颠茄PMT·TR-I和H6H基因植物高效表达载体的构建

[目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)基因、托品酮还原酶-I(Tropinone reductase-I,TR-I)基因和莨菪碱6-β-羟化酶(Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H)基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆到PMT、TR-I和H6H基因编码区序列,并连接到植物表达载体pCAMBIA1304+(p1304+)中。[结果]成功构建了植物高效表达载体p1304+-PMT、p1304+-TR-I、p1304+-H6H、p1304+-PMT-H6H、p1304+-TR-I-PMT和p1304+-TR-I-H6H,并转化农杆菌,获得可直接用于遗传改良颠茄的工程菌。[结论]该研究为利用植物基因工程技术提高东莨菪碱的产量奠定了基础。

深层肌肉刺激结合Flexi-bar疗法对非特异性下腰痛患者腰肌耐力疼痛及预后的影响

目的:探讨深层肌肉刺激结合Flexi-bar疗法对非特异性下腰痛(NLBP)患者腰肌耐力、疼痛及预后的影响。方法:选取2019年6月至2021年6月我院100例NLBP患者,随机数字表法分组,各50例。对照组采取常规康复训练,观察组基于对照组采取Flexi-bar疗法结合深层肌肉刺激,连续干预2个月。统计比较两组视觉模拟评分法(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、静态及动态腰肌耐力、腰部肌电信号、疼痛介质[β-内啡肽(β-EP)、5-羟色胺(5-HT)]、预后。结果:干预1个月后、2个月后观察组VAS、ODI评分低于对照组,血清β-EP、5-HT水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预1个月后、2个月后观察组腰肌耐力、RMS高于对照组,MF低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预前、干预1个月后、2个月后两组SF-36评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:深层肌肉刺激结合Flexi-bar疗法可有效减轻NLBP患者疼痛,提高腰肌耐力,恢复腰椎功能,改善预后。

本体驱动的半结构化Web生物数据抽取

提出由本体驱动,并根据文档结构和特征匹配来进行信息定位和信息抽取的方法,并实现了一个用户指导的交互式信息抽取原型系统。有效地解决了信息抽取中涉及的同义词,一词多义等语义问题,以及数据项不完整和排序不固定的问题。

基于本体的生物信息数据源的发现

随着互联网和生物信息的飞速发展,即时发现新的生物信息数据源来进行研究变得非常重要。传统的基于关键词的搜索引擎由于忽视了关键词本身所含的语义信息而得到较低的查全率和查准率,文中提出了基于本体的生物信息数据源发现的方法。通过本体描述的领域知识和反映文档信息的特征短语来语义扩充用户请求,从而提高了检索的查全率和查准率。

八宝丹处理肺腺癌细胞A549和SPCA-1对顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨八宝丹处理人肺腺癌A549和SPCA-1细胞系对顺铂(DDP)抗肿瘤化疗敏感性影响。方法收集人肺腺癌A549和SPCA-1细胞系进行不同处理,随机分为对照组(空白)、DDP组(4uM)、(八宝丹+DDP)组(0.75mg/kg+4uM),处理3周,采用MTT法检测细胞增殖能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测细胞凋亡率,采用transwell检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,DDP组和(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞增殖能力明显降低(P<0.01);与DDP组比较,(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞增殖能力无明显差异(P>0.05)。与对照组比较,DDP组和(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞凋亡明显增加(P<0.01);与DDP组比较,(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞凋亡明显增加(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞迁移数目明显降低(P<0.01);与DDP组比较,(八宝丹+DDP)组的A549和SPCA-1细胞迁移数目明显降低(P<0.001)。结论(八宝丹+DDP)可以增加肿瘤细胞的凋亡,降低肿瘤细胞的增殖,减少A549和SPCA-1细胞迁移数目,增加肿瘤细胞的DDP抗肿瘤敏感性。

3Cr13不锈钢刃口的强化方法研究

将淬回火后的3Cr13不锈钢进行粗磨刃口,用渗氮盐浴复合处理方法对其进行刃口强化。测试了锋利度、耐用度。结果表明：3Cr13不锈钢刃口经过强化后,其强切割猪皮深度是未强化的3Cr13不锈钢的1.68倍,刃口切断猪皮条数是未强化的3Cr13不锈钢刃口的6.5倍。

农杆菌介导银杏遗传转化体系的建立及Gb-DXR基因表达载体的构建

[目的]为提高农杆菌介导的银杏遗传转化效率提供参考。[方法]以成熟的银杏种子胚为外植体,在无激素MS培养基上预培养48h后,采用3种农杆菌介导将GUS基因导入银杏胚中,经过组织化学染色法检测到GUS瞬时表达活性,对影响GUS基因表达的因素进行初步分析;并构建了银杏内酯前体合成途径上1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)的表达载体。[结果]该研究得到较合适的遗传转化方案,即用银杏胚作为外植体,用携带pCAMBIA1304+的EHA105农杆菌进行侵染,共培养3d,进行GUS染色,结果显示转化后GUS阳性率较高。[结论]该研究为进一步的银杏转基因研究工作奠定了基础。

人正常肾组织全长cDNA文库的构建及鉴定

目的 构建人正常肾组织的cDNA文库并鉴定文库质量。方法 运用mRNA 5′末端的模板转换方法以powerscript逆转录酶进行转录 ,在mRNA的 5′末端添加一段 5′ oligo做为延伸后的模板 ,从而富集全长cDNAs。扩增后的cDNAs经sfiⅠ酶切、柱层析洗脱 ,重组于λTripIEx2 载体并包装后 ,测定滴度、重组率 ,扩增文库。随机挑取 8个噬菌斑行PCR反应扩增插入片段。结果 构建的cDNA文库滴度为 2 .6× 10 6pfu·mL-1,重组率 >95 % ,扩增后滴度达 9× 10 11pfu·mL-1。 8个插入片段长度为 0 .7～ 2 .0kb。结论 构建的人正常肾组织cDNA文库为高效全长的cDNA文库 ,符合cDNA文库的要求 ,可以用探针、抗体等做免疫学筛选 ,进一步探寻与肾脏疾病相关的基因。

银杏HDR基因的克隆与功能分析

[目的]获得银杏HDR基因的克隆并研究HDR基因的功能。[方法]采用RT-PCR技术获得银杏HDR的全长cDNA,命名为Gb-HDR(GenBank登录号:DQ364231),该基因cDNA全长为1827bp,包含1425bp的开放阅读框,编码474个氨基酸残基的蛋白;并构建GbHDR的原核表达载体pTrcGbHDR,与原核表达载体pAC-BETA共转入大肠杆菌XL1-Blue,获得β-胡萝卜素工程菌。[结果]克隆获得实际长度为1441bp的GbHDR基因,该序列包含1425bp的HDR基因ORF,编码474个氨基酸残基的蛋白,其预测分子量为53.2kD,等电点预测为5.76。功能互补分析表明,GbHDR能推动工程菌XL1-Blue+pTrcGbHDR+pAC-BETA超量表达β-胡萝卜素,在颜色互补平板上呈现β-胡萝卜素特有的橘黄色,证实GbHDR具有典型的HDR基因功能。[结论]获得1株可高量积累β-胡萝卜素的大肠杆菌工程菌,为最终实现β-胡萝卜素代谢工程提供侯选基因和作用靶点。

银杏GGPPS转运肽与GFP融合基因表达载体的构建

[目的]构建银杏GGPPS转运肽与GFP融合基因表达载体。[方法]以银杏为材料,采用DNA重组技术克隆GGPPS基因质体转运肽(TP)序列,并将其与高效植物表达载体p1304+连接形成融合表达载体(p1304+-TP);冻融法转化根瘤农杆菌EHA105,构建工程菌(EHA105-p1304+-TP)。[结果]成功构建了银杏GGPPS转运肽与GFP融合基因表达载体及农杆菌工程菌。[结论]为进一步研究TP转运肽的亚细胞定位奠定基础,有助于阐明银杏内酯前体生物合成关键步骤的分子机理,同时为银杏内酯的代谢工程研究提供重要依据。

腊梅花水通道蛋白CpTIP基因甘露糖筛选体系植物表达载体的构建

[目的]构建以甘露糖为筛选剂的抗旱、抗盐碱植物表达载体,进一步选育无标记的抗逆作物品种。[方法]利用腊梅花水通道蛋白CpTIPcDNA和大肠杆菌pmi基因构建植物表达载体,将抗逆基因与甘露糖正向选择系统结合。[结果]成功构建了腊梅花水通道蛋白CpTIP基因甘露糖筛选体系植物表达载体pPMI∶∶CpTIP。[结论]所构建的载体结合了抗逆基因和甘露糖正向选择系统的优点,将抗逆基因与环境友好型筛选体系很好的结合起来。

Construction of Chimonanthus praecox(L.)Link Aquaporin CpTIP Plant Expression Vector with Mannose Selection System

[ Objective] The aim was to construct drought and saline-alkaline resistance plant expression vector with mannose as selective agent, and further breed unmarked resilient varieties. [ Method] The plant expression vector was constructed by using Chimonanthus praecox（ L. ）Link aquapor.in CpTIP cDNA and Escherichia coli pmi gene, combined stress resistance gene with mannose positive selection system. [ Result] The test successfully constructed the plant expression vector pPMI：：CpTIP. [ Conclusion] The constructed vector linked advantages of stress resistance gene and mannose positive selection system.

基于多分类器决策融合的印鉴真伪鉴别方法

印鉴的自动识别对于实现银行印鉴数字化及计算机管理、实现银行对公业务的通存通兑有重大意义 ,符合票据法的要求 ,是银行业发展的需要。本文研究了模式识别领域中印鉴识别这一问题 ,提出了特征抽取和分类的新方法。基于差图像的成分统计特征抽取方法 ,发展了骨架图像的结构特征抽取方法 ,提出了特征点距离特征和笔划曲率特征两种新的有效特征。本文提出了基于支持向量机 ( Support vector m achine,SVM)多分类器融合印鉴鉴别的方法。试验结果表明 ,本文的方法大大提高了印鉴的鉴别能力和可靠性 。

葡萄糖氧化酶基因转化玉米及其后代的抗病性研究

通过花粉管通道法将葡萄糖氧化酶基因（Glucose oxidase,GO）转入玉米自交系,并对转化后代进行了大斑病抗性鉴定。结果表明,授粉后15～20h为最佳外缘基因导入时间段,最适合的转化质粒DNA浓度为100μg·mL^-1。转化获得卡那霉素抗性植株244株,PCR阳性植株13株,对转化的D0代PCR阳性植株的抗病性进行了大斑病抗性鉴定,部分转化植株的抗玉米大斑病能力有所提高,其中3株表现高抗。研究为探索大众化玉米转基因和培育抗病玉米自交系提供了新方法。

SMART技术构建肾乳头状腺癌及癌旁组织的cDNA文库

目的 :运用SMART技术构建肾乳头状腺癌及癌旁组织的cDNA文库 .方法 :运用mRNA 5′末端的模板转换方法 ,即SMART技术 ,以纯化的Poly(A) + RNA为模板 ,用Powerscript逆转录酶进行转录 ,并在mRNA的 5′末端添加一段 5′ oligo作为延伸后的模板 ,从而富集全长cDNA .cDNA扩增后 ,经sfiI酶切、CHROMASPIN 4 0 0洗脱 ,与λTripIEx2载体连接并用载体蛋白包装后 ,测定滴度和重组率 ,并扩增 ,建成cDNA文库 .结果 :构建的肾乳头状腺癌及癌旁组织cD NA文库滴度分别为 1.4× 10 6pfu·mL-1和 2 .6× 10 6pfu·mL-1,重组率均 >98% ,扩增后滴度分别达 6× 10 11pfu·mL-1和 9×10 11pfu·mL-1.结论 :我们构建的人肾乳头状腺癌及癌旁组织cDNA文库为高效、全长cDNA文库 ,可以用做探针、抗体等免疫学筛选 。

一种野生大豆根际土壤细菌的分离及其防治大豆病害的研究

为筛选拮抗大豆根腐病的土壤微生物,以邻苯二甲酸为唯一碳源培养基,从野生大豆根际土壤中分离获得1株细菌,命名为HK26-21。通过平皿接种以及16s rDNA序列扩增,根据其生理生化特征和16s rDNA(GenBankAccession No.EF032879)序列相似性分析,将该菌株鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus)。通过单因素试验法确定了最佳降解条件:温度为25℃,pH为7.0,降解速率与接种量呈正相关。平皿微生物对峙试验表明菌株可拮抗大豆菌尖孢镰刀菌和立枯丝核菌。初步认为所分离野生大豆根际芽孢杆菌HK26-21可以缓解大豆连作障碍。

贝伐单抗联合顺铂腹腔灌注治疗恶性腹水疗效观察

目的探讨贝伐单抗联合顺铂腹腔灌注治疗恶性腹水近期疗效及不良反应。方法将34例恶性腹水患者分成2组,治疗组18例,予贝伐单抗(安维汀)5mg/kg联合顺铂60mg/m2,腹腔灌注,第1天;对照组16例,予顺铂60mg/m2,腹腔灌注,第1天。每4周重复,2～3疗程后评价疗效。结果贝伐单抗联合顺铂治疗组CR7例,PR8例,NC/PD3例,ORR为83.3%;对照组CR2例,PR5例,NC/PD9例,ORR为43.8%。治疗组生活质量改善率为88.9%,对照组为56.3%两组患者不良反应以Ⅰ～Ⅱ度骨髓抑制及胃肠道反应为主。结论与传统顺铂单药相比,贝伐单抗联合顺铂组显著提高恶性腹水患者客观缓解率,生活质量明显改善且安全性好,值得进一步临床验证。

一种基于笔划宽度的印鉴分割方法

印鉴分割是正确识别真假印鉴的关键问题 ,本文给出了一种新的印鉴图像分割算法。该算法基于样本章(印鉴 )和待验章 (印鉴 )在具有相同的笔划宽度时 ,分割效果最佳 ,最利于真假印鉴的识别。选定一定范围的灰度值作为可能的阈值 ,从中选出使待验章和样本章的笔划宽度相差最小时的阈值作为最佳阈值。对位于待验章和样本章的交集中的边缘点分别在待验章和样本章中求水平和垂直方向上的笔划宽度 ,并且仅取宽度差最小的一个方向上的宽度差 ,很好地避免了印泥的浓淡、盖印时用力的深浅、印泥污染、笔划断裂和分裂带来的干扰。实验和实践证明 ,该方法分割效果好 ,并具有很好的稳定性 ,在识别真假印鉴的实践中得到了很好的应用。