两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的:观察口腔常用材料氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞(embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9)、原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf-H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法:诱导人胚胎干细胞(H9)分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果:CH或复合树脂分别作用24 h和48 h(或72 h)之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs(P<0.05),但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异(P>0.05)。结论:对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。

第一乳磨牙与第一前磨牙异位埋伏阻生1例

牙阻生（impaction of teeth）是指超过了应该正常完全萌出的时间,牙仍在颌骨内未萌出或者仅部分萌出。阻生可以是一颗牙或者数颗牙受累,常对称性发生。牙阻生常见于恒牙列,最常累及第三磨牙、下颌前磨牙和上颌尖牙,乳牙列罕见。在乳牙阻生的报道中,多为下颌第二乳磨牙阻生,上颌第二乳磨牙少见。

iRoot BP对人乳牙牙髓细胞增殖、矿化的影响

目的探讨iRoot BP对人乳牙牙髓细胞增殖、矿化的影响,为其用于乳牙活髓保存治疗提供依据。方法将iRoot BP和三氧化矿物凝聚体(MTA)分别制成高度2 mm、直径8 mm的圆柱体,置于DMEM细胞培养基中,收集浸提液。原代培养人乳牙牙髓细胞并鉴定。随机将人乳牙牙髓细胞分为iRoot BP组、MTA组、对照组。iRoot BP组和MTA组分别加入适量iRoot BP、MTA浸提液,使其终浓度分别为10%、20%、50%、100%,对照组不予处理。采用CCK-8法检测三组培养24、72 h时细胞增殖指数,采用实时荧光定量PCR法检测三组培养48、96 h时碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达(iRoot BP、MTA浸提液浓度均为10%)。结果与对照组同时间点比较,含50%、100%浸提液的iRoot BP组、MTA组细胞增殖指数均降低(P均<0.05),而含10%、20%浸提液的iRoot BP组、MTA组细胞增殖指数无明显变化(P均>0.05)。与对照组同时间点比较,iRoot BP组、MTA组ALP mRNA相对表达量均升高(P均<0.05)。iRoot BP组与MTA组作用48、96 h ALP mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 10%iRoot BP浸提液对人乳牙牙髓细胞增殖无明显影响,但可明显促进细胞矿化。

琥珀标本及其在种子标本制作中的应用

琥珀标本尤其是昆虫琥珀标本制作已经广泛应用于各高等农林院校和中小学的实验教学中,发挥了极其重要的作用。而目前在我国种子琥珀标本制作鲜有报道。根据农作物、烟草和药用植物等各种植物种子的类型和形态特征,设计种子画图案,可以制作出精美的种子琥珀标本。将种子琥珀标本引入实验和实践教学,将为高等院农林院校农学和种子学相关专业学生的实验教学和实践实习提供宝贵的学习资源,对促进大学生专业能力的培养具有重要意义。

基于人胚胎干细胞健康安全评价新载体的构建

常用的外源性化合物多达6至7万种，均可通过各种途径进入体内损害机体，危害人类健康。现用的国际标准中，健康安全体外评价载体仍采用微生物、动物及人类永生化细胞、肿瘤细胞或原代培养细胞，但微生物和动物不能完全反映人类的生物学特征，肿瘤细胞不是正常健康的细胞，而原代培养细胞非单一来源细胞，无法进行标准化，因此，急需建立新的生物安全性评价的体外模型。

LED用CaMoO_4:Dy^(3+),Eu^(3+),Tm^(3+)白色荧光粉的制备及发光性质研究

采用共沉淀法制备了Dy^(3+)、Eu^(3+)共掺杂;Dy^(3+)、Tm^(3+)、Eu^(3+)三掺不同掺杂浓度的CaMoO_4纳米发光材料,并且研究了其发光性质.在Dy^(3+)、Eu^(3+)共掺杂CaMoO_4体系中,在蓝光454 nm波长激发下,随着Eu^(3+)离子浓度变化色坐标逐渐向红光区移动,并发现了Dy^(3+)对Eu^(3+)的能量传递现象.在Dy^(3+)、Eu^(3+)、Tm^(3+)三掺杂体系中在365nm光激发下色坐标更为接近白光的标准色坐标值,能够合成比较理想的白光.

富血小板纤维蛋白对犬牙髓细胞的体外作用

目的:检测比格犬静脉血制取的富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对自体牙髓细胞(canine dental pulp cells,cDPCs)增殖和趋化的作用,探讨PRF作为自体来源生物材料在临床活髓治疗中应用的可行性。方法:用酶消化法分离培养cDPCs;用Choukroun一步离心法制取PRF,将其浸泡于纯净的最小必需培养基α(minimum essential medium alpha medium,α-MEM)中,于第7天取浸出液,即为PRF浸出液。细胞增殖作用采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测,对照组为含2%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的α-MEM培养基,实验组为含2%FBS的PRF浸出液,并按PRF浸出液浓度(体积分数)分为20%、40%、60%、80%、100%共5组,分别记为PRF1、PRF2、PRF3、PRF4、PRF5。趋化实验采用Transwell模型,实验组PRF浸出液浓度选择对增殖促进作用最显著的浓度,阴性对照组为不含FBS的α-MEM培养基,阳性对照组为含30%(体积分数)FBS的α-MEM培养基,各组上室均接种1×105个细胞。结果:PRF2组的光密度值(1.45±0.06)显著高于对照组(1.21±0.11),差异具有统计学意义(P<0.001),PRF1组、PRF3组、PRF4组、PRF5组光密度值分别为1.20±0.02、1.28±0.04、1.19±0.02、1.22±0.02,与对照组差异无统计学意义(P值分别为0.902、0.084、0.726、0.779),即40%浓度的PRF浸出液对自体cDPCs的增殖具有显著的促进作用,在该浓度下,PRF组细胞迁移数目为55.89±18.42,与阴性对照组(6.52±1.97)比较差异具有统计学意义(P<0.001),而与阳性对照组(59.25±29.17)差异无统计学意义(P=0.970)。结论:PRF与cDPCs有良好的生物相容性,40%浓度的PRF浸出液可促进cDPCs的增殖、趋化作用,提示PRF可作为活髓治疗中牙髓修复的盖髓材料使用。

人胚胎干细胞分化为角质形成细胞过程中标志物的表达特点

目的:诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)定向分化为角质形成细胞K-h ESCs(keratinocyte derived from human embryonic stem cells),并分析诱导过程中K-h ESCs不同标志物的表达特点。方法:运用含骨形成蛋白4、维甲酸和N2添加剂的上皮分化培养基直接诱导h ESCs分化为K-h ESCs,通过染色体核型分析检测K-h ESCs核型,通过实时定量PCR检测K-h ESCs在分化的不同时期基因的表达及其与原代人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)、人永生化口腔上皮细胞(human immortalized oral epithelial cells,HIOECs)、人永生化皮肤角质形成细胞Ha Ca T的基因表达差异;利用免疫组织化学检测不同标志物在K-h ESCs的蛋白表达。结果:运用上皮分化培养基成功地诱导h ESCs分化为上皮样细胞K-h ESCs;K-h ESCs核型具有正常46条染色体,无结构异常;K-h ESCs中角质形成细胞标志物基因p63的表达明显低于Ha Ca T细胞(P<0.05),而与HGECs和HIOECs中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:运用上皮分化培养基可成功诱导h ESCs分化为具有正常核型的Kh ESCs;标志物的表达特点提示诱导h ESCs分化为K-h ESCs的过程是从h ESCs向单层上皮干细胞分化继而转向复层上皮终末分化发展的趋势,最终得到的K-h ESCs类似于单层鳞状上皮干细胞向终末分化初始阶段的角质形成细胞,该阶段的细胞由上皮干细胞静止状态被激活,处于分化初始高增殖活力阶段。

生物陶瓷材料在乳牙牙髓切断术中的应用

目的:研究生物陶瓷材料(iRoot BP Plus)作为盖髓剂用于乳牙牙髓切断术的临床可操作性和疗效,为临床应用提供参考依据。方法:选择2016年9月至2017年9月到北京大学口腔医院第三门诊部儿科就诊患者,在乳磨牙的牙髓切断术中使用生物陶瓷材料作为盖髓剂,以治疗时间为观察开始时间,以最后一次拍摄X线片的时间为观察终点时间,对患牙进行定期随访观察1年以上,每次复诊时记录患牙的临床检查和X线片检查情况,将患牙预后归为N、H、P0、PX、PY五类,N为临床和X线均未见异常,H为临床未见异常,X线表现为牙根生理性吸收,P0为临床未见异常,X线出现牙髓钙化、牙根吸收等改变,但暂时无需治疗,PX为临床出现或未出现异常,X线出现根尖周病变,需要根管治疗或拔除,PY为乳牙早失;其中N、H定义为成功,P0、PX、PY定义为失败。结果:截至2018年9月,共纳入患牙40颗(患者34人),初诊年龄为3. 1～8. 5岁,平均(4. 7±1. 2)岁,观察时间12～24个月(中位时间16个月),患牙预后符合N的牙齿34颗,符合H的2颗,符合P0的1颗,符合PX的3颗,符合PY的0颗。使用生物陶瓷材料作为盖髓剂的乳磨牙牙髓切断术12个月成功率95%。结论:使用生物陶瓷材料作为盖髓剂进行乳牙牙髓切断术取得满意疗效,可以作为盖髓剂用于乳牙牙髓切断术的常规治疗。

不同品种冬小麦苗期叶绿素荧光参数与抗旱性关系研究

为了探寻快速高效筛选冬小麦抗旱品种的方法,给冬小麦抗旱品种筛选提供参考依据,以烟农999、泰麦1918、济麦22号、济麦23号、泰山27和师栾02-16个冬小麦品种为供试材料,设置正常水分处理(土壤相对含水量75%)、轻微干旱处理(土壤相对含水量55%)和中度干旱处理(土壤相对含水量40%),研究了苗期叶绿素荧光参数、生物量、根冠比、SPAD、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及其之间相关关系。结果表明:与其他冬小麦品种相比,干旱胁迫下,泰麦1918的抗旱系数(DTC)最大,根冠比降低程度最小,SPAD值、光系统Ⅱ最大光合效率(Fv/Fm)、光系统Ⅱ实际光合效率(φPSⅡ)和相对电子传递速率(ETR)的降低程度最小,SOD活性的降低程度最小,非光化学淬灭(NPQ)升高程度最大,丙二醛含量升高程度最小。6个供试冬小麦品种的抗旱性强弱依次为泰麦1918>烟农999>济麦22号>济麦23号>泰山27>师栾02-1。通过相关性分析发现,叶绿素荧光参数与抗旱系数、SOD活性以及MDA含量的相关性均达到极显著水平。综上,供试材料中泰麦1918的抗旱性最强,叶绿素荧光参数可作为在苗期筛选冬小麦抗旱性品种的重要依据。

转苋色藜NDR1基因水稻的获得及对白叶枯病抗性的初步研究

NDR1(non-race-specific disease resistance)基因能介导植物广谱抗病,在植物的防御反应中发挥重要作用。以特色抗病植物苋色藜为材料,克隆并鉴定了NDR1的同源基因Ca NDR1a和Ca NDR1b。在此基础上,利用该基因分别构建植物表达载体,农杆菌介导转化法获得转基因水稻,经PCR和Southern杂交证明外源基因已整合到水稻基因组中。选取部分株系进行水稻白叶枯病抗性鉴定,记录接种后3 d、5 d、10 d的叶片病斑长度,结果表明:转Ca NDR1a、Ca NDR1b基因水稻对白叶枯病具有一定的抗性,可延迟发病。外源基因在转基因水稻植株中均有较高水平表达,但抗病性较好株系Ca NDR1基因的表达量并非最高。农艺性状调查结果显示多数转基因植株株高较对照组矮,但结实率、千粒重等农艺性状与对照组相比并无显著差异。