pQE32-FOXP4ORF质粒的构建及其表达的研究

利用已建立的GenBank数据库提供的已知序列,初步克隆了一个新的人类基因,经国际基因命名委员会批准命名为FOXP4(forkheadboxP4).FOXP4的开放阅读框ORF长4186bp,包含有17个外显子,可以编码一个667个氨基酸的多肽链,蛋白质相对分子质量大小为73.4kDa.为了研究FOXP4基因编码产物在细胞内的作用,构建表达型质粒(pQE32)与FOXP4基因的穿梭表达载体pQE32-FOXP4ORF.利用异丙基硫代-βD-半乳糖苷(isopropyl-βD-t-hiogalactoside,IPTG)对蛋白质的表达进行诱导,在适合的温度和浓度下,经过一定的时间,使细胞大量表达外源蛋白.用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,得出诱导的最佳的浓度和温度,再进行大量诱导,通过电泳分离,将外源蛋白提取出来,从而对基因的功能进行进一步的研究.

MicroRNA-101通过靶向SOX9抑制人胶质母细胞瘤的增殖、迁移和侵袭

多形性胶质母细胞瘤(GBM)起源于大脑皮质,是最常见的原发性恶性肿瘤.尽管当今的治疗手段不断进步,包括手术、放疗、化疗和光动力治疗等,然而GBM患者的预后情况仍然较差.最近的研究表明,microRNA-101(miR-101)在人肿瘤中显著下调,并与肿瘤细胞的增殖和肿瘤干细胞的自我更新有关.另外,miR-101在神经胶质瘤标本和细胞系中显著下调,但胶质瘤中miR-101的这种下调现象的分子机制尚不明确.本研究发现miR-101可以通过靶向SOX9在体内和体外抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭.沉默SOX9对胶质瘤细胞的增殖和侵袭影响与miR-101类似.qRT-PCR和Western blot检测发现在人神经胶质瘤细胞系U251MG和U87MG中miR-101与SOX9呈负相关,荧光素酶报告分析发现miR-101可以通过靶向SOX9的3’UTR区抑制SOX9的表达.研究结果表明miR-101通过靶向抑制SOX9的表达在体内和体外调节人神经胶质瘤的增殖、迁移和侵袭,说明miR-101是未来神经胶质瘤治疗的潜在靶标.

HSP27高表达与人白血病多药耐药细胞K562/VCR的关系

背景与目的:白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)是白血病化疗失败的常见原因,虽然已有研究揭示了一些肿瘤MDR机制,但目前仍然不能完全解释MDR现象。本文旨在应用蛋白质组学方法筛选白血病耐药相关蛋白,并研究其与白血病MDR的关系,为进一步阐明白血病MDR发生的分子机制提供理论依据。方法:二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术分离白血病细胞K562和人白血病耐药细胞K562/VCR的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time offlight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。应用反义核酸技术将分离鉴定差异表达蛋白的反义核酸转染至耐药细胞,Western blot检测转染后差异蛋白的表达情况,MTT法检测转染后细胞存活率,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率。结果:在K562/VCR细胞与K562细胞中鉴定出一差异表达蛋白点,并用质谱分析证实其为热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)。用HSP27反义核酸转染K562/VCR细胞,在不同浓度长春新碱作用下,HSP27反义核酸转染的K562/VCR细胞的存活率较对照错义核酸转染组明显降低(P<0.05),流式细胞仪显示细胞凋亡率为16.37%,明显高于对照组(P<0.05)。结论:HSP27在K562/VCR细胞中高表达,其表达抑制后,K562/VCR细胞对长春新碱的敏感性增强。

溶瘤病毒的肿瘤免疫治疗研究进展

溶瘤病毒作为一种新的肿瘤治疗制剂,通过病毒对肿瘤细胞的杀伤作用和诱导全身性抗肿瘤免疫反应两种作用机制引发抗肿瘤免疫反应.其具体的分子机制尚不明确,但可能由病毒在肿瘤细胞中的复制增殖而诱导细胞死亡、与肿瘤细胞抗病毒元件的相互作用、促进内在自发的或适应性抗肿瘤免疫反应等多种作用因素参与.本文综述了溶瘤病毒作为抗肿瘤治疗剂的免疫治疗原理、基因编辑提高溶瘤病毒的治疗效力及其临床应用.

己糖激酶2在胶质瘤中的作用

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,具有强复发性及侵袭性,治愈率极低且预后差.Warburg效应是恶性胶质瘤极为重要的生物学特征之一,而HK2是促进Warburg效应的关键酶,在多种肿瘤组织中高表达并能促使肿瘤发展,但其在恶性胶质瘤中的活性及功能却鲜有报道.本文将从胶质瘤的能量代谢改变介绍,综述糖酵解的限速酶——己糖激酶2在恶性胶质瘤中发挥的功能和可能作用机制,总结并展望其在胶质瘤诊断和治疗中的现状及应用前景.

胶质瘤中甲基化沉默肿瘤抑制因子的研究进展

肿瘤抑制基因(tumor suppressor genes,TSGs)的表观遗传沉默对胶质瘤的发生和发展至关重要.越来越多的与细胞周期、增殖、凋亡、迁移、浸润、DNA修复和信号通路密切相关的且被甲基化调控的TSGs被鉴定出来.TSGs在胶质瘤里特异性的甲基化表明其既可以作为分子诊断的标记物,也可能成为治疗胶质瘤的一个靶标.本研究对人脑胶质瘤中被甲基化沉默的TSGs进行了总结,这为理解胶质瘤发展过程中表观遗传学修饰的紊乱提供了依据.

基于深度卷积神经网络的人工智能在喉鳞状细胞癌窄带成像辅助诊断中的应用

目的探讨基于卷积神经网络(convolutional neural network,CNN)的人工智能(artificial intelligence,AI)技术通过深度学习辅助喉鳞状细胞癌(以下简称喉鳞癌)临床诊断的可行性。方法本研究采用一套深度CNN用以评估喉鳞癌患者的窄带成像(narrow band imaging,NBI)内镜图像。纳入2015—2017年期间就诊于首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科的喉病变患者4799例,其中男3168例,女1631例,年龄21~87岁。采用简单随机化法选取2427例患者的NBI内镜(其中喉良性病变1388例,喉鳞癌1039例)用于对AI系统的训练和校正。对余下的2372例患者采用NBI内镜(其中喉良性病变1276例,喉鳞癌1096例)对AI进行测试,并与耳鼻咽喉头颈外科专家判读结果进行比较。采用SPSS 21.0软件进行卡方检验,计算AI及耳鼻咽喉头颈外科专家判读的准确率、敏感度及特异度,采用受试者工作特征曲线(receiver operating curve,ROC)的曲线下面积(area under the curve,AUC)来评估本算法对NBI内镜图像的判读能力。结果AI验证集的准确率为90.91%(AUC=0.96),敏感度为90.12%,特异度为91.53%,与耳鼻咽喉头颈外科专家判读结果相当[准确率为(91.93±3.20)%,敏感度为(91.33±3.25)%,特异度为(93.02±2.59)%],差异无统计学意义(t值分别为0.64、0.75、1.17,P值分别为0.32、0.28、0.21)。CNN的判读速度明显高于耳鼻咽喉头颈外科专家,差异有统计学意义(每图0.01 s比每图5.50 s,t=9.15,P<0.001)。结论本研究证实了基于深度CNN的AI在喉NBI内镜判读上的有效性,提示AI在喉鳞癌的临床辅助诊断方面有很好的应用前景。