乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达

利用PCR方法扩增日本乙型脑炎病毒(JEV)E全长基因,然后将其克隆到杆状病毒转座载体pBac-SC中,筛选重组质粒pBacSC-E,再转化入含有穿梭载体的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含E基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组杆状病毒DNA转染Sf9昆虫细胞,从而获得重组杆状病毒。用此重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,经Western-blot检测表明,E基因在昆虫细胞中获得表达,表达蛋白的分子量约53 ku,与预期结果大小一致,且能与日本乙型脑炎阳性血清发生特异性反应,这为进一步研究JEV亚单位疫苗和诊断抗原奠定了基础。

强化CIK细胞的培养及治疗中晚期卵巢癌的疗效观察

目的:从患者自体外周血培养强化的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),回输治疗9例术后或放化疗后的中晚期卵巢癌并观察疗效。方法:使用瓶壁包被抗CD3和抗CD28抗体,并外加IL-2和IL-15等方法,建立强化CIK培养体系,观察其增殖活性、功能基因表达和体外杀瘤效果。选取9例中晚期卵巢癌患者,分别进行至少3个疗程的强化CIK细胞静脉回输治疗,观察患者短期治疗效果、KPS变化、淋巴细胞亚群变化及相应的不良反应。结果:培养的强化CIK细胞增殖活性高,功能基因表达和体外杀伤卵巢腺癌细胞株SKOV3的能力均高于普通CIK方法;9例患者经强化CIK治疗后,CR 1例,PR 2例,SD 4例,PD 2例,总有效率达78%;KPS评分增加≥20分4例(44%),疼痛减轻≥50%4例(44%);治疗期间1例出现发热反应(T<38.5℃),1例出现皮疹伴瘙痒。结论:在放化疗降低肿瘤负荷,改善肿瘤微环境后,多次回输强化培养的CIK可有效杀伤体内残留肿瘤组织,改善中晚期妇科肿瘤患者的生存质量。