达的差异。同时,利用免疫荧光技术检测ClC-Kb的亚细胞定位,并使用囊性纤维化跨膜传导调节剂VX-809化合物处理过表达突变体的细胞。结果患儿为2岁个8个月的女性,表现为低钾血症、低氯血症、代谢性碱中毒、肾性盐消耗,高血压四项及血压均正常。基因检测结果显示患儿为CLCNKB基因复合杂合型变异。在HEK293细胞中转染2种突变(p.F213C和p.Y466Mfs*13)质粒,发现突变型ClC-Kb蛋白表达均低于野生型(P均<0.01),其中移码突变导致了一个低分子量带(~5.5×10^(4))。免疫荧光定位实验示p.F213C和p.Y466Mfs*13变异体滞留于细胞质内。VX-809处理p.F213C突变转染后的HEK293细胞后,可呈剂量依赖性地显著增加ClC-Kb蛋白的膜表达。结论CLCNKB基因2种变异体导致ClC-Kb蛋白表达降低和定位出现异常,VX-809化合物可在一定程度上纠正Ⅲ型Bartter综合征患儿CLCNKB基因变异体的蛋白表达缺陷,可能对于治疗Ⅲ型Bartter综合征有新的应用前景。

儿童原发性肾病综合征不同种类糖皮质激素治疗的临床研究

目的观察两种不同剂型的糖皮质激素治疗原发性肾病综合征的效应及不良反应。方法将40例初治的原发性肾病综合征患儿随机分为两组,分别以甲基泼尼松龙(甲泼尼龙)和泼尼松作为诱导缓解治疗的药物,观察比较两组患儿的治疗效果及不良反应。结果两组患儿对激素反应(激素敏感、激素依赖、激素耐药)的差异无统计学意义。对于激素敏感患儿,甲泼尼龙组尿蛋白阴转时间(9.5±1.1)d少于泼尼松组的(14.7±1.4)d,差异有统计学意义(P<0.05);两组患儿在发生高血压、感染次数、血糖异常及肾上腺皮质功能不全方面的差异无统计学意义(P均>0.05);口服甲泼尼龙组更易出现多毛(面部,背部为主),兴奋度明显增高,且柯兴综合征较严重,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论甲泼尼龙诱导肾病综合征缓解优于泼尼松,可缩短激素治疗疗程,但同时有较多的糖皮质激素不良反应。

核心蛋白聚糖对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为:(1)阴性对照组;(2)10μg/LTGFβ1组;(3)TGFβ1(10μg/L)+(10μg/L)核心蛋白聚糖组;(4)TGFβ1(10μg/L)+(100μg/L)核心蛋白聚糖组。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的影响。结果:加入刺激因子48h后,(1)组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致,大部分仍为椭圆形;(2)组细胞形态发生明显的变化,大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形;(3)和(4)组,梭形样细胞明显减少,尤其是(4)组梭形样细胞减少更为明显。(2)组HK-2细胞Ⅰ型胶原mRNA表达上升到(1)组的27.86倍,Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到(1)组的21.83倍。(3)和(4)组与(2)组相比,Ⅰ型胶原mRNA的表达分别下降了36.39%、53.36%,Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35%、47.96%(P<0.05),但仍未下降到正常水平。结论:核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一。

儿童狼疮性肾炎45例临床、病理及免疫学分析

目的探讨儿童狼疮性肾炎(LN)的临床、病理及免疫学特点。方法回顾性分析住院治疗的45例LN患儿的临床和病理资料及免疫学指标。结果 45例LN患儿中男6例、女39例,平均发病年龄(10.9±2.8)岁。临床表现为急性肾炎综合征型最常见,占42.2%,肾病综合征占31.1%。42例进行病理分型,其中Ⅱ型8例(17.8%),Ⅲ型2例(4.4%),Ⅳ型22例(48.9%),Ⅴ型1例(2.2%),Ⅴ+Ⅲ型3例(6.7%),Ⅴ+Ⅳ型6例(13.3%)。在治疗初期临床缓解率达91.1%,随访24个月15.0%复发。结论 LN患儿的临床表现具有多样性,肾脏病理复杂多变,部分患儿临床表现与肾脏病理表现不一致。

肾组织中核心蛋白聚糖的表达和定位及其与肾间质损害的关系

目的:观察核心蛋白聚糖在小儿肾脏病肾活检组织中的定位及表达,并探讨其与肾小管间质损害程度及转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的关系。方法:收集36例肾脏疾病患儿肾活检病理及临床资料,对其肾小管间质损害程度进行分组,应用免疫组织化学方法检测核心蛋白聚糖和TGF-β1在肾间质内的定位及表达。结果:核心蛋白聚糖主要表达于肾小管上皮细胞,近曲小管表达比远曲小管更为明显,随着肾间质损害程度的加重,核心蛋白聚糖的表达量逐渐增加。TGF-β1的表达亦主要见于肾小管上皮细胞,在近曲小管和远曲小管之间无明显的差异,TGF-β1的表达量也随着肾小管间质损害程度的加重而增加。肾间质中,核心蛋白聚糖和TGF-β1两者表达量呈正相关。结论:核心蛋白聚糖可能作为反映肾间质损害程度的一个标志性蛋白,同时对TGF-β1的表达起一定的抑制作用。

核心蛋白聚糖在肾小管间质病变中的作用

核心蛋白聚糖是蛋白聚糖(PG)家族中的一员,由一条糖胺聚糖链共价连接于核心蛋白所组成。核心蛋白聚糖的代谢异常或结构改变与许多疾病的病理过程有密切关系。近年研究提示,核心蛋白聚糖对于预防肾脏损伤有一定的作用。本文就核心蛋白聚糖与引起肾间质损害的部分因素之间的作用做一综述。

12例狼疮性肾炎合并血栓性微血管病变临床特点及预后分析

目的分析狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)合并血栓性微血管病变(thrombotic microangiopathy,TMA)患儿的临床特征、病理特点、治疗方案及预后,并寻找与非TMA的LN患儿临床及病理方面的差异。方法回顾性收集2010年12月—2021年12月收住南京医科大学附属儿童医院肾脏科的12例合并TMA的LN患儿为TMA组,选择同期住院行肾活检的24例不合并TMA的LN患儿为非TMA组,分析比较两组临床表现、实验室检查和病理结果等情况。结果12例LN合并TMA的患儿中,8例(67%)伴有高血压,3例(25%)发展为慢性肾脏病5期。与非TMA组比较,TMA组肾小管间质损害较重,发病时系统性红斑狼疮疾病活动指数评分更高,胆固醇水平更高(P<0.05)。两组在新月体比例、血红蛋白水平及血小板计数间差异无统计学意义(P>0.05)。结论LN合并TMA患儿高血压比例高,肾小管间质损害较严重,系统性红斑狼疮疾病活动指数评分较高,有较高水平的胆固醇。

儿童狼疮性肾炎临床及病理特点与预后分析

目的分析狼疮性肾炎(LN)患儿的临床特征及影响疗效和预后的因素。方法回顾性分析2010年7月1日至2019年12月31日在肾脏科初诊的LN患儿的临床资料。结果LN患儿98例,男19例、女79例,平均发病年龄(11.0±2.0)岁。肾脏表现中蛋白尿91例,血尿84例,不同程度水肿37例,伴高血压21例。肾外表现中,皮疹73例,伴狼疮性脑病9例;白细胞下降、贫血及血小板降低分别有82、71和87例。与非肾病综合征(NS)型组相比,NS组男性、发热、血尿、合并急性肾损伤、抗双链DNA抗体阳性、血小板减少比例较高,差异有统计学意义(P<0.05)。98例患儿中,初始诱导方案为泼尼松+环磷酰胺61例,泼尼松+吗替麦考酚酯22例,泼尼松+他克莫司8例,泼尼松+硫唑嘌呤3例,单纯泼尼松4例。行肾活检的96例患儿中病理分型为Ⅱ型4例、Ⅲ型9例、Ⅳ型45例、Ⅴ型8例、Ⅳ+Ⅴ型25例、Ⅲ+Ⅴ型5例。从疾病初发至治疗6个月时肾脏完全缓解81例(82.7%),部分缓解12例,未缓解5例。与完全缓解组相比,未完全缓解组依从性不规则比例较高,差异有统计学意义(P<0.05)。92例患儿完成随访,中位随访时间5.2(1.8~5.2)年,复发64例(69.6%)。与未复发组相比,复发组依从性不规则、>9岁、合并高血压、合并急性肾损伤、抗双链DNA抗体阳性的比例较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LN患儿临床表现多样,疗效与患儿依从性有关;复发与患儿年龄、依从性、合并高血压和急性肾损伤以及抗双链DNA抗体阳性有关。

40例儿童狼疮性肾炎临床与病理分析

目的探讨儿童狼疮性肾炎(LN)的临床与病理特点。方法回顾性分析2005年1月至2010年12月住院治疗的40例LN患儿的临床和病理资料。结果 40例LN患儿中,男4例,女36例,发病年龄2.6~14.3岁,平均10.6±2.6岁,其中学龄儿童35例(88%)。发病至确诊时间范围约3 d^1年左右。40例患儿均存在蛋白尿,其中肾病范围蛋白尿12例(30%),孤立性蛋白尿9例(22%);伴不同程度血尿患儿26例(65%)。临床分型以急性肾炎型为主(19例,47%)。39例行肾穿刺活检,其中3例未分型,余36例中,Ⅳ型LN 18例(50%),Ⅱ型LN 8例(22%);抗核抗体在所有病理分型患儿中的阳性率均为100%,抗dsDNA阳性率为61%,89%的患儿血补体C3及C4均有不同程度下降。在疾病治疗6个月时LN缓解率高达95%;Ⅳ、Ⅴ+Ⅲ及Ⅴ+Ⅳ型LN患儿肾脏急性活动指数较其他型明显偏高,慢性指数及肾小管间质损害在不同病理分型患儿间无明显差异。结论患儿LN的临床表现具有多样性,临床分型以急性肾炎型最多,病理分型以Ⅳ型最为常见,肾脏急性活动指数在Ⅳ、Ⅴ+Ⅲ及Ⅴ+Ⅳ型中偏高,经过6个月的正规治疗,大部分患儿可达到临床缓解,坚持长期规范化治疗有助于改善预后。

核心蛋白聚糖对转化生长因子β_1诱导人近端肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法将体外培养的 HK-2细胞分为6组:阴性对照组(A 组);10 ng/mlTGF-β_1组(B 组);10 ng/ml 核心蛋白聚糖组(C 组);100 ng/ml 核心蛋白聚糖组(D 组);10 ng/mlTGF-β_1+10 ng/ml 核心蛋白聚糖组(E 组);10 ng/ml TGF-β_1+100 ng/ml 核心蛋白聚糖组(F 组)。倒置显微镜下观察加入刺激因子48 h 后,各组细胞形态学变化;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测核心蛋白聚糖对 TGF-β_1诱导的 HK-2细胞内α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、角蛋白mRNA 表达的影响。结果 B 组与 A 组相比较,细胞形态发生明显变化,大部分细胞拉长呈梭形,似成纤维细胞;E 组和 F 组比 B 组梭形样细胞明显减少,尤其是 F 组梭形样细胞减少更明显;C 组和 D组与 A 组细胞形态无明显区别,为椭圆形;B 组与 A 组比较,波形蛋白、α-SMA mRNA 表达明显提高,角蛋白 mRNA 表达减少。B 组平均值分别为(0.828±0.297)、(0.332±0.025)、(0.075±0.040),A组平均值分别为(0.033±0.060)、(0.003±0.000)、(0.348±0.012),差异有统计学意义(P<0.05);E 组和 F 组与 B 组相比,波形蛋白、α-SMA 的表达有所下降,角蛋白的表达呈上升趋势(P<0.05),平均值分别为 E 组(0.234±0.313)、(0.214±0.196)、(0.098±0.056),F 组(0.155±0.053)、(0.122±0.130)、(0.215±0.122)。C 组和 D 组与 A 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TGF-β_1能诱导正常人肾小管上皮细胞发生转分化;核心蛋白聚糖对 TGF-β_1诱导的 HK-2细胞转分化具有抑制作用,且呈剂量依赖性。

单中心110例青少年期起病的儿童原发性肾病综合征临床与病理特征

目的分析青少年期(10岁≤年龄≤18岁)起病的儿童原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的临床与病理特征,探讨青少年期起病儿童PNS的肾活检指征。方法该研究为单中心回顾性观察性研究,回顾性分析2004年12月至2022年6月在南京医科大学附属儿童医院肾脏科住院行肾活检,且起病年龄≥10岁的PNS儿童的临床和病理资料。结果共110例患儿被纳入该研究,其中男性76例(69.1%),女性34例(30.9%),起病年龄10岁至14岁9个月。49例(44.5%)伴有血尿,其中肉眼血尿14例(12.7%),镜下血尿35例(31.8%)。起病时,25例(22.7%)合并高血压,19例(17.3%)伴有肾功能不全,4例(3.6%)伴有低补体C3血症。激素敏感型肾病综合征52例(47.3%),激素耐药型肾病综合征58例(52.7%)。病理类型依次为微小病变(minimal change disease,MCD)[52例(47.3%)]、局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerular sclerosis,FSGS)[22例(20.0%)]、IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)[17例(15.5%)]、膜性肾病(membranous nephropathy,MN)[7例(6.4%)]、系膜增生性肾小球肾炎[5例(4.5%)]、IgM肾病[4例(3.6%)]、膜增生性肾小球肾炎[2例(1.8%)]和C1q肾病[1例(0.9%)]。临床表现为单纯型肾病综合征的44例(40.0%)患儿,病理类型大多为MCD(77.3%);临床表现为肾炎型肾病综合征的66例(60.0%)患儿,病理类型多为非MCD(72.7%),如IgAN、FSGS、MN等。如具有持续性血尿、高血压、肾功能不全及低补体C3血症4种临床表现中的2种及以上时,非MCD的比例进一步增加至92.0%(23/25)。伴肉眼血尿或低补体C3血症者,病理类型均为非MCD。非MCD组血尿(69.0%比17.3%,χ^(2)=29.619,P<0.001)、高血压(31.0%比13.5%,χ^(2)=4.821,P=0.028)及肾功能不全(24.1%比9.6%,χ^(2)=4.047,P=0.044)的发生率均明显高于MCD组。结论10岁以上的青少年原发性肾病综合征如临床表现为单纯型肾病综合征,病理类型大多为MCD,且多数激素敏感,建议先予激素治疗,如出现激素耐药再行肾活检;如临床表现为肾炎型肾病综合征,病理类型大多为非MCD,尤其是对伴肉眼血尿、低补体C3血症,或具有持续性血尿、高血压、肾功能不全及低补体血症4种临床表现中的2种及以上时,需尽早行肾活检。

寡而大肾发育不良合并PAX2基因突变1例并文献复习

目的 探究寡而大肾发育不良合并配对盒基因2(PAX2)基因突变病例临床特点。方法 回顾分析1例肾活检病理为寡而大肾发育不良,基因示PAX2错义突变患儿的临床资料,并复习相关文献。结果 患儿,男,9岁8个月,表现为非肾病水平蛋白尿,肾功能不全,肾活检病理提示:(1)寡而大肾发育不良;(2)局灶节段性肾小球硬化。二代测序发现PAX2基因c.94C>T (p.P32S)杂合变异,Sanger测序验证示变异来自患儿父亲。结论 考虑可能是来源于患儿父亲的PAX2基因杂合突变致病,导致患儿肾发育不良。寡而大肾发育不良起病隐匿,临床中孤立性蛋白尿伴有肾功能不全需警惕此病,及时行肾活检。

儿童Dent病十例临床表现及基因变异分析

目的总结10例Dent病患儿的临床特征及基因检测结果。方法回顾性分析2014年1月至2017年7月在南京医科大学附属儿童医院肾脏科住院确诊的10例Dent病患儿的临床资料及基因检测结果。结果10例患儿均为男性，起病年龄8月龄-12岁不等。患儿起病隐匿，5例因其他疾病住院行尿常规检查发现蛋白尿，4例因发现尿中泡沫增多就诊，1例体检发现蛋白尿。临床均表现为低相对分子质量（简称低分子量）蛋白尿，尿蛋白电泳提示低分子量蛋白比例大于50%，其中7例患儿呈肾病水平蛋白尿，均无低蛋白血症。6例伴高钙尿症，3例伴肾钙质沉着，1例伴肾结石，2例伴有镜下肾小球源性血尿，1例尿糖弱阳性但血糖正常。所有病例肾功能正常，血钙正常，无低磷血症，临床均无佝偻病表现。基因检测结果显示7例患儿为CLCN5基因变异，包括2个无义变异（分别为p.R637X、p.Y143X）、3个错义变异（分别为p.A540D、p.G135E、p.G703V）、1个缺失变异（外显子9、10、11、12、13缺失）、1个移码变异（p.T260Tfs＊10）。3例为OCRL基因错义变异（分别为p.I274T、p.I371T、p.F399S）。除p.R637X和p.I274T外，其余8例均为新发现的变异。5例患儿行肾活检病理检查，3例表现为局灶性肾小球球性硬化，1例表现为轻度系膜增生性肾炎，1例呈轻微病变；3例患儿伴有局灶性肾小管萎缩及间质纤维化，另2例肾小管间质基本正常；电镜下5例患儿均伴有足突节段轻度融合。结论儿童Dent病起病隐匿，临床主要表现为低分子量蛋白尿，且多数呈肾病水平蛋白尿，但无低蛋白血症，部分病例不伴有高钙尿症。致病基因大多为CLCN5基因，少数为OCRL基因，基因变异的类型包括错义变异、无义变异、缺失变异及移码变异等。Dent病虽然为肾小管性疾病，但肾活检病理提示多数病例合并肾小球病变。

儿童抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎13例临床分析

目的探讨儿童抗中性粒细胞胞质抗体(anti⁃neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关性血管炎(ANCA⁃associated vasculitis,AAV)的临床表现、病理特点、治疗及转归。方法回顾性分析2000年6月至2021年12月在南京医科大学附属儿童医院肾脏科收治的13例儿童AAV的临床及病理资料。结果13例患儿中12例为显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis,MPA),1例为肉芽肿性多血管炎(granulomatosis with polyangiitis,GPA)。女性10例,男性3例,起病年龄3岁11个月至13岁10个月。肾脏是最常见的受累器官(12例,92.3%),其他为呼吸系统(7例,53.8%)、皮肤(5例,38.5%)、消化系统(4例,30.8%)、神经系统(4例,30.8%)和心血管系统(3例,23.1%)。10例患儿伴正细胞正色素性贫血,7例患儿抗核抗体阳性,3例补体C3轻度下降。合并肾损害的12例患儿中9例起病时伴有肾功能异常,肾活检Berden病理分型如下:硬化型5例,新月体型3例,局灶型2例,混合型2例。所有患儿均给予糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗,随访时间8~128个月,4例完全缓解,8例部分缓解,1例完全缓解后复发,7例进展至慢性肾脏病5期。3例完全缓解的患儿(混合型2例、新月体型1例)行重复肾活检,病理类型均转变为局灶型。结论儿童AAV好发于学龄期女童,且以MPA多见,临床表现多样,多数患儿伴有肾损害及贫血,肺部损害也较常见。以皮肤紫癜起病者易误诊为过敏性紫癜,合并抗核抗体阳性及补体下降者需排除系统性红斑狼疮。儿童AAV一旦出现肾功能异常,尤其是估算肾小球滤过率<60 ml·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)、病理分型为硬化型及新月体型时,即使经过积极治疗,肾功能多数难以逆转。早期发现、早期治疗对AAV至关重要。