小鼠抗青霉素和头孢菌素酰化酶抗体制备及交叉反应研究

为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 。

AFLP指纹图谱技术在动物物种鉴定中的应用

用AFLP(扩增片段长度多态性)方法来构建羚牛、家牛和黑熊的DNA指纹图谱,并结合国内实验室的具体情况,避免使用同位素;采用3条技术路线,并灵活应用了两种酶,同时切割和分别在连接寡聚核苷酸接头前后进行切割;在引物设计时应用3′端有差异的选择性引物进行PCR扩增,同时对实验结果进行比较。结果表明:两种酶分别在连接寡聚核苷酸接头前后进行切割,然后用单种引物扩增前一种酶切割的片断能获得比较好的结果。因此,AFLP可用于野生动物DNA分子水平上的鉴定。

一株约翰逊不动杆菌的分离和鉴定

在土壤中分离到一株细菌STRB ,该菌可以在SFM、LB、EMB、PDA、MM、MacC等多种培养基上生长 ,革兰氏染色为阴性 ,电镜观察无鞭毛。生化指标检测显示 ,该菌株对多数糖类不能发酵 ,经bioMerieuxVitek公司的革兰氏阴性细菌检测试验卡 (GNI)鉴定为醋酸钙不动杆菌。设计 2对简并引物对其 16SrRNA进行PCR扩增 ,16SrRNA序列及其进化树分析结果显示 ,该菌为约翰逊不动杆菌。

一株具有抗真菌活性的食酸丛毛单胞菌的分离和鉴定

在土壤中分离到一株细菌STRA ,菌块测定法显示该菌可显著抑制玉米小斑病菌和稻恶苗病菌 ,具有抗真菌活性。该菌可以在SFM和LB等多种培养基上生长 ,且菌落生长无明显终止现象 ;革兰氏染色为阴性 ,电镜观察可见 2～ 4根鞭毛。 (G +C) %在 5 9%～ 6 7%范围内。生化指标的检测显示该菌株对所测试的多数糖类不能发酵 ,经BioMerieuxVitek的革兰氏阴性细菌检测试验卡 (GNI)鉴定为食酸丛毛单胞菌 (Delftiaacidovorans)。设计两对简并引物对其 16SRNA进行PCR扩增 ,16SRNA的序列及其相关生物信息学分析结果进一步确证生化鉴定结果。该分离株的抗真菌物质的特性鉴定。

实验小鼠H-2抗原单克隆抗体的效价研究

目的 研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法 制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 )的细胞株保存在 - 196℃的液氮中 ,数月后将复苏后的部分细胞株培养 4 8h后 ,取其上清液用微量细胞毒试验法测定抗体的效价 ,并与其原有效价进行比较。结果 单抗初建时效价达到 16 0倍以上的细胞株占总株数的 37%～ 5 3% ,H 2K抗体复苏后效价持平的细胞株占 13% ,效价下降的为 74 % ,效价上升的是 13% ;H 2D抗体效价持平的细胞株占 5 3% ,下降的为 31% ,上升的是 16 %。复苏后的抗体效价大部分与原效价持平或略有下降 ,个别的会有所提高。结论 单克隆抗体的效价略低于同种单价特异性抗血清 ;能否使冻存后的抗体保持原有的效价是抗体能否大量生产并推广的关键 ;要长期保存和生产H 2抗原单抗 ,应加强克隆和检测工作 ,建立稳定的制备、保存和检测系统 。

人IL-5片段的化学合成及单克隆抗体的制备

目的：利用人工合成的hIL－5多肽片段制备抗IL-5单克隆抗体．方法：从初始原料起，采用固相连接肽等方法，合成了人IL-5羧基端19肽，并耦联到载体蛋白BSA上，以此作为抗原免疫小鼠，采用细胞融合法制备单克隆抗体．结果：成功地合成了hIL－5多肽，获得了七株单抗杂交瘤细胞系，对其中ZH10mAb性质及亚类等特性进行了鉴定．结论：可利用人工合成的多肽作为IL－5的替代物制备其单克隆抗体．

在大肠杆菌K99(中国QH株)菌毛形成亚单位基因(fanC)的克隆和测序中发现IS1 插入序列

目的 构建大肠杆菌K99菌毛表达载体。方法 通过逐级亚克隆的方法克隆k99菌毛形成亚单位基因（fanC），并进行序列测定和fanC亚单位的抗原决定簇模拟，以确定突变部位。结果 克隆了包括K99菌毛形成亚单位基因（fanC）和部分fanD基因在内的一段基因，该基因与国外报道相比明显偏大。序列测定表明：在fanC尾部多出 24bp，在fanC与 fanD，的结合部有一 800bp左右的新基因。经与基因库中大肠杆菌基因作同源性比较发现，该新基因为768bp的插入序列IS1。其他基因为K99自身fonC与fanD片段之间的过渡基因。IS1的插入未改变fanD，基因的阅读框架，只是使fanD片段末端增加了 8个氨基酸。fanC亚单位的抗原决定簇模拟结果显示，K99 fanC片段具有一个非常突出的亲水区域，根据经验它应是抗原决定簇所在的部位。结论 首次发现大肠杆菌K99基因中含有插入序列IS1。

慢性不可预知温和应激抑郁小鼠模型的建立

抑郁症是一种以情绪低落为主要症状的情感性精神障碍.利用慢性不可预知温和应激建立抑郁症小鼠模型,以蔗糖水消耗实验作为抑郁核心症状之一———快感缺乏的检测方法.将4周龄雄性小鼠(C57BL/6)持续6周暴露于一系列轻度应激中,每周检测蔗糖水消耗.应激包括:令小鼠恐惧的气味、噪音、饲养笼倾斜、潮湿的垫料、无垫料的新饲养笼、照明过夜以及短暂的同笼饲养.前3周模型组每天随机应用2个不同的应激,后3周应用3个不同的应激.结果:随着应激强度的增加,模型组对蔗糖水的摄取量显著低于对照组.由此表明,慢性不可预知性温和应激能导致小鼠出现对奖赏的反应性下降,快感缺乏等抑郁症状.

原位分子杂交检测大肠肿瘤癌基因表达及其意义

本文采用原位分子杂交方法，对人不同大肠组织细胞内ｃ－ｍｙｃ基因表达进行了检测。结果发现：８３％（２０／２４）的大肠癌中有Ｃ－ｍｙｃ癌基因的过度表达。其过度表达与年龄、性别、肿瘤组织病理学类型以及Ｄｕｋｅｓ分期无关，但左半大肠癌内比右半大肠癌要高。７８％（２４／３０）的良性肿瘤中有Ｃ－ｍｙｃ癌基因的过度表达，在重度不典型增生病变中明显较高，而在伴有恶变的病变中表达最高。另外，在更容易恶变的绒毛状腺瘤中的表达比在管状腺瘤中要高。提示Ｃ－ｍｙｃ癌基因过度表达与大肠肿瘤密切相关，是癌形成的早期现象，与大肠肿瘤由良性向恶性转化有关。