成年阻塞性睡眠呼吸暂停患者多导睡眠图及临床特征分析性差异

目的:分析成年男性阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者多导睡眠图及临床特征,明确年龄对OSA严重程度的影响。方法:回顾性研究包括836名成年男性OSA患者,按年龄分为三组:青年组312人(平均年龄37.07岁),中年组359人(平均年龄52.14岁),老年组165人(平均年龄69.43岁)。分析其多导睡眠图和临床特征,并进行相关性分析。结果:中年组和老年组呼吸暂停低通气指数(AHI)、阻塞性呼吸暂停指数(OAI)、AHI-NREM和AHI-REM均无显著统计学意义(P>0.05),但均低于青年组(P<0.01);中年组和老年组的最低血氧饱和度(SaO2)均高于青年组;中枢性呼吸暂停指数(CAI)随年龄增长而升高(P<0.05)。在睡眠结构方面,老年组总睡眠时间、非快速眼动(NREM)睡眠时间和快速眼动期(REM)睡眠时间均缩短,睡眠效率亦低于青年组(P<0.01),但睡眠潜伏期和入睡后觉醒时间(WASO)明显延长(P<0.01)。年龄与以下各项均呈现显著的相关性:AHI(P<0.01),OAI(P<0.01),CAI(P<0.01),最低SaO2(P<0.01)。多重回归分析表明年龄作为独立变量分别与AHI,OAI,CAI具有相关性。结论:在成年OSA患者中,年龄与OSA严重程度具有显著的相关性,表现为OSA随年龄增长而降低。本研究为研究年龄与OSA严重程度的关系提供了新的证据。

体外雌激素通过调控骨髓间充质干细胞FasL表达介导破骨细胞凋亡

目的探讨雌激素缺乏对骨髓间充质干细胞(BMSC)表达FasL水平下降对破骨细胞凋亡的影响。方法建立绝经后骨质疏松模型(去势组,切除双侧卵巢)。设立假手术组(sham)组、卵巢切除(OVX)组、OVX后雌激素(OVX+E2)处理组。将破骨细胞与3组分离的BMSC共培养,观察破骨细胞数量的改变;用annexinⅤ-FITC/7-氨基放线菌素D(7-AAD)标记,流式细胞术检测各组破骨细胞凋亡的差异;Western blot法检测OVX组与sham组及OVX+E2组BMSC中FasL的表达情况。结果OVX组中破骨细胞的数量较sham组显著升高,凋亡程度降低。OVX+E2组中破骨细胞数量较OVX组数量显著降低,凋亡细胞比例升高。Western blot法结果显示sham组FasL较OVX组显著升高,OVX+E2组FasL较OVX组显著降低。结论雌激素能够降低BMSC中FasL基因的表达,这可能是影响破骨细胞凋亡的因素之一。

破骨细胞骨吸收上清液对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响。方法诱导小鼠脾脏细胞为破骨细胞,用抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色。破骨细胞与牛骨磨片共培养,扫描电镜观察骨吸收陷窝。收集骨吸收实验破骨细胞培养上清液作用于小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),MTT法检测BMSC生长曲线;成骨诱导后钙化结节茜素红染色法检测BMSC成骨能力;成脂诱导后油红O染色检测BMSC成脂能力;Western blot法检测小鼠BMSC成骨相关蛋白RUNX2、碱性磷酸酶(ALP)及成脂相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果 TRAP染色、扫描电镜显示脾脏细胞可诱导分化为具有骨吸收能力的破骨细胞;与对照组相比,加入破骨细胞培养上清液,BMSC的增殖受到抑制,成骨分化增强,成脂分化减弱(P<0.05)。结论破骨细胞骨吸收上清液具有使BMSC增殖能力降低,成骨分化增强,成脂分化减弱的作用。

卵巢切除小鼠骨髓间充质干细胞RANKL、OPG促进破骨细胞发育并增强其功能

目的研究雌激素调控骨髓间充质干细胞(BMSC)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护因子(OPG)对破骨细胞发育和功能的影响。方法选用健康雌性小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立绝经后骨质疏松模型。选用同一批次健康小鼠行双侧卵巢脂肪组织部分切除,建立假手术组(sham)。用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、RANKL诱导小鼠单核细胞为破骨细胞,同时分别加入sham和OVX组BMSC与单核细胞共培养。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数2组BMSC对骨髓诱导发育为破骨细胞的数量。甲苯胺蓝染色检测2组共培养体系中破骨细胞骨吸收陷窝的数量。RT-PCR和Western blot法检测sham和OVX组BMSC中OPG、RANKL的表达。结果 TRAP和甲苯胺蓝染色显示,OVX组中破骨细胞数目及吸收陷窝数大于sham组(P<0.05)。RT-PCR和Western blot法结果显示OVX组较sham组OPG表达显著降低,RANKL显著增强(P<0.05)。结论雌激素能够影响BMSC中OPG和RANKL的表达,雌激素缺乏环境下,BMSC促进破骨细胞发育并增强其功能。

一种四环素严紧控制的真核表达系统

目的构建一种严紧调控的表达系统,用于在真核细胞内表达外源性兴趣基因。方法融合四环素诱导元件、人工细菌染色体(BAC)以及Gateway技术,建立了一种新的表达体系。并且将该体系进行了测试。结果兴趣基因编码的β-catenin-ERα融合蛋白经荧光素酶活性检测和Western杂交分析,其表达被四环素或强力霉素严紧控制,在表达载体pE11-IGR-β-catenin-ERα中,EGFP的表达量恒定,可以作为流式细胞术有效的筛选标记。结论该系统可以作为一种有效的工具,用于在真核细胞中表达外源性兴趣基因,并且实现严紧的表达调控。

亚精胺促进雌激素缺乏小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化并抑制其成脂分化

目的研究亚精胺(SPD)对骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化能力的影响。方法雌性C57/BL6J小鼠分为假手术(Sham)组、卵巢摘除术(OVX)组。术后2月,分离、培养OVX组和Sham组C57BL/6J小鼠的BMMSC。经Western blot法检测对比2组BMMSC的碱性磷酸酶(ALP)、runt相关转录因子2(Runx2)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂蛋白脂解酶(LPL)的蛋白水平,茜素红染色对比2组BMMSC的矿化程度差异,油红O染色对比2组BMMSC脂滴数量差异。以SPD干预OVX组小鼠的BMMSC,Western blot法检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL蛋白水平,反转录PCR检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL mRNA水平;茜素红染色检测矿化结节及油红O染色检测脂滴数量。结果 OVX组小鼠来源的BMMSC成骨分化能力低于Sham组,成脂能力高于Sham组。经SPD干预后,OVX来源的BMMSC的成骨分化能力较未干预增强,成脂分化能力减弱。结论 SPD能够促进雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠BMMSC的成骨分化并抑制其成脂分化。

自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞增龄性改变的研究

目的:探讨自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)在衰老过程中生物学特点的改变。方法:分离、培养年轻(2月龄)、年老(16月龄)C57/BL6J小鼠的BMMSCs,经干细胞表面分子鉴定后,Western Blot检测2组BMMSCs的Tert、Acetyl-P53蛋白表达水平;氧化应激活性氧(ROS)试剂盒检测ROS表达水平;流式细胞仪检测并比较两组细胞的增殖、凋亡状态。结果:年轻、年老小鼠BMMSCs阳性表达Sca-1,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞表达特性;年老小鼠BMMSCs Tert蛋白表达水平明显低于年轻组(P<0.05),Acetyl-P53蛋白表达水平明显高于年轻组(P<0.05);年老细胞ROS表达水平明显高于年轻组;年老细胞的增殖能力明显低于年轻组(P<0.05),而凋亡水平则明显高于年轻组(P<0.05)。结论:年老小鼠BMMSCs出现增龄性变化,这些变化可能在骨衰老中起着重要作用。