CDCP1基因重组慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的:构建含CUB结构域包含蛋白1(CUB domain containing protein 1,CDCP1)基因的重组慢病毒表达载体,研究CDCP1蛋白对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)cDNA为模板,采用PCR法扩增出CDCP1基因,将其克隆至pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体中,构建重组慢病毒表达载体pHAGE-CDCP1。将重组质粒pHAGE-CDCP1以及对照质粒pHAGE分别与包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染入人胚肾上皮细胞(293 T细胞),48 h后收集病毒悬液,并采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒CDCP1感染人宫颈癌HeLa细胞,通过免疫印迹法检测CDCP1蛋白的表达,采用CCK-8实验检测过表达CDCP1对HeLa细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察过表达CDCP1对HeLa细胞迁移能力的影响。结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pHAGE-CDCP1构建成功。重组pHAGE-CDCP1慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后细胞状态良好,CDCP1蛋白表达水平明显增加。高表达CDCP1可以显著提高HeLa细胞的增殖和迁移能力。结论:过表达CDCP1能够促进宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移。