游离DNA检测对结直肠癌诊断价值的研究

目的探讨游离DNA(cell-free DNA,CFD)检测在结直肠癌(CRC)诊断中的价值。方法用分支DNA技术检测CRC、结肠息肉患者和健康人对照组血清中的CFD含量,同时检测血清CEA和CA19-9含量,结合临床资料进行统计分析。结果与健康人对照组血清CFD水平[M(P25,P75)]的[181.9(109.5,328.7)ng/mL]和结肠息肉组的[178.2(85.5,377.5)ng/mL]相比,CRC患者为1 245.4(578.2,1 798.3)ng/mL,差异有统计学意义(U=416.00,282.00,P<0.05);CRC患者血清CEA和CA19-9水平显著高于结肠息肉组和健康人对照组(P均<0.05);不同年龄、性别、肿瘤部位和TNM分期的CRC患者CFD水平无统计学差异(P>0.05);CRC患者血清CFD水平与CEA(r=0.190,P>0.05)和CA19-9(r=0.046,P>0.05)均无相关性;CRC患者血清CFD的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.926,cut off值为768.9 ng/mL时,诊断CRC敏感性为70.5%,特异性为98.9%。结论血清CFD可作为CRC辅助诊断的分子标志物。

游离DNA对卵巢癌辅助诊断价值的研究

目的用分支DNA（b DNA）技术定量检测卵巢癌患者血清游离DNA（cf-DNA）含量,探讨其与临床病理参数的关系及对卵巢癌辅助诊断的价值。方法收集67例卵巢癌患者、22例卵巢良性肿瘤患者和29例健康妇女静脉血标本。用b DNA技术检测各组血清cf-DNA浓度,化学发光法检测血清CA125和HE-4含量;用Krudkal-Wallis H检验比较各组间总体差异,MannWhitney U检验进行两两比较;绘制ROC曲线评价上述三项指标的诊断效能。结果卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组和健康对照组血清cf-DNA含量分别为：865.41（497.62-1 311.56）、221.08（90.93-356.07）和199.94（78.73-396.21）μg/L,卵巢癌组显著高于良性肿瘤组和健康对照组（P均〈0.01）;按FIGO分期为Ⅲ期和Ⅳ期的卵巢癌患者显著高于Ⅰ-Ⅱ期组（P均〈0.01）,Ⅲ期和Ⅳ期组间差异也有统计学意义（P〈0.05）。卵巢癌组血清cf-DNA的ROC曲线下面积、诊断敏感性和特异性分别为：0.886、83.9%、84.2%,均高于CA125（0.774、74.2%、63.2%）和HE-4（0.706、74.2%、78.9%）,cf-DNA、CA125和HE-4联合检测的敏感性和特异性可提高到92.54%（62/67）、88.24%（45/54）。结论 b DNA技术检测血清cf-DNA对卵巢癌诊断的敏感性和特异性高于CA125和HE-4,可作为卵巢癌辅助诊断的一个重要分子生物学指标。

游离DNA完整性检测对良恶性胸腹腔积液鉴别诊断的价值研究

目的探讨游离DNA(cfDNA)的完整性(ALU247/ALU115)检测对良恶性胸腹腔积液鉴别诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法,测定86份良恶性胸腹腔积液标本中ALU115和ALU247片段浓度并计算完整性;同时对标本中LDH、AFP、CEA、SF、SCC等传统指标进行检测。绘制受试者工作曲线(ROC曲线),根据曲线下面积评估各标记物诊断意义;运用统计学方法,与传统指标进行对比,评价cf DNA完整性在良恶性胸腹腔积液鉴别诊断中的应用价值。结果恶性组DNA完整性指数(ALU247/ALU115)显著高于良性组,差异具有统计学意义(P<0.01),ROC曲线下面积为0.70。cfDNA浓度和完整性联合检测的灵敏度、特异度及准确度均显著高于其他各项指标单独或联合检测。该联合检测方式与cfDNA联合传统指标在鉴别诊断良恶性胸腹腔积液方面比较差异无统计学意义。结论 cfDNA完整性检测是良恶性胸腹腔积液鉴别诊断可能的良好靶标。ALU115、ALU247片段浓度和完整性(ALU247/ALU115)三项联合检测诊断价值更高。

人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系

目的:探讨人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系。方法:不同浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞株,甲基化特异性PCR(MSP)检测用药前后CDX2启动子甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和WesternBlot分别检测CDX2和DNMT1 mRNA和蛋白表达。结果:MKN45细胞株CDX2基因启动子区域高甲基化,CDX2 mRNA表达极低,蛋白不表达;经3种浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞72 h后,细胞中CDX2 mRNA和蛋白表达均出现上调,而DNMT1表达出现下调。结论:CDX2基因表达下调与其启动子CpG岛高甲基化有关,DNMT1可能参与该过程的调节。

利用虚拟实验室进行分子诊断实验教学的研究

根据目前分子诊断学实验教学中存在的问题,在传统实验教学中引入虚拟实验,利用其沉浸性、交互性和构想性的特点来营造仿真实验环境,感官综合刺激学生,使学生获得视听摸等多种直观而自然的实时感知。在实践中能够弥补现有实验教学条件的不足且多角度呈现教学内容,突破时空限制模拟真实世界中难以观察和控制的过程和现象。在虚拟实验室中通过选择合适的教学素材,虚实结合地安排实验内容,在提高学生的学习积极性和实验教学质量方面取得显著效果。

两种游离DNA检测方法的比较研究

目的:对比评价人血清游离DNA的分支DNA(b DNA)检测和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测方法。方法:收集44例人血清标本,分别运用b DNA技术和荧光定量PCR检测其游离DNA浓度,对2种方法检测结果做分析比较。同时采用b DNA技术分别检测其中10例血清和血浆游离DNA含量。结果:b DNA技术的检测结果和荧光定量PCR具有较高的相关性(r=0.7077,P<0.0001);血清较血浆具有较高的游离DNA的水平。结论:b DNA操作简便且结果可信,适用于人群大规模筛查游离DNA水平。

抑制热休克蛋白gp96对HepG2细胞中hTERT表达及细胞增殖的影响

目的:探讨热休克蛋白90抑制剂戈尔德霉素(geldanamycin,GA)对HepG2细胞中gp96、人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响及对HepG2细胞增殖的抑制作用。方法:以Western blot方法检测不同浓度GA作用下,HepG2细胞中HSP90α、gp96及hTERT的表达。用MTT法检测GA作用下HepG2细胞的增殖抑制情况。同时构建HSP90αsiRNA质粒,转染HepG2细胞后观察对hTERT的影响。结果:HepG2细胞中HSP90α、gp96及hTERT的表达均明显高于正常肝细胞LO-2,导入HSP90αsiRNA质粒的HepG2细胞HSP90α表达减少,但gp96、hTERT的表达与对照组HepG2比较差异无统计学意义。加入GA后HepG2细胞中HSP90α、gp96及hTERT表达均显著减少,HepG2细胞增殖也明显受抑。结论:GA可通过gp96抑制HepG2细胞中hTERT表达及HepG2细胞增殖,gp96有望成为肝癌分子治疗新的靶点。

Src抑制的蛋白激酶C底物在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的表达及其意义

目的研究Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)进程中的表达情况,探讨其在EAE病理过程中可能的功能及意义,为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)和EAE提供新的治疗靶点。方法构建EAE大鼠模型,进行临床打分评估;用HE染色检测EAE大鼠脊髓组织的炎性浸润情况;用western blot检测SSeCKS的表达变化;用免疫组织化学观察SSeCKS在脊髓组织中的分布。结果髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)诱导单相的EAE过程:Lewis大鼠经MBP免疫后7～10d开始有临床症状,13～16d达到发病高峰,之后自发地恢复,至30d左右恢复到病前水平;EAE病程高峰期,大鼠脊髓炎性浸润情况显著;SSeCKS蛋白表达在EAE起始E1期显著增加,E3期达到高峰,之后开始下降,恢复期基本恢复到正常水平。结论本实验成功构建了Lewis大鼠的EAE模型;EAE病理过程中,SSeCKS蛋白表达水平发生变化,提示SSeCKS可能参与了EAE过程。

循环miR-152在多发性骨髓瘤中的表达与临床意义

目的检测mi R-152在多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的表达水平,探讨其作为MM肿瘤标志物的潜在价值。方法以30例缺铁性贫血患者为相关疾病对照组,30例体检健康者为健康人对照组,40例初诊MM患者为MM组,提取各组血清RNA样本;实时荧光定量PCR检测各组血清mi R-152的表达水平;PCR扩增产物进行基因测序;ROC曲线分析其诊断MM的临床效能;Beckman Immage特种蛋白分析仪检测MM组血清Ig A、Ig G和Ig M浓度;采用Kaplan-Meier法分析mi R-152的表达水平与MM患者预后的关系。结果 MM组血清mi R-152的表达水平[1.40(0.90,2.24)]高于相关疾病对照组[1.07(0.60,1.63)]和健康人对照组[0.20(0.07,0.54)],差异有统计学意义(U分别为424.50和85.50,P均<0.05);而MM患者治疗后[0.97(0.41,1.88)]较治疗前[1.66(1.15,2.42)]血清mi R-152表达水平明显降低(U=63.00,P=0.027);基因测序结果证实其为成熟mi R-152序列;血清mi R-152诊断MM的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.79(95%CI:0.70~0.87,P<0.05),当cut-off值为0.62时,其敏感性和特异性分别为90.00%、56.67%;血清mi R-152的表达与MM患者总体生存率有关(HR=4.36,95%CI:1.23~15.43,P=0.022);mi R-152的相对表达量与Ig A、Ig G和Ig M浓度总和呈正相关(r=0.39,P=0.012),而与Ig A、Ig G或Ig M浓度无明显相关性(r分别为0.30,-0.005和-0.18,P均>0.05)。结论血清mi R-152在MM患者血清中的表达水平升高,可能会作为MM的鉴别诊断和预后的标志物。

外科综合实验室开放运行下面临的问题及解决途径

本院外科综合实验室成立于2009年8月,旨在为临床相关科室的研究生及临床医生提供较好的科研平台。自成立以来,利用该科研平台从事科研的人员逐步增多,目前已达到近40人,并有持续增多的趋势。面对日益增多的科研人员进入该平台,存在的问题也日益突出,如何较好的发挥该平台的功能,完善管理,已然呈现面前。本文将就实验室在开放运行下所面临的问题进行简单介绍,并针对所存在的问题提出一些切实有效的解决办法。

水中纳米颗粒的稳定性及其去除研究进展

纳米颗粒被广泛应用于生产、生活等领域,并通过不同途径进入水体。随着对纳米颗粒生物毒性的深入了解,有必要进一步开展水体中纳米颗粒的稳定性及其去除方法的研究。影响水中纳米颗粒稳定性的主要因素包括天然有机物和各种离子。此外,纳米颗粒的涂层也影响其在水体中的凝聚和分散行为。饮用水厂和污水处理厂的工艺流程对纳米颗粒的去除研究表明,大部分纳米颗粒能够被水处理工艺所去除,少部分通过出水进入环境。对纳米颗粒稳定性及其去除方法的研究有待进一步深入。

程海湖夏季浮游植物功能群特征及其影响因子研究

为探究高原湖泊浮游植物功能群特征与环境因子间关系,以地处青藏高原与云贵高原的衔接部位的程海湖为研究对象。于2018年6、7、8月对程海湖水体进行采样分析得到每月浮游植物与环境因子数据。运用Reynolds等提出的浮游植物功能群的划分标准,将程海湖夏季浮游植物进行功能群划分。对浮游植物多样性和均匀度指数的时空分布进行深入分析。结果表明,程海湖浮游植物可分为16个功能群,其中以圆柱鱼腥藻为代表的功能群H1、以双眼鼓藻为代表的功能群N、以微小四角藻为代表的功能群J、以坎宁顿拟多甲藻为代表的功能群L0、以尖头藻为代表的功能群SN、以伪鱼腥藻为代表的功能群S1为程海湖常见功能群,S1和SN功能群均在8月出现,夏季优势功能群动态变化为:H1→H1→H1/S1。程海湖6、7、8月Shannon-Wiener多样性指数平均值分别1.97、1.28和2.84,Peilou均匀度指数分别为0.44、0.32和0.67,湖泊8月水质条件最优,在空间分布上各区域均无明显差异。利用冗余分析(RDA)探讨程海湖浮游植物功能群与环境因子之间的关系,分析表明,溶解氧(DO)、总氮(TN)、总有机碳(TOC)、氨氮(NH4+-N)和浊度(Turb)是影响浮游植物功能群分布的主要环境因子。

多发性骨髓瘤患者PBMC中miR-335的甲基化及其表达研究

目的探讨micorRNA-335(miR-335)表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。方法用荧光定量PCR检测43例MM患者和30例体检健康者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-335的表达水平,用甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-335启动子区甲基化水平,分析其与各临床指标的相关性。结果 43例MM患者PBMC中miR-335的表达水平为34.8(15.3,84.9),显著低于健康对照组的269.4(63.3,780.2),Z=4.384,P<0.05。11例MM患者(25.6%,11/43)呈现完全甲基化,其余患者均为部分甲基化,而23例体检健康者(76.7%)呈现完全非甲基化(Uc=6.62,P<0.05)。初诊MM患者miR-335表达量高于复发/进展期患者(Z=2.309,P<0.05),但复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度(75%)高于初诊患者(25%),T=24.5,P<0.05。MM患者miR-335表达水平与轻链λ浓度呈相关性(r=0.51,P<0.05)。结论 MM患者miR-335表达水平和甲基化可作为MM潜在的辅助诊断指标。

水厂除藻技术的研究进展综述

藻类是江河、湖泊、水库和海湾等任何水生生态系统的天然组成成分,然而过量繁殖的藻类对水厂原水的污染会影响出水水质。面对日益频繁的水华暴发事件,有必要进一步开展水厂除藻方法的研究。文中介绍了一些水厂除藻技术,如强化混凝法、预氧化法、气浮法、超声法、高级氧化法和电化学法,分析了各工艺的原理及优缺点。

骨髓瘤细胞对血管内皮细胞的促生长作用及机制

目的:研究多发性骨髓瘤细胞对人内皮细胞增殖、迁移、血管生成及对内皮细胞AKT、pAKT蛋白水平的影响。方法:采用多发性骨髓瘤细胞株U266与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)混合共培养;以同期单独培养的HUVEC为对照,用CCK-8、划痕试验检测共培养组和对照组HUVEC的增殖、迁移能力。观察在Matrigel基质中两组HUVEC管状结构生成的情况;Western blot方法检测共培养组和对照组HUVEC AKT、pAKT的蛋白表达水平。结果:与同期单独培养的HUVEC相比,共培养体系中的HUVEC细胞增殖明显增加,共培养组HUVEC迁移能力明显增强(125±21/视野vs.332±37/视野),共培养组HUVEC管状结构形成数量明显增加(小管数量分别为3.7±1.3/视野vs.8.3±2.7/视野)。共培养体系中HUVEC pAKT表达水平明显升高,AKT表达无明显变化。结论:骨髓瘤细胞能明显促进血管内皮细胞增殖、迁移和血管生成。多发性骨髓瘤促进HUVEC增殖、迁移和血管生成的作用与AKT信号通路有关。

预氯化输水对表面停留性有机物及混凝除藻的影响

针对预氯化这一常用的预氧化方法,考察了表面停留性有机物(S-AOM)在这一过程中对铜绿微囊藻起到的关键作用。同时,探讨了表面停留性有机物及藻的氧化应激对混凝除藻效果的影响。结果表明,预氯化过程可实现适度预氯化的最佳氯投加量,适度预氯化可以在实现脱附S-AOM的同时不损伤藻细胞,强化后续混凝除藻的效果。此外,经过适度预氯化后的藻细胞在远程输水过程中可能会发生程序性死亡,胞内有机物不断泄漏,这仍会对水厂混凝除藻效果产生不利影响。因此,预氧化后藻细胞发生程序性死亡是预氯化强化混凝工艺需要考虑的关键因素。

基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血游离DNA方法的建立

目的建立一种操作简便、灵敏性较高的定量检测血游离DNA(CFD)的方法。方法运用基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血清CFD。结果该检测的标准曲线相关系数R2=0.9916,线性范围0-400ng/ml,最低检出限0.86ng/ml,回收率93.35%-115.76%,重复性良好。正常人血清CFD水平为181.9(109.5,328.7)ng/ml,男性和女性的CFD水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于Alu序列的分支DNA技术定量检测血清CFD线性较好,灵敏度较高,结果较为准确且重复性较好,易于标准化,适于临床开展大样本检测。

不同载体构建人神经生长因子的比较

探讨人神经生长因子(hNGF)在不同信号肽同一载体与不同载体表达量的差异。应用分子生物学技术从pcDNA3·1-β-NGF中获得β-NGF基因,并对它进行替换载体和优化信号肽,构建两个新重组质粒pMD902-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF,通过酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒构建成功;利用脂质体转染技术,将重组质粒pMD902-β-NGF、pcDNA3·1-β-NGF和pcDNA3·1-His-β-NGF转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中,通过ELISA技术,检测到CHO细胞上清中有NGF的表达,优化信号肽的pcDNA3·1-His-β-NGF表达量高于没有优化信号肽的pcDNA3·1-β-NGF,重组质粒pMD902-β-NGF表达量最低。鸡胚背根神经节法检测,表达产物都能促进神经节的生长。通过实验分析发现,3个重组质粒表达水平有较大差异。

血清游离DNA定量检测对宫颈癌临床诊断的价值

目的 探讨血清cf-DNA定量检测在宫颈癌早期辅助诊断及预后判断中的价值.方法 病例对照研究.收集南通大学附属医院2010年11月至2012年6月收治的40例宫颈癌患者,均经组织病理学证实;其中鳞癌患者36例,腺癌患者4例.选择同期CINⅢ患者32例,门诊体检健康妇女58名.采用分支DNA（bDNA）技术检测血清cf-DNA含量,采用化学发光法检测血清中鳞状细胞癌抗原（SCC）、铁蛋白（FER）、糖类抗原125（CA125）、糖类抗原19-9（CA19-9）的含量.统计学分析采用Mann-Whitney U检验、Kruskal Wallis检验及Spearman相关检验.结果 宫颈癌患者、CINⅢ患者和健康对照者血清cf-DNA含量分别为1373.17 （976.13 ～ 2337.08）、225.15（106.89 ～ 313.59）、188.80（111.30～314.15） ng/ml,宫颈癌患者血清cf-DNA含量显著高于CINⅢ患者及健康对照者（Z=-6.312,-7.351,P均＜0.001）,而CINⅢ组和正常对照组之间差异无统计学意义（Z=-0.438,P=0.661）.其中,Ⅱ～Ⅲ期患者的血清cf-DNA水平2490.26（1407.86 ～ 4326.12） ng/ml明显高于Ⅰ期1267.54（633.01 ～ 1586.43） ng/ml（Z=-3.394,P=0.001）.宫颈癌患者血清cf-DNA含量在不同分化程度、病理类型分组间无统计学差异.血清cf-DNA浓度与SCC（r=-0.160,P=0.324）、FER（r=0.032,P =0.842）、CA125（r=0.077,P =0.638）、CA19-9 （r=0.135,P =0.406）没有相关性.使用ROC曲线分析血清cf-DNA浓度对宫颈癌患者的诊断效能,其曲线下面积（0.938）高于传统指标血清SCC （0.772）、FER （0.721）、CA125 （0.615）、CA19-9（0.601）.结论 血清cf-DNA水平有助于宫颈癌的早期辅助诊断及预后判断.血清cf-DNA对宫颈癌的辅助诊断价值要优于传统肿瘤标志物SCC、FER、CA125、CA19-9.

血清hsa_circ_0000437对胃癌辅助诊断及预后判断的意义

目的探讨胃癌患者血清hsa_circ_0000437表达水平及其临床价值。方法选取2018年10月至2020年12月南通大学附属医院经病理确诊的80例胃癌患者(男57例,女23例);50例胃良性疾病患者(男28例,女22例)及80名健康对照者(男46例,女34例)。收集血清样本,同时收集上述胃癌患者中35例患者手术后血清样本。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测血清hsa_circ_0000437表达水平。采用Mann-Whitney U检验比较不同组间、胃癌患者不同分期及手术前后血清hsa_circ_0000437水平的差异,采用χ²检验分析胃癌患者血清hsa_circ_0000437水平与其临床病理特征之间的相关性。化学发光法检测癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原724(CA724)。运用受试者工作特征(ROC)曲线及其曲线下面积(AUC)评估hsa_circ_0000437、CEA、CA199以及CA724的诊断效能。Kaplan-Meier生存曲线分析hsa_circ_0000437表达水平与患者预后的关系。结果胃癌、胃良性疾病患者和健康对照者血清hsa_circ_0000437表达水平分别为2.252(1.235,4.765)、1.598(1.139,1.982)及1.000(0.818,1.385),胃癌患者高于胃良性疾病和健康对照者(P均<0.001),胃良性疾病患者高于健康对照者(P<0.001)。胃癌患者术后血清hsa_circ_0000437的表达水平低于手术前(P<0.001)。胃癌患者血清hsa_circ_0000437的表达水平在肿瘤T分期、N分期、肿瘤分化程度差异均有统计学意义(P=0.043、P=0.025和P=0.013)。胃癌患者区别于健康对照者,hsa_circ_0000437、CEA、CA199和CA724 AUC分别为0.863、0.619、657和0.608,4项指标联合检测AUC为0.892,敏感度高达97.5%(78/80)。Kaplan-Meier生存曲线显示血清hsa_circ_0000437高表达患者的总体生存率明显低于血清hsa_circ_0000437低表达患者(P=0.008)。结论hsa_circ_0000437可能是胃癌辅助诊断和预后判断的一个生物学指标。