木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖侵袭和上皮间质转化的机制研究

目的:探究木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的机制。方法:将肝癌细胞HepG2分为Control组、OAL组、OAM组、OAH组、PD98059组和ML-099组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;蛋白质印迹法检测细胞中MEK.p-MEK、ERK.p-ERK蛋白及EMT相关蛋白表达。结果:OAL组、OAM组和OAH组细胞增殖和侵袭能力(82.34±2.43)、(61.04±1.61)、(32.44±1.04)均明显低于Control(110.42±3.86)组,细胞凋亡率(6.81±0.62)、(11.74±0.94)、(18.36±1.05)明显高于Control组(5.01±0.53)(F侵袭=1068,F凋亡=323.1,P<0.0001);细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.42±0.04)、(0.58±0.05)、(0.97±0.09)高于Control组(0.23±0.03)(F=181.1,P<0.0001);上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.63±0.06)、(0.51±0.05)、(0.38±0.03)、Vimentin蛋白(1.23±0.11)、(0.98±0.09)、(0.51±0.05)及p-MEK/MEK(0.72±0.07)、(0.51±0.05)、(0.32±0.03)和p-ERK/ERK(0.92±0.09)、(0.68±0.06)、(0.41±0.04)比值低于Control组(F_(N-cadherin)=39.04,F_(Vimentin)=111.0,F_(p-MEK/MEK)=107.8,F_(p-ERK/ERK)=82.68,P<0.0001)。PD98059组细胞增殖和侵袭能力(30.86±1.01)均明显低于Control组(t=48.84,P<0.0001),细胞凋亡能力(17.95±0.98)明显高于Control组(t=28.45,P<0.0001),细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.92±0.09)明显高于Control组(t=17.82,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.37±0.04)(t=9.585)、Vimentin蛋白(0.41±0.04)(t=19.99)及p-MEK/MEK(0.30±0.03)(t=16.78)、p-ERK/ERK(0.39±0.04)(t=14.65)比值均明显低于Control组(P<0.0001)。ML-099组细胞增殖和侵袭能力(100.86±2.68)均明显高于OAH组(t=12.54,P<0.0001),细胞凋亡能力(5.15±0.86)明显低于OAH组(t=23.84,P<0.0001);和OAH组相比,ML-099组细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.25±0.03)明显减少(t=18.59,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.69±0.07)(t=0.971,P<0.0001)、Vimentin蛋白(1.50±0.12)(t=18.65,P<0.0001)及p-MEK/MEK(0.94±0.09)(t=16.01,P<0.0001)、p-ERK/ERK(1.05±0.10)(t=2.367,P=0.0395)比值均明显升高。结论:木蝴蝶苷A可抑制肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,诱导肝癌细胞凋亡,其机制和抑制MEK/ERK信号通路有关。

华蟾素胶囊口服联合放化疗对晚期食管鳞状细胞癌患者肿瘤体积的影响

目的观察华蟾素胶囊口服联合放化疗对晚期食管鳞状细胞癌患者肿瘤体积的影响。方法晚期食管鳞状细胞癌患者80例,将其随机分为治疗组和对照组各40例。对照组接受5-氟尿嘧啶加顺铂化疗联合放疗,治疗组在对照组基础上口服华蟾素胶囊,3周为1个疗程,共2个疗程。比较两组治疗前、1个疗程后、2个疗程后、治疗后半年大体肿瘤体积(GTV),计算两组1个疗程后、2个疗程后、治疗后半年体积退缩率(VRR),观察不良反应发生情况。结果两组1个疗程后、2个疗程后、治疗后半年GTV均较治疗前减少(P均<0.05),但两组各时点比较P均>0.05。两组2个疗程后VRR均较1个疗程后低(P均<0.05),但两组1个疗程后、2个疗程后、治疗后半年比较P均>0.05。治疗组骨髓抑制Ⅰ、Ⅱ度16例,Ⅲ、Ⅳ度4例,对照组分别为24、6例,治疗组肝毒性Ⅰ、Ⅱ度3例,Ⅲ、Ⅳ度0例,对照组分别为7、3例,两组比较,P均<0.05。结论华蟾素胶囊口服联合放化疗可缩小晚期食管鳞状细胞癌肿瘤体积,与单独放化疗相比无明显优势,但前者骨髓抑制、肝毒性不良反应少。

吲哚菁绿排泄试验与肝癌患者肝动脉化疗栓塞术后肝衰竭的相关性分析

目的分析吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)排泄试验和Child-Pugh分级与肝癌患者肝动脉化疗栓塞术(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)后肝衰竭的相关性。方法回顾性分析行TACE的123例肝癌患者的临床资料,探讨术前ICG排泄试验15min滞留率(ICG clearance rate at 15min,ICG-R15)和Child-Pugh分级对术后肝衰竭的评估价值。结果 123例患者的血清白蛋白水平与ICG-R15水平呈显著负相关(r=-0.643,P=0.014),凝血酶原时间和总胆红素水平与ICG-R15水平呈显著正相关(r=0.723、P=0.006,r=0.855、P=0.000),血清碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶水平与ICG-R15水平无相关。患者在TACE后有22例出现肝衰竭,Child-Pugh分级中A级有12例,B级有10例;肝脏Child-Pugh不同分级中,A级平均ICG-R15水平和K值分别为(6.01±3.11)%和(0.22±0.09)μg·kg^(-1)·min^(-1),B级分别为(21.45±7.17)%和(0.09±0.06)μg·kg^(-1)·min^(-1),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ICG排泄试验和Child-Pugh分级是评价肝癌患者TACE术后肝脏功能的灵敏指标,与肝衰竭具有良好的相关性,对于制定合理治疗方案、判断治疗预后有指导意义。

华蟾素胶囊在局部晚期食管鳞癌同步放化疗中的应用价值

目的研究华蟾素胶囊在局部晚期食管鳞癌同步放化疗中的疗效及毒副作用。方法选取局部晚期食管鳞癌患者82例随机分为试验组和对照组,每组41例,对照组采用5氟尿嘧啶和顺铂联合同步放疗,试验组在对照组治疗方案基础上联用华蟾素胶囊。对比观察2组临床缓解率、长期生存情况[无病进展生存期(PFS)、总生存期(OS)]、生活质量及不良反应发生率差异。结果试验组完全缓解率、部分缓解率和疾病稳定率高于对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。2组中位PFS中位OS比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗2个月后,2组KPS评分均较治疗前升高(P>0.05)。试验组治疗后SF-36评分较治疗前显著升高(P<0.05),治疗后试验组SF-36评分高于对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。试验组消化道反应、神经毒性反应及肝脏毒性反应发生率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论局部晚期食管鳞癌患者,在同步放化疗标准治疗方案上联用华蟾素胶囊一定程度上可提高临床疗效,延长PFS及OS,减少不良反应发生率。

中国肝细胞癌经动脉化疗栓塞治疗临床实践指南(2021年版)解读

肝癌是我国最常见恶性肿瘤之一,也是最重要的死亡原因之一,肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)为其主要病理类型。经动脉化疗栓塞治疗(transarterial chemoembolization,TACE)是中晚期HCC常用治疗手段,中国医师协会介入医师分会于2018年发布了《中国肝细胞癌经动脉化疗栓塞治疗(TACE)临床实践指南》,并于2021年进行了更新。与上版指南相比,本版指南在TACE类型、适应证和禁忌证、围手术期处理、手术操作、手术并发症以及综合治疗等多个方面作了补充或更新,现将就本版指南更新的要点进行简要的整理和解读。

多排螺旋CT与3.0T磁共振成像对肝外胆管结石的诊断效果分析

背景多排螺旋CT(MDCT)与磁共振成像(MRI)均为目前临床辅助诊断肝外胆管结石的常用影像学检查方法,但这两种检查各有其优势与劣势。目的对比分析MDCT和3.0T MRI对肝外胆管结石的诊断价值,探讨临床医生如何为可疑胆管结石患者选择更合理的影像学检查方法。方法对2009-06-18至2014-10-21河北医科大学第二医院收治的56例可疑肝外胆管结石患者于经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)前2周内行MDCT、3.0T MRI检查,以ERCP为金标准,计算并比较两种方法的灵敏度、假阴性率(漏诊率)、特异度、假阳性率(误诊率)等指标。结果 MDCT诊断肝外胆管结石的灵敏度、漏诊率、特异度、误诊率、阳性预测值及阴性预测值分别为25.6%、74.4%、100.0%、0、100.0%、28.9%,3.0T MRI诊断肝外胆管结石的灵敏度、漏诊率、特异度、误诊率、阳性预测值、阴性预测值分别为69.8%、30.2%、100.0%、0、100.0%、50.0%。3.0T MRI诊断肝外胆管结石的灵敏度高于MDCT,漏诊率低于MDCT(P<0.001)。两种方法诊断肝外胆管结石的特异度和误诊率相同。结论临床怀疑肝外胆管结石的患者,若条件允许,建议首选MRI检查。

下调AFAP-1L2表达对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的观察下调AFAP-1L2表达对胰腺癌细胞吉西他滨(Gem)化疗敏感性的影响及对胰腺癌细胞的杀灭作用。方法构建靶向siAFAP-1L2干扰质粒下调AFA-1L2表达,转染MIAPACA-2细胞,以Western blot法及(qRT)-PCR法检测转染效率;MTT检测AFAP-1L2下调后细胞存活率。对siAFAP-1L2转染MiaPaCa-2细胞给予吉西他滨干预,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与siNegative control组比较,给予不同浓度梯度siAFAP-1L2转染MIAPACA-2细胞,siAFAP-1L2组细胞存活率较低(P<0.05);MiaPaCa-2细胞在培养24、48、72、96 h后,转染siAFAP-1L2组细胞在48 h后存活率较低(P<0.05);siAFAP-1L2转染后细胞存活率与siAFAP-1L2转染浓度和时间具有相关性(r=-0.921,r=-0.907)。将化疗药Gem 20 nmol/L加入分别以不同浓度梯度siAFAP-1L2转染的胰腺癌细胞48 h后,与siNegative control组比较,siAFAP-1L2组细胞存活率较低(P<0.05);将化疗药Gem 20 nmol/L加入siAFAP-1L2 100 nmol/L转染的MiaPaCa-2细胞,培养24、48、72、96 h后,与siNegative control组比较,siAFAP-1L2组细胞在72、96 h后存活率较低(P<0.05);siAFAP-1L2转染后,Gem化疗细胞存活率与siAFAP-1L2转染浓度和时间具有相关性(r=-0.967,r=-0.984)。siAFAP-1L2+Gem组与siAFAP-1L2组凋亡率分别为37.28%、11.65%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调AFAP-1L2表达可增强胰腺癌细胞对吉西他滨化疗的敏感性,促进对胰腺癌细胞的杀伤作用,可作为胰腺癌治疗的靶向候选基因。

华蟾素增强氟尿嘧啶对食管癌TE-1细胞杀伤作用及机制研究

目的观察华蟾素对氟尿嘧啶处理后的食管癌TE-1细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 Western印迹检测不同浓度华蟾素干预后Bcl-2/Bax信号通路蛋白水平,MTT检测不同浓度及不同细胞培养时间华蟾素对氟尿嘧啶处理后TE-1细胞增殖的影响。流式细胞术检测华蟾素对氟尿嘧啶处理后TE-1细胞周期及凋亡的影响。结果随着Cinobufotalin浓度升高,Bcl-2、Survivin蛋白表达水平呈剂量依赖性下降,Cleaved PARP、Bax蛋白表达呈剂量依赖性上升; Cinobufotalin组TE-1细胞凋亡率高于Negative组(t=2. 236,P <0. 05),Cinobufotalin+5-FU组TE-1细胞凋亡率高于Negative Control组、Cinobufotalin组及5-FU组(P <0. 05);与Negative Control组对比,培养48 h后,Cinobufotalin组TE-1细胞的细胞周期停留在G1、G2期的比例减少,S期比例升高(P <0. 05);与Negative Control组、Cinobufotalin组及5-FU组比较,培养48 h后,Cinobufotalin+5-FU组TE-1细胞周期停留在G1、G2期的比例减少,S期比例升高(P <0. 05); MTT显示,Cinobufotalin干预后,TE-1细胞存活率呈现时间依赖性下降趋势,Cinobufotalin组TE-1细胞培养48、72、96 h后的存活率低于Negative Control组(P <0. 05); Cinobufotalin+5-FU组TE-1细胞培养48、72、96 h后存活率低于Negative Control组、Cinobufotalin组及5-FU组(P <0. 05);不同浓度梯度的华蟾素作用48 h后,Cinobufotalin组、Cinobufotalin+5-FU组TE-1细胞存活率呈现剂量依赖性下降。结论华蟾素通过Bcl-2/Bax通路降低食管癌细胞存活率,促进其凋亡,其对氟尿嘧啶活性具有增效作用。

AFAP-1L2在胰腺导管腺癌组织中的表达变化及意义

目的观察胰腺导管腺癌(PDAC)组织中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(AFAP-1L2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测73对配对的PDAC及癌旁正常胰腺组织石蜡标本中的AFAP-1L2蛋白,分析其与PDAC临床病理特征的关系;采用qRT-PCR法检测21对配对新鲜PDAC及癌旁正常胰腺组织中的AFAP-1L2 mRNA。结果 AFAP-1L2蛋白在PDAC及癌旁正常胰腺组织石蜡标本中的高表达率分别为67.1%及28.8%,P<0.01;AFAP-1L2蛋白高表达与肿瘤直径、TNM分期、血管浸润、淋巴转移及术后肝转移有关(P均<0.05)。新鲜PDAC组织及癌旁正常胰腺组织AFAP-1L2 mRNA相对表达量分别为1.429±0.317及0.672±0.298,P均<0.01。结论 AFAP-1L2蛋白及基因在PDAC组织中高表达,在PDAC的发生发展中起重要作用。

胆囊癌患者外周血VEGF、内皮抑素水平变化及意义

目的探讨VEGF、内皮抑素在食管癌发生、发展中的作用。方法采用ELISA法检测56例胆囊癌患者(观察组)和30例健康人(对照组)外周血清VEGF、内皮抑素水平。分析外周血VEGF、内皮抑素水平与胆囊癌可切除性、病理分级、淋巴结、远处转移及肿瘤分期的关系。结果观察组、对照组外周血清VEGF水平分别为(298.5±80.7)、(142.9±64.3)pg/mL,内皮抑素水平分别为(89.9±19.6)、(35.0±9.7)ng/mL,观察组外周血清VEGF、内皮抑素水平均明显高于对照组(P均<0.05)。VEGF水平与肿瘤是否可切除、肿瘤临床分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移均有关(P均<0.05);内皮抑素水平与是否可切除、肿瘤临床分期有关(P均<0.05),与分化程度、淋巴结转移和远处转移无关。结论胆囊癌患者外周血清VEGF、内皮抑素水平升高。检测外周血清VEGF、内皮抑素水平有助于胆囊癌的病情评估、治疗方式选择及预后估计。

多烯磷脂酰胆碱治疗胃癌术后超早期良性肝细胞性黄疸临床分析

目的观察多烯磷脂酰胆碱对胃癌术后超早期良性肝细胞性黄疸的治疗效果。方法选取在我科住院治疗的胃癌术后超早期良性肝细胞性黄疸27例,随机分为治疗组(14例)和对照组(13例),治疗组予多烯磷脂酰胆碱465 mg加5%葡萄糖注射液250 ml,每日1次静脉滴注;对照组予还原型谷胱甘肽1.2 g加5%葡萄糖注射液250 ml,每日1次静脉滴注。疗程均为1周,治疗结束后对两组疗效、胆红素水平及不良反应进行比较。结果治疗组及对照组治疗后总有效率分别为92.9%(13/14)、46.2%(6/13),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);胆红素分别为(9.22±1.22)μmol/L、(10.83±1.35)μmol/L,组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。两组均未出现明显不良反应。结论多烯磷脂酰胆碱治疗胃癌术后超早期良性肝细胞性黄疸效果良好,且无明显不良反应。

胆囊癌诊疗80例分析

目的分析胆囊癌的临床特点,探讨早期诊断的相关指标,提高早期诊断率,最终达到改善预后。方法收集在河北医科大学第二医院治疗的胆囊癌患者80例,以胆囊结石及胆囊息肉患者90例作为对照,对2组进行组间比较及单、多因素Logistic回归分析。结果 2组间在患病年龄、腹胀纳差、胆囊占位、胆囊壁厚、肝门区肿大淋巴结、肝内外胆管扩张间存在差异;在实验室检查方面糖类抗原19-9(carbohydrate atigen 19-9,CA19-9)、糖类抗原125(carbohydrate atigen 125,CA125)、糖类抗原50(carbohydrate atigen 50,CA50)、血红蛋白(hemoglobin,HGB)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBIL)、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyl transpeptidase,γGGT)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)存在差异。结论原发性胆囊癌的起病隐匿、临床表现无特异性,综合超声、CT、实验室检查可提高胆囊癌术前诊断率。控制胆囊癌的高危因素能有效预防胆囊癌的发生,从而改善预后。对于胆囊癌高危人群的早期筛查是胆囊癌临床治疗的关键。胆囊癌的临床分期对胆囊癌的预后影响大。提高胆囊癌早诊率是提高胆囊癌治疗水平的关键。

VEGFsiRNA、bFGFsiRNA对胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达的影响

目的观察VEGFsiRNA和bFGFsiRNA对胰腺癌sw1990、Panc-1及PCT-3细胞bFGF表达水平的影响。方法用VEGFsiRNA和bFGFsiRNA处理胰腺癌sw1990、Panc-1及PCT-3细胞,用RT-PCR法检测bFGF mRNA表达变化,用ELISA法检测bFGF蛋白表达变化。结果 EGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞bFGF mRNA相对表达量分别为0.50±0.05、0.81±0.09、0.46±0.06,bFGFsiRNA处理后分别为0.08±0.01、0.10±0.04、0.15±0.08,对照组分别为0.42±0.02、0.62±0.03、0.22±0.03。VEGFsiRNA处理后Panc-1、sw1990细胞bFGF mRNA表达强于对照组(P均<0.05),VEGFsiRNA处理后PCT-3细胞bFGFmRNA表达与对照组相比P>0.05。bFGFsiR-NA处理后PCT-3、Panc-1细胞bFGF mRNA表达弱于对照组(P均<0.05),bFGFsiRNA处理后sw1990细胞bFGFmRNA表达与对照组相比P>0.05。VEGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞培养液上清液bFGF蛋白浓度为(490.57±125.23)pg/mL、(77.49±10.07)pg/mL、(13.35±1.63)pg/mL,bFGFsiRNA处理后分别为(142.78±13.95)pg/mL、(11.41±8.14)pg/mL、(2.26±0.65)pg/mL,对照组分别为(316.29±57.39)pg/mL、(36.44±12.29)pg/mL、(3.87±0.42)pg/mL。VEGFsiRNA处理后sw1990、Panc-1细胞培养液上清液中bFGF浓度较对照组显著升高(P均<0.05),PCT-3细胞培养液上清液bFGF浓度与对照组相比P>0.05。bFGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞培养液上清液中bFGF浓度较对照组显著降低(P均<0.05)。结论 bFGFsiRNA抑制胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达;VEGFsiRNA上调胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达。

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的探讨microRNA-219a-5p(miR-219a-5p)和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(AFAP1L2)对胰腺癌细胞的作用。方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting法检测胰腺癌细胞株(PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1)及正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)miR-219a-5p、AFAP1L2的表达,采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达,荧光素酶实验观察二者碱基配对关系,进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果与HPDE细胞比较,胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低(P<0.05)。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达(P<0.05)。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后,与空白对照组(NC组)比较,pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度(OD)值升高(P<0.05),siAFAP1L2组OD值下降(P<0.05),AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后,与miR-NC组比较,miR-219a-5p mimics组OD值下降(P<0.05),miR-219a-5p inhibitor组OD值升高(P<0.05),miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用;上调miR-219a-5p表达,可诱导细胞S期阻滞,导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达;荧光素酶实验显示,miR-219a-5p与AFAP1L2的3'-URT互补结合,miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。

AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖及凋亡

目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.方法:以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、Mia Pa Ca-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测;构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2,转染Mia Pa Ca-2细胞,以Western blot及q RTPCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及m RNA变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)法检测转染后Mia Pa Ca-2细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blot及q RT-PCR法显示,AFAP-1L2蛋白及m R N A表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系.si AFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶a亚单位(P I3K C A)蛋白在s i A FA P-1L2组的表达量明显低于A FA P-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)control组(F=9.280,P=0.0139),a蛋白激酶(a-Akt)在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=7.719,P=0.0219),磷酸化a蛋白激酶(a-p A k t)在si AFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=5.507,P=0.0439).PI3KCAm RNA在si AFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及si RNA control组(F=20.16,P=0.0022),a-Akt m RNA在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F=6.068,P=0.0362),a-p Akt m R N A在s i A FA P-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=10.33,P=0.0114).MTT检测显示,在48、72及96h siAFAP-1L2干扰后Mia PaCa-2细胞增殖能力下降(F=3.924,P<0.05;F=6.812,P<0.01;F=7.003,P<0.01).流式细胞检测显示,si AFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高,G2及S期比例减少(F=4.87,F=5.26,F=4.94,均P<0.05),si AFAP-1L2干扰后Mia Pa Ca-2细胞凋亡率增高(F=7.231,P<0.01).结论:在分化程度低的胰腺癌细胞中AFAP-1L2表达较高,AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.

p53基因治疗联合TACE和射频消融在兔VX2肝癌模型中的疗效研究

目的探讨p53基因治疗联合经导管动脉化疗栓塞术(TACE)和射频消融对兔VX2肝癌的治疗效果以及对p53蛋白表达的影响。方法24只VX2肝癌模型兔随机分为A、B、C组,每组8只。A组接受瘤内注射rAd-p53,经肝动脉灌注超液态碘油和射频消融治疗,B组接受经肝动脉灌注rAd-p53和超液态碘油及射频消融治疗,C组接受TACE超液态碘油和射频消融治疗。治疗后第3天检测p53蛋白表达量,治疗后1、2、3、4周CT测量肿瘤体积,比较3组治疗前,治疗后1 d、3 d、1周和2周的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。最后处死实验兔,观察肿瘤大小及坏死情况并对标本行HE染色。结果治疗4周后组织形态学显示C组标本毁损中心区较A组和B组略小,HE染色显示大片凝固性坏死,凝固性坏死区周围有包膜形成。治疗后1~4周,CT显示A组和B组肿瘤体积呈持续缩小趋势,C组肿瘤体积在治疗后的前2周先缩小,治疗后3周恢复增长。治疗后1周3组肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2、3、4周A、B组肿瘤体积均较C组小,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1 d 3组ALT和AST水平均升高达到峰值,较治疗前显著升高(P<0.05);治疗后3 d、治疗后1、2周3组的ALT和AST在治疗后1 d的基础上持续下降,其中治疗后3 d、1、2周时,A、B组的ALT和AST水平显著低于C组(P<0.05),治疗后2周时A、B组ALT和AST基本恢复至术前水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与C组比较,治疗后3 d A组和B组p53表达更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论p53基因治疗联合TACE和射频消融可抑制肿瘤生长,是兔VX2肝癌的有效治疗方法。

血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和内皮抑素在肝硬化中的表达及意义

目的探究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和内皮抑素(endostatin)在肝硬化中的表达情况。方法收集从2015年1月至2016年6月河北医科大学第二医院肝胆外科收治的肝硬化患者22例,记为实验组;另选同期10例正常肝脏组织作为正常组。分别用HE和Masson三色染色观察两组标本;用免疫组织化学和酶联免疫吸附方法(ELISA)检测两组中VEGF,bFGF,Endostatin蛋白表达。结果 (1)HE染色和Masson三色染色结果显示:与正常组相比,实验组镜下肝脏组织中纤维条索明显增多,有明显的假小叶生成,其间广泛分布炎性细胞,汇管区结构明显消失,肝细胞有不同程度地坏死,纤维增生也更加明显;(2)免疫组织化学:正常组VEGF,bFGF和Endostatin的蛋白相对灰度值分别为0.06±0.03,0.08±0.05和0.07±0.02;实验组VEGF,bFGF和Endostatin的相对灰度值分别为0.16±0.02,0.14±0.03和0.14±0.01;与正常组相比,实验组VEGF,bFGF和Endostatin表达明显上调,且差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)ELISA试验:正常组VEGF,bFGF和Endostatin的吸光度(OD值)分别为283.05±14.32,30.03±2.11和4 350.63±636.66;实验组VEGF,bFGF和Endostatin的OD值分别为539.63±160.28,63.99±33.28和8 194.75±1 319.28;与正常组相比,实验组VEGF,bFGF和Endostatin表达均明显上调,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肝硬化患者VEGF,bFGF和Endostatin蛋白表达均明显上调,这些蛋白的表达与肝硬化发生发展密切相关。

先赛后练:“学、练、赛、评”一体化教学模式的实践探索

按照“先赛后练”的教学程序设计了“模拟无防守的篮球快攻”的比赛场景,在小学六年级篮球“传-接-运-投组合”单元教学中进行了教学尝试,“先赛”的设计具有在体验中认知篮球特性、在“比赛”中提升素养、在“运用”中学练技术等作用,在“后练”中针对性有侧重地解决发现的问题,并设计了评价的标准,实现了深度学习,为“学以致用”创造了条件。