文冠果ISSR反应体系的建立及优化

为了建立文冠果ISSR-PCR最佳反应体系,从而为文冠果遗传多样性研究提供理论依据,从定西巉口林场文冠果人工林内选取健康嫩叶为试验材料,通过单因子试验研究了影响ISSR-PCR反应各因素的浓度,分析因子包括模板DNA用量、退火温度、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度及TaqDNA聚合酶用量等。通过研究,找出了各因子合适的条件,建立并优化了文冠果ISSR反应体系,即20μL总反应体系含模板DNA约30 ng,Mg2+2.5 mmol/L,引物0.2μmol/L,dNTP 0.20 mmol/L,Taq聚合酶1 U。试验结果表明,在此反应体系下可得到多样性好、条带清晰的图谱。

文冠果干燥叶片高质量DNA提取方法研究

以文冠果植物干燥叶片为材料,对适合文冠果植物的DNA提取方法进行了研究改良,并对改良CTAB法提取的DNA进行了纯度鉴定和PCR检测。结果表明:将常规CTAB法改良为提取浓度3×CTAB,文冠果干燥叶片与提取液质量体积比0.05 g/750μL,水浴保温时间90 min,能有效去除次生物质对DNA的干扰,提高提取DNA的质量和纯度,适宜文冠果DNA的提取。该改良法提取的DNA可用于下游分子生物学的操作。