细胞自噬与人卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系

目的探讨细胞自噬与人卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法以不同浓度的顺铂(0、1、2、4、8、16μg/mL)分别作用人卵巢癌细胞A2780及其顺铂耐药株A2780/DDP 48h,采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖率,透射电镜检测顺铂诱导细胞自噬体的形成,Western blot法测定自噬和凋亡相关蛋白。结果与A2780对照比较,A2780/DDP增殖率明显升高(P<0.01);顺铂可以诱导A2780及A2780/DDP中自噬体的形成,且A2780和A2780/DDP中LC3-Ⅱ水平均升高,这种作用可以被自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断;顺铂可以诱导A2780中凋亡相关蛋白Cleaved-PARP水平升高,但作用A2780/DDP时影响不大,当3-MA与顺铂同时作用人卵巢癌细胞时,A2780/DDP中的Cleaved-PARP表达水平显著升高(P<0.01)。结论卵巢癌细胞的耐药可能与顺铂诱导卵巢癌细胞自噬有关,自噬抑制剂3-MA可以抑制顺铂诱导的细胞自噬,同时促进顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡,且增加顺铂耐药株对顺铂的敏感性。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达。结果各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P>0.05)。结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡。

泛素结合酶基因生物信息学与功能分析

目的：生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S（ ubiquitin-conjugating enzyme 2S， UBE2S）生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料，从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析；采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框；利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量，并预测理论分子量和等电点；应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析；蛋白质亚细胞定位采用在线工具（ nibb．ac．jp／form．html）预测，通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域；采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类；采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构；采用MEGA5．05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸，预测相对分子质量为23770，理论等电点为8．81。跨膜结构域分析表明，UBE2S蛋白不含跨膜位点；亚细胞定位预测，UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8．904、0．313和0．291。同源性比较分析结果表明，其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90％～97％，且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息，还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。

乙肝相关性肝癌中新基因CHCHD2的生物信息学分析

应用基因芯片技术获取以稳定转染HBx基因的肝癌细胞HepG2(HepG2-X)及非转染的肝癌细胞HepG2的差异表达的基因,利用生物信息学方法对新基因CHCHD2进行初步分析表明,该蛋白开放性读码框长456 bp,编码151个氨基酸残基,相对分子量为15.55 kD,等电点9.43,是主要定位于线粒体中的亲水性蛋白,二级结构均以α-螺旋和无规则卷曲为主要构件。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他17个物种相似性为64%-99%,且符合种属之间的进化关系。

c-FLIP蛋白与卵巢癌细胞对TRAIL耐药抵抗的关系

目的探索卵巢癌细胞对TRAIL诱导凋亡耐药抵抗的机制。方法分别选择12.5、25、50、100ng/mL的人重组TRAIL蛋白作用于卵巢癌细胞3AO和CAOV3,在18、24、48、72h时间点收集细胞,MTT法检测细胞的生长抑制率;原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞;流式细胞仪(FCM)检测细胞的凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白c-FLIP蛋白表达的水平。结果 TRAIL抑制了3AO和CAOV3细胞的生长增殖,24h3AO、CAOV3细胞的生长抑制率分别为28%、10%,并且TRAIL增多可诱导细胞凋亡,24h的3AO细胞凋亡率(8.5%)明显高于CAOV3(5.5%)。CAOV3细胞中c-FLIP蛋白的表达水平高于3AO细胞。结论 c-FLIP蛋白是卵巢癌细胞对TRAIL耐药抵抗的一种重要调控蛋白。

HBV抗原肽冲击的DC对慢性乙型肝炎及HBV携带者的免疫治疗作用

目的:观察HBV抗原肽冲击的自体树突状细胞对慢性乙型肝炎(CHB)及HBV携带者的疗效及安全性.方法:HBV抗原肽致敏的树突状细胞,经培养后回输给患者,总疗程6mo,分为:密集治疗期(第1-3月),10-20d为1个周期;巩固治疗期(第4-6月),30d为1周期.临床疗效跟踪期(第7-12月);远期疗效观察期(第13-24月).首次治疗前行高通量HBV变异基因检测,每次治疗前、后检查HBV-M,HBV DNA,血尿常规、肝功能、肾功能、肝胆胰脾B超及血HBV DNA载量.结果:384例慢性HBV感染患者中,发生C区变异最多:58例(15.1%);HBeAg(+)CHB134例中,分别有58例(43.3%)、21例(15.7%)、75例(55.6%)发生单项病毒学、血清学及生化学应答;HBeAg(-)慢CHB102例中,分别有40例(39.2%)、53例(52%)发生单项病毒学及生化学应答;81例慢性HBV携带者中,28例及33例分别发生病毒学、血清学应答.1年时,完全应答112例(29.2%),2年时,完全应答124例(32.4%);与治疗前相比HBsAg、HBeAg及血清HBV DNA载量均发生显著性的变化(2484.39±185.2ng/L vs1616.28±169.81ng/L;32.1±5.78ng/L vs69.9±7.61ng/L;0.08±1.78×108copies/L vs1.79±1.21×108copies/L,P<0.05或0.01);治疗期间及结束后,无严重不良反应发生.结论:HBV抗原肽冲击的树突状细胞可用于CHB的治疗,疗效及安全性确切.

前列腺癌组织中AQP_1的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的检测水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)和CD105在前列腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组化二步法检测23例前列腺增生组织、52例前列腺癌组织中AQP1蛋白和CD105的表达情况,并计数CD105标记的微血管密度。结果 AQP1在前列腺癌组织阳性表达率明显高于前列腺增生组织(71.15%vs 28.85%)。前列腺癌组织中MVD明显高于前列腺增生组织(20.13±2.84 vs 5.32±1.73,P<0.01)。AQP1阳性组的MVD明显高于阴性组,两者密切相关。AQP1蛋白表达和MVD与患者年龄、肿瘤大小无关,而与肿瘤分化程度及临床分期呈正相关系。结论结果提示前列腺癌中存在AQP1的高表达,其与CD105可能在前列腺癌的发展过程中起重要作用,两者结合可能成为前列腺癌病变生物学行为的重要指标。

迷迭香酸干预下HBX基因对人肝癌细胞凋亡的影响

目的研究迷迭香酸(Rosmarinic acid)对人肝癌HepG2细胞及稳定转染HBx基因的HepG2细胞(HepG2-X)增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养HepG2及HepG2-X细胞,加入不同浓度用迷迭香酸处理后,用MTT实验检测细胞增殖抑制率,用细胞划痕和Transwell小室法测定对细胞迁移力的影响。结果不同浓度迷迭香酸均能够抑制HepG2、HepG2-X细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,各HepG2-X组细胞A值均明显高于HepG2细胞(P<0.05),显示HBX对HepG2细胞具有促进增殖作用。与对照组相比,实验组细胞划痕愈合减缓(P<0.05),Transwell穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。且呈浓度依赖性。结论迷迭香酸能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭力,HBx在迷迭香酸的干预下能促进HepG2细胞凋亡的作用。

槲皮素干预下HBx基因对人肝癌细胞侵袭、迁移、增殖的影响

目的探讨槲皮素(quercetin)对人肝癌HepG2细胞及稳定转染HBX基因的HepG2细胞(HepG2-X)增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养HepG2及HepG2-X细胞,分别加入10,20,40,80μmol/L槲皮素进行处理后,用MTT实验检测细胞增殖抑制率,采用涂有Matrigel胶的Transwell小室模型对传代培养的HepG2细胞进行体外侵袭力检测。结果不同浓度槲皮素均能够抑制HepG2、HepG2-X细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,各HepG2-X组细胞A值均明显高于HepG2细胞(P<0.05),HBX对HepG2细胞具有促进增殖作用。Transwell试验结果显示,与空白对照比较,槲皮素处理组HepG2细胞侵袭能力明显下降,且呈浓度依赖性。结论槲皮素能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭力,HBx在槲皮素的干预下能促进HepG2细胞的增殖作用。

TRAIL联合顺铂对卵巢癌细胞株CAOV3增殖抑制的实验研究

目的研究TRAIL联合顺铂对卵巢癌细胞株CAOV3生长增殖和诱导凋亡的作用。方法倒置显微镜下观察对照组(不加干预)和实验组(TRAIL组、顺铂组、TRAIL和顺铂联合组)细胞的形态变化;MTT法检测各组CAOV3细胞生长增殖,计算细胞的生长增殖率;流式细胞仪(FCM)检测各组细胞凋亡率。结果实验各组对卵巢癌CAOV3细胞均有一定程度的增殖抑制和诱导凋亡作用,倒置显微镜下实验组细胞有形态的改变,TRAIL组作用CAOV3细胞24 h凋亡率是5.6%,顺铂组CAOV3细胞凋亡率是10.4%,TRAIL和顺铂联合组凋亡率是29.2%。两药联用组凋亡率显著高于单独用药组(P<0.05)。结论卵巢癌CAOV3细胞对TRAIL不敏感,顺铂能显著增加CAOV3细胞对TRAIL的敏感性。两药联合应用有协同作用。

126例Ⅰ类切口术后感染调查分析

目的:了解I类切口手术后感染状况,常见病原菌及细菌耐药情况。方法:查阅2011年7-12月某院Ⅰ类切口术后感染病历126份,调查Ⅰ类切口手术后感染部位、感染与患者年龄关系、常见病原菌及细菌耐药情况。结果:该院Ⅰ类切口手术后感染前三位的感染部位分别为上、下呼吸道及手术切口感染;感染多发于高龄患者,70岁以上老人感染率为31.17%;感染病原菌以G-菌为主,占75.8%,前三位的致病菌分别为大肠埃希菌(28.71%)、肺炎克雷伯菌(19.8%)、鲍曼不动杆菌(14.36%)。结论:规范Ⅰ类切口围手术期预防用抗菌药物后,该院Ⅰ类切口术后感染细菌耐药情况渐趋好转,但鲍曼不动杆菌的耐药率有上升趋势,仍需进一步规范I类切口围手术期预防用抗菌药物,重点针对老年患者,加强呼吸道及切口管理,以改善骨科及神经外科等重点科室术后感染情况。

肿瘤坏死因子-α在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在前列腺癌组织中的表达,探讨其与前列腺癌临床病理特征和肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组织化学二步法检测2010年1月-2012年1月20例前列腺增生组织、50例前列腺癌组织中TNF-α蛋白和CD105的表达情况,并计数CD105标记的微血管密度(MVD)。结果免疫组织化学结果显示TNF-α在前列腺癌组织的肿瘤细胞膜及细胞质中表达较高(41.72±8.67),而在前列腺增生组织中表达较低(21.01±3.85),差异有统计学意义(t’=13.990,P<0.001);CD105在前列腺癌中阳性染色定位于肿瘤微血管内皮细胞膜表达较高(20.15±2.67),而在前列腺增生组织中表达较低(4.34±1.67),差异有统计学意义(t’=29.771,P<0.001)。TNF-α和CD105的表达与患者年龄、肿瘤大小无关,与前列腺癌的临床分期呈正相关(rs=0.847,P<0.001;rs=0.776,P<0.001),与病理分级呈负相关(rs=-0.769,P<0.001;rs=-0.842,P<0.001)。结论前列腺癌组织中存在TNF-α的高表达,其可能在前列腺癌的血管生成和肿瘤的发生、发展中起重要作用。

腺苷酸活化蛋白激酶激活与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:研究腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活与卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法:以不同浓度的顺铂(0,3.125,6.25,12.5,25,50μmol·L-1)分别作用人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP 24h,MTT法检测顺铂的抑制率;透射电镜检测SKOV3和SKOV3/DDP中的自噬体;流式细胞术检测顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP的凋亡率;Western blot法测定基础状态下及顺铂单独或联合AMPK抑制剂compound C作用时,SKOV3和SKOV3/DDP中p-AMPK、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)和凋亡蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达差异;并测定compound C联合顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP时的细胞活性。结果:与SKOV3比较,SKOV3/DDP对顺铂耐药(RI=6.8);SKOV3/DDP中自噬体明显增多(P<0.01);顺铂对SKOV3/DDP早期凋亡率(7.0±0.55)%远低于SKOV3早期凋亡率(30.5±0.34)%(P<0.01);SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达量均增加,顺铂作用时Cleaved-PARP表达不明显;compound C与顺铂同时作用时,SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达减少,Cleaved-PARP表达水平显著升高,且SKOV3/DDP对顺铂敏感性增加。结论:SKOV3/DDP中p-AMPK的激活诱导卵巢癌细胞自噬可能导致其对顺铂耐药,compound C抑制p-AMPK的激活,与顺铂同时作用促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡,且增加其对顺铂的敏感性。

肾上腺髓质素在肝癌患者中的表达及意义

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)在肝癌患者中的表达及其与肝癌临床生物学特征的相关性。方法选取2012年1月-2013年11月外科住院手术的54例肝癌患者肿瘤组织标本及18例良性组织标本,采用免疫组织化学法检测组织中ADM的表达情况,分析ADM表达与肝癌的临床生物学特征的关系。另选取2013年1月-6月60例住院肝癌患者和40例门诊健康体检者,检测血浆ADM表达情况。结果肝癌组织中ADM蛋白表达明显高于正常肝组织(P<0.01),肝癌组织中ADM蛋白的表达与肝癌分化程度有一定关系(P<0.05),与年龄、病理类型和分期无明显关系(P>0.05)。肝癌组血浆中ADM含量均高于对照组(P<0.05),且血浆中ADM的表达与分期有一定关系(P<0.05)。结论肝癌患者中ADM表达明显增强,其表达水平与肝癌分化程度显著相关,ADM基因在肝癌的发生、发展中可能起重要作用。