猪圆环病毒2型广东株全基因的克隆与序列分析

根据GenBank中发表的已知猪圆环病毒2型(PorcineCircovirus2,PCV2)全基因序列,自行设计2对特异性引物,从2株接种疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征(post weaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)仔猪病料的PK15细胞中提取基因组DNA,以此为模板,用PCR方法分2段扩增2个PCV2广东株(GZ株和ZS株)的全基因序列.应用序列分析软件DNAstar,对所测2组PCV2序列与GenBank中的国内外PCV2毒株进行同源性比较,并绘制系统进化发生树,进行了序列分析.结果表明,2个PCV2广东株全基因组皆为1767bp,2个毒株间全基因序列核苷酸同源性为77.0%,第一开放阅读框(ORF1)间的核苷酸同源性仅为57.7%,而第二开放阅读框(ORF2)间的核苷酸同源性却高达99.1%.ZS株和GenBank中国内外其他的PCV2参考毒株序列的核苷酸同源性在95.7%～99.5%之间;而GZ株和其他PCV2参考毒株序列的核苷酸同源性仅在74.2%～77.1%之间.

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2截短基因的克隆及原核表达

参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型（Porcinecircovirus type 2，PCV2）的ORF2基因序列，设计合成1对引物，对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段（ORF2-ME）进行PCR扩增，并克隆到pMD18-T Simple Vector中，进行序列测定。将重组质粒pMD—ORF2-ME的EcoR Ⅴ和Xhol Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达载体pET—ORF—ME。测序分析表明，克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99％～100％，推导的氨基酸序列同源性介于91％～100％之间。原核表达载体导入BL21（DE3）后用IPTG进行诱导表达，收集菌液进行SDS—PAGE和Western Blotting分析，结果表明ORF2-ME在BL21（DE3）中成功表达，所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000，并能被PCV2阳性血清所识别，这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据。

口蹄疫病毒3ABC基因的克隆与测序

参考 Gen Bank中发表的猪源 O型口蹄疫病毒 3 ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,以猪源 FMDV/ O/ CC株基因组 RNA为模板 ,RT-PCR扩增 3 ABC基因 ,并克隆到 p MD1 8-T载体中。测序结果显示 ,FMDV/ O/ CC株 3 ABC基因 c DNA长 1 2 81 bp,编码为 42 7个氨基酸残基组成的多肽。核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较发现 ,FMDV/ O/ CC株和 FMDV/O/ TW/ 99株 3 ABC基因亲缘关系密切。核苷酸同源性为 97% ,推导氨基酸序列同源性为96.3 %。

口蹄疫病毒3ABC基因的扩增与序列分析

参考GenBank中发表的猪源O型口蹄疫病毒 (FMDV) 3ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,分别以 5株猪源O型FMDV流行毒株基因组RNA为模板 ,通过RT_PCR的方法获得 3ABC基因 ,并克隆到pMD18_T载体中。测序结果显示 :5株O型FMDV流行毒株的 3ABC基因cDNA均为 12 81bp ,编码由 4 2 7个氨基酸残基组成的多肽。同源性比较和系统发育树分析表明 :5株O型FMDV流行毒株亲缘关系密切 。

口蹄疫病毒3ABC基因遗传关系分析

参考GenBank中发表的猪源O型口蹄疫病毒 3ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,分别以 5株猪源O型FMDV流行毒株基因组RNA为模板 ,通过RT PCR的方法获得 3ABC基因 ,并克隆到 pMD18 T载体中。测序结果显示 ,5株O型FMDV流行毒株的 3ABC基因cDNA均为 12 81bp ,编码由 4 2 7个氨基酸残基组成的多肽。同源性比较和系统发育树分析表明 ,5株O型FMDV流行毒株亲缘关系密切 ,属同一基因型。

2007年版OIE《陆生动物卫生法典》解读与对策

2007年版OIE《陆生动物卫生法典》简称新版《法典》,在通用定义、动物疫病名录、疫病收入标准、疫情通报规定、地区或区域划分以及禽流感等方面进行了重大修订、补充或细化,在具体的疫病章节(包括口蹄疫、牛海绵状脑病和禽流感等)进行了适当的修正,新增了一些新的附录,如牛和小反刍兽精液、活动物鉴定与溯源通用原则、病原与载体的灭活及动物尸体处理的通用指南,还包括4个动物福利指南、抗生素监测和监控指南。新版《法典》最大的变动是取消了OIE A类和B类疫病名录的分类,修订为OIE疫病名录,新增加了西尼罗热等8种,收录进以前未列入《法典》的其他疫病如Q热等10种,还删除了嗜皮菌病等9种,以其他疫病名录取代了新版《法典》未列的其他动物疫病名录。因此,OIE疫病名录由原来的82种增加到93种。在疫情通报方面,新版由原A类疫病扩大到所有OIE名录疫病。在地区或区域划分方面,新版根据特定的条件,如疫病流行病学、环境因素、生物安全措施进行"地区划分"和"区域划分"。在禽流感方面,新版《法典》禽流感的名称从旧版的高致病性禽流感(HPAI)改为通报性禽流感(NAI),内容由原来的4条增加到23条。

用套式PCR方法对几种猪用冻干疫苗的PCV2检测

参照Genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,取其比较保守的基因片段ORF2,利用引物设计软件Oligo5.0设计两对PCV2型特异的引物,其中第一对引物扩增跨度为ORF2全基因片段,长度为702 bp,第二对引物扩增ORF2中间的一个小片段,跨度大小为494 bp。首先用第一对引物扩增阳性DNA,阳性DNA的浓度从10^(-1)稀释到10^(-11),然后以第一次PCR产物为模板,用第二对引物进行PCR,发现这种套式PCR的方法比用普通PCR灵敏度提高10~2倍。同这种套式PCR方法对广东省市场上出售的几种猪用弱毒疫苗进行猪圆环病毒2型检测,结果发现这几种疫苗全部为阴性,本实验说明目前广东市场上出售的弱毒疫苗在制作过程中没有受到PCV2的污染,解除了广大猪场主的顾虑。

出境动物及其产品检验检疫风险管理分析

随着对外贸易的不断深入,我国出口经济得到了迅猛发展。出境动物及其产品作为重要的贸易交互类型,具有一定的风险性。各国在动物及其产品贸易过程中,为了保护本国的生态以及农林牧渔业的安全,都会实行严格的安全和疫病检验。基于此,本文通过对相关概念的分析,指出出境动物及其产品在风险管理中的问题,并且提出相应的对策和建议,希望给相关人员提供借鉴。

宠物食品检测关键点在哪

根据农业农村部发布的最新《宠物饲料管理办法》,宠物饲料是指经工业化加工、制作的供宠物直接食用的产品,包括宠物配合饲料、宠物添加剂预混合饲料和其他宠物饲料,也称为宠物食品。随着人们生活水平的不断提高,宠物消费随之形成规模并不断升级。