KRT6C在肺腺癌中的表达及临床意义

目的:探究肺腺癌中角蛋白6C(KRT6C)的表达水平及其临床意义。方法:通过数据库UALCAN,分析KRT6C的表达水平及与预后生存的关系,收集临床确诊为肺腺癌患者(未进行过放化疗)75例的癌组织和癌旁组织,制作病理蜡块及切片,通过免疫组化分析KRT6C的表达水平,并分析KRT6C与MKI67及CD39的相关性。结果:KRT6C在LUAD癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.001)。癌组织的KRT6C高表达与不良预后密切相关(P<0.001)。LUAD癌组织KRT6C表达水平高于癌旁正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05)。KRT6C与MKI67、CD39呈正相关(r=0.3700、0.3058,P<0.05)。结论:KRT6C可作为肺腺癌的一种新型诊断标志物,与临床增殖分子MKI67联合应用,具有很高的临床应用价值。与此同时,KRT6C可能通过影响腺苷通路,影响肺腺癌的进程。

接受索磷布韦/维帕他韦治疗的慢性丙型肝炎患者免疫检查点TIM-3、PD-1表达情况及临床意义

目的观察接受索磷布韦维帕他韦治疗的慢性丙型肝炎(CHC)患者免疫检查点T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)、程序性细胞死亡受体-1(PD-1)的表达及临床价值。方法选择2020年8月—2022年8月南京医科大学附属淮安第一医院收治的120例CHC患者作为CHC组,另选取同期于本院体检的118例研究对象,将其作为健康对照组,CHC组给予CHC组患者索磷布韦/维帕他韦治疗,连续治疗3个月。比较两组血生化指标、单核亚群细胞以及各亚群TIM-3、PD-1水平进行检测。结果未进行治疗时,CHC患者血清ALT、AST水平分别为[(74.0±35.8)U/L、(55.1±26.0)U/L]相较于健康对照组[(14.9±6.3)U/L、(19.2±7.0)U/L]显著升高;在治疗3个月末,CHC患者PD-1 CD4、PD-1 CD8、TIM-3 CD8、TIM-3 CD4水平分别为[(0.6±0.1)%、(1.7±0.6)%、(2.5±1.0)%、(6.5±1.0)%]比对照组[(0.4±0.1)%、(1.5±0.7)%、(1.7±0.8)%、(6.0±2.4)%]高(均P<0.05)。结论索磷布韦/维帕他韦治疗CHC,有助于患者肝功能的改善,而CHC患者存在外周血部分淋巴细胞比例紊乱,负性免疫检查点分子的高表达可对细胞免疫进行调控,对于单药治疗未见症状改善的患者,可在应用索磷布韦治疗的基础上加用维帕他韦治疗。

耐药鲍曼不动杆菌不同年份分离株耐药元件基因比较研究

目的调查两组相隔7年的鲍曼不动杆菌菌株可能存在的耐药基因状况及菌株间的亲缘关系。方法分别收集南京医科大学附属淮安第一医院2008年20株鲍曼不动杆菌,2016年20株鲍曼不动杆菌。菌种鉴定为鲍曼不动杆菌种特异mdfA基因与blaoyA基因PCR双重检测为阳性方确认为鲍曼不动杆菌。再用PCR方法检测32种β-内酰胺类药物获得性耐药基因、15种氨基糖苷类药物获得性耐药基因、10种可移动遗传元件遗传标记,最后对检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。结果2016年分离株对第三代头孢类药物、碳青霉烯类药物、氨基糖苷类药物、喹诺酮药物均为耐药。2008年分离株仅对第三代头孢类药物均为耐药,而对碳青霉烯类药物均为敏感,对喹诺酮药物、氨基糖苷类药物分别有50.00%和60.00%的敏感性。2008和2016年分离株均检出blaADC和blaOXA-1,但bldOXA2册、blaOXA-23群只有2016年分离株均被检出。2008年分离株对第三代头孢类药物耐药主要与bldspc相关,2016年分离株对第三代头孢类药物、碳青霉烯类药物耐药主要与blaADC、blaOXA-2和blaOXA-23群相关。2016年分离株均测出aac(2)-I b、aph(3)-I、armA等3种氨基糖苷类药物耐药相关基因,而2008年分离株均无检出。可移动遗传元件遗传标记tmpU、tmp513、IS26和ISabal等4种也只有2016年分离株被全部检出。菌株亲缘关系分析可见2008和2016年不同年份分离株分成两个独立的簇群(A簇群和B簇群),2016年分离株聚集性更强相差系数更小。A和B族群均可分为两个亚簇群。A-1亚簇群有两个克隆播散,A-2、B-1和B2亚簇群各有一个克隆播散。其中2016年分离株B-簇群一个有14株菌构成的大克隆播散。分离株耐药元件检测阳性模式显示,2008年分离株仅携带2~7种耐药元件基因;2016年分离株则携带14种~16种耐药元件基因。结论多种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类药物耐药基因和可移动遗传元件是导致鲍曼不动杆菌对抗菌药物耐药的重要原因。在同一家医院的对相隔7年的鲍曼不动杆菌临床分离株进行耐药元件基因检测与分析是国内首次报道。不同年份分离株的耐药性和耐药元件基因携带状况差异明显:2016年分离株比2008年分离株耐药性更强,携带的耐药元件基因更多。2008年和2016年分离株均有克隆播散,提示有医院感染的存在。

TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价

目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。

矽肺结核合并症大鼠模型与病理观察

目的建立不同分期矽肺病合并结核感染的大鼠模型,比较病理特征并分析矽肺病对结核感染的影响。方法 48只大鼠随机等量分为A、B、C、D共4组,A组不作处理,B、C、D组采用非暴露式气管内注入法于第0、30或60天染尘,第50天A、B、C、D组均尾静脉注射结核标准株H37Rv悬液,结核感染40 d后剖杀大鼠取肺。石蜡包埋切片,HE染色观察组织结构,Ziehl-Neelsen法抗酸染色检测结核菌,Warthin-Starry银染法显示尘粒分布,菌落计数实验反映结核载量。结果 B、C、D组大鼠染尘30、60或90 d后可分别造成Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期矽肺,尾静脉结核攻击可导致肺部结核感染,结核载量和肺组织病变程度均与矽肺病程有关。结论成功建立大鼠矽肺结核合并症模型,将有助于矽肺病与结核病相互推动进程中的"对话"机制研究。

LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用

目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。

BioJN发酵技术服务系统PC端的设计、开发及应用

为解决发酵行业传统操作模式的弊端问题,利用Python 3.6设计并开发了BioJN发酵技术服务系统PC端。BioJN系统PC端具有简单明了的操作界面和功能齐全的数据可视化模块,依靠MySQL数据库建立了用于存储、检索和管理数据的完整数据库系统,且在通信模块预留了DDE、OPC DA、OPC UA三种通信接口用于数据采集。BioJN系统PC端可将本地采集到的数据上传至云服务器,与研究团队已搭建好的服务器配合使用,可实现用户权限管理、发酵数据管理和发酵设备远程监控与控制的功能。利用BioJN系统PC端连接不同的发酵设备进行多次发酵实验,在实验过程中充分验证了其有效性和通用性。结果表明,BioJN系统PC端的各个功能模块都能够稳定运行,达到预期效果。

维生素D治疗小鼠肺烟曲霉感染的机制研究

目的通过检测维生素D(Vit D)在小鼠肺感染烟曲霉后,对其肺组织和相关炎症因子的影响,以探究Vit D在烟曲霉肺部感染治疗中的作用机制,为临床治疗提供参考依据。方法选择一组实验小鼠喂食含Vit D的饲料(Vit D+组),另一组小鼠喂食不含Vit D的饲料(Vit D-组),每组10只。喂养7 d后,用一定量的烟曲霉活化孢子感染小鼠。处死小鼠,取其肺组织和血清:用10%中性甲醛浸泡肺组织,行HE染色、革兰染色、糖原染色,观察肺实变情况;免疫组织化学法观察肺组织炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达;同时用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;健康小鼠10只,喂食饲料,7 d后取肺巨噬细胞在体外与烟曲霉孢子共培养于6孔板,其中3孔培养基中加入Vit D,另3孔培养基不加Vit D,收集共培养1和3 h后的肺巨噬细胞,荧光显微镜下观察肺巨噬细胞吞噬烟曲霉孢子的变化,并用Trizol提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-8和NF-κB的表达,同时采用Western blotting检测IL-8和NF-κB的表达。结果活化的烟曲霉孢子感染小鼠后,Vit D+组小鼠较Vit D-组小鼠肺部真菌量减少、肺实变轻、炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达低(P<0.05),相应血清中的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量减少(P<0.05);肺巨噬细胞与烟曲霉孢子体外共培养后,Vit D+组小鼠肺巨噬细胞吞噬烟曲霉孢子可在一个合理水平而不易引起自噬死亡;同时RT-PCR和Western blotting结果显示Vit D+组小鼠的IL-8和NF-κB表达低于Vit D-组小鼠(P<0.05)。结论烟曲霉感染小鼠后,Vit D可通过抑制炎症因子的表达调控巨噬细胞抵抗烟曲霉的感染,从而提高小鼠的生存率和生存质量,在烟曲霉肺部感染治疗中起重要作用。

卵巢癌发生和预后关键基因的生物信息学分析

目的从TCGA和GTEX数据库分析卵巢癌中的异常表达及与预后相关的基因。方法利用GEPIA生物信息学分析平台对TCGA数据库和GTEX数据库中卵巢癌与正常组织的关键差异mRNA进行分析。利用R软件进行基因本体富集分析和通路分析,筛选异常表达和与预后相关的基因。结果共鉴定出差异表达基因7638个,其中上调基因2622个,下调基因5016个。前10位上调的基因包括CLDN3、WFDC2、SLPI、FOLR1、MSLN、CD24、S100A1、CLDN4、LCN2和KRT7,前10位下调的基因包括AL162151.3、STAR、MEG3、DLK1、PROK1、C7、WFIKKN2、DIO3OS、MIR202HG和PLA2G2A。在100个与卵巢癌总生存时间最相关的基因中,PI3、CACNA1C、RPS6KA2、RIPK4、TPT1、SORCS2、CXCL11、CXCL13、SELL、ADAMDEC1的表达存在显著差异。其中PI3和RIPK4 mRNA在卵巢癌中高表达,生存分析提示高表达与预后不良有关。结论PI3和RIPK4 mRNA在卵巢癌中高表达,与卵巢癌的预后密切相关。它们有可能成为卵巢癌诊断的生物标志物或治疗靶点。

pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化

目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。

通用型毕赤酵母高密度培养策略的网络共享技术

甲醇营养型毕赤酵母是近年来广泛应用的一种外源蛋白表达系统。本课题组在前期研究中构建了一系列能够满足绝大多数毕赤酵母高密度发酵过程工艺控制需求的通用型控制策略:用于细胞培养期的改良型DO-Stat甘油流加策略;用于甲醇诱导期的“甲醇浓度受限-溶解氧浓度充足”诱导控制策略;用于甲醇诱导期的“甲醇浓度充足-溶氧浓度受限”诱导控制策略。然而,这些控制策略的推广需要极高的时间和人力成本。为此,本文开发了基于Django框架搭建的服务器程序,以实现通用型毕赤酵母高密度培养策略的网络共享,并依靠前期开发完成的客户端程序实现控制软件包与不同发酵设备之间的对接。在甲醇利用快型(methanol utilization plusphenotype,Mut+)毕赤酵母表达人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子突变体融合蛋白(HSA-GCSF m)和甲醇利用慢型(methanol utilization slow phenotype,Mut S)毕赤酵母表达人源溶菌酶(hLYZ)实验中分别验证了以上通用型控制策略的网络共享功能。结果表明,Mut+型毕赤酵母诱导60 h后HSA-GCSF m的质量浓度达到532 mg/L;Mut S型毕赤酵母诱导69 h后总酶活达到84032.0 U/mg,对应的比酶活力为52884.0 U/mg;HSA-GCSF m产量和hLYZ活力均达到较优水平。

肺癌组织UCHL1高表达与不良预后相关

目的:探讨泛素C末端水解酶L1(UCHL1)在肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:Oncomine数据库筛选UCHL1基因在肺癌中的表达;STRING数据库构建UCHL1互作网络并进行富集分析;GEPIA数据库和免疫组化分析肺癌及癌旁组织UCHL1蛋白的表达;Kaplan Meier-Plotter分析UCHL1和相关蛋白与患者总生存率(OS)的关系;χ^(2)检验分析UCHL1表达与肺癌患者临床特征的相关性;Cox回归模型预测肺癌患者OS的危险因子。结果:Oncomine数据库研究表明UCHL1在肺癌中显著性上调;STRING数据库筛选出与UCHL1互作得分前10的蛋白;UCHL1及相关蛋白主要富集于蛋白去泛素化、宿主细胞成分、泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白质水解通路;UCHL1及相关蛋白(UCHL3、SNCA)在肺癌中存在差异表达;UCHL1低表达患者的OS明显增高,SNCA低表达患者的OS降低;UCHL1表达与患者性别和病理分期显著相关;UCHL1表达和N分期是肺癌患者OS的独立危险因素。结论:UCHL1在肺癌组织中表达上调并与肺癌患者不良预后相关,有可能成为肺癌患者治疗以及判断预后的分子靶点。

基于GEO数据库筛选川崎病的差异表达基因及通路的研究

目的 应用生物信息学方法分析与川崎病发病可能相关的基因及蛋白信号通路。方法 从综合基因表达数据库中下载川崎病基因表达数据集GSE18606和GSE68004。利用GEO2R工具对数据集进行预处理,筛选差异基因,将两者进行交集,得到差异表达基因(DEGs)。利用R软件富集分析DEGs的生物学功能和信号通路,利用STRING数据库和cytoscape软件构建并改进蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,在mirdip数据库中预测核心基因对应的靶miRNAs。结果 在GSE18606和GSE68004数据集中共筛选出269个DEGs;DEGs的生物学功能主要包括免疫反应、中性粒细胞活化、细胞因子产生的正向调控、免疫反应T细胞活化、分泌颗粒膜和葡萄糖结合免疫受体活性等;信号通路主要包括造血细胞系、白细胞内皮细胞迁移、Toll样受体信号通路、胰岛素信号通路和T细胞受体信号通路;PPI网络包含218个DEGs和674对互相作用关系,其中STAT3、FGR、IL7R、HOOK3、MAPK14、LILRB2、CD2、CSF3R、SOCS3、GZMA、H2AC20、GZMK、H2BC5、ITK共14个为网络中的核心基因,预计受445个miRNA调控。结论 本研究应用生物信息学方法对公共GEO数据库中川崎病差异表达基因及其生物学功能和相关信号通路进行了筛查及预测,为今后阐明KD的病因及发病机制提供了新的研究方向。

RNASEH2A在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探究核糖核酸酶H2亚基A(RNASEH2A)在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,分析其与临床检测指标的关系,从而进一步提高HCC的临床诊断水平。方法:收集南京医科大学附属淮安第一医院病理科2016—2017年诊断为HCC患者(未放化疗)的癌组织及癌旁组织。制作病理蜡块,切片并免疫组化分析RNASEH2A在HCC癌组织和癌旁组织中的表达水平。收集临床患者增殖相关分子MKI67的表达水平,并分析RNASEH2A与MKI67的表达关系,从而进一步说明RNASEH2A与增殖的相关性。检测腺苷通路分子CD39表达,并分析RNASEH2A与其表达的关系。通过生物信息数据库分析RNASEH2A在HCC癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析表达差异,并进行生存分析。结果:生物信息分析结果显示,在HCC患者中,癌组织的RNASEH2A表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织的RNASEH2A高表达与不良预后密切相关(P<0.001)。免疫组化的结果显示,HCC组织的RNASEH2A高表达于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息分析结果显示,RNASEH2A与MKI67和CD39呈正相关性(r=0.67、0.17;P<0.05)。结论:在HCC中,RNASEH2A可作为一种诊断及预后的标志物,进一步提高HCC的早期诊断和早期治疗。

蜡螟在念珠菌属真菌动物模型中应用价值的探究

目的构建蜡螟的念珠菌属真菌动物模型并探究真菌对蜡螟的细胞、组织、器官的影响以及念珠菌属真菌蜡螟模型的应用价值。方法用注射器吸取一定量的菌液注入蜡螟体内,在30℃培养箱中培养一定时间后,取出其中的一小部分蜡螟进行解剖,观察真菌菌丝对蜡螟肠道组织的损伤情况,取另一小部分蜡螟做病理切片,同时记录不同时间段蜡螟的生存死亡情况;将空白蜡螟断头取血,分离淋巴细胞后用DMEM培养,用热灭活真菌处理蜡螟淋巴血细胞,37℃培养3 h后,分别用ROS(氧化应激水平)探针和溶酶体探针标记ROS、溶酶体,观察真菌刺激细胞时的自噬水平的变化。结果真菌菌丝对蜡螟的肠道组织产生损伤,病理切片显示大量菌丝生长,细胞吞噬真菌后,ROS升高,溶酶体与菌共定位。结论念珠菌属真菌的蜡螟模型中,真菌对蜡螟的细胞、组织、器官均有损伤,蜡螟的细胞自噬水平升高,并且此模型具有易操作,价格低廉,便于进行统计学分析等优势。

不同形态的烟曲霉对巨噬细胞自噬水平的影响

目的探究烟曲霉静息孢子、膨胀孢子以及菌丝对巨噬细胞自噬水平的影响。方法培养烟曲霉并收获静息孢子,在沙保弱液体培养基中振荡不同时间获得膨胀孢子及菌丝。以3种形态的烟曲霉分组处理RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,逆转录PCR检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12 mRNA的转录水平。观察不同形态的烟曲霉刺激GFP-LC3B-RAW264.7细胞后GFP-LC3B的表达与定位。结果膨胀的烟曲霉孢子及菌丝刺激巨噬细胞后LC3BⅡ表达水平升高;Atg5与Atg12 mRNA的转录均明显增高,Atg7转录水平无显著变化;膨胀孢子诱导LC3B呈斑点样聚集并与之共定位,烟曲霉菌丝刺激后自噬体增多。结论烟曲霉膨胀孢子与菌丝能显著提高巨噬细胞自噬水平,静息的分生孢子不能引起巨噬细胞自噬功能的应答。

改良革兰染色法在显示石蜡切片真菌中的应用

目的建立真菌的病理切片改良革兰染色法。方法选取确诊真菌感染的组织蜡块,切若干空白片,通过苏木素-伊红染色(HE)、高碘酸-无色品红染色(PAS)、六胺银染色(GMS)、改良革兰染色后,比较改良革兰染色法的染色效果。结果改良革兰染色法的染色效果好,该法具有易操作、染色效果稳定等优点。结论改良革兰染色法能够清晰地显示出组织切片中的真菌,并且染色效果稳定,在检测组织中的真菌时可发挥重要的辅助诊断价值,具有广泛的应用前景。

蜡螟抗白假丝酵母菌自噬机制的初步研究

目的探究白假丝酵母菌感染蜡螟时蜡螟的自噬相关通路蛋白的表达情况。方法用一定量的白假丝酵母菌的活化孢子感染蜡螟,经过12h,解剖蜡螟收集蜡螟细胞并裂解细胞,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性;解剖蜡螟取肠道组织并用PI染死细胞。取不同感染时间段的淋巴细胞,用裂解液裂解,离心取上清,用Western blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平。结果活化的孢子注射至蜡螟体内后,其活性受到抑制;蜡螟的肠道细胞被定位在上面的菌丝损伤并且孢子活性受到抑制。随着蜡螟感染白假丝酵母菌时间的递增,其自身的Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平在不断增高且在感染24h最高。结论白假丝酵母菌感染蜡螟后,蜡螟的淋巴细胞和肠道细胞通过升高Dectin-1、ROS、LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平发挥杀伤孢子的作用。

青蒿琥酯治疗肺烟曲霉感染自噬机制

目的探究青蒿琥酯在鼠肺感染烟曲霉后,对鼠肺自噬相关蛋白的表达影响。方法用一定量的烟曲霉的活化孢子感染鼠肺,建立肺烟曲霉病模型。同时用青蒿琥酯注射一组鼠肺,两性霉素B注射一组鼠肺,剩余的作为感染组。24h后,取各组鼠肺进行病理切片染色,观察各组病理情况;取各组鼠肺的组织并匀浆,收集各组的孢子,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性并将肺巨噬细胞进行分离、裂解,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达水平。结果青蒿琥酯注射组的鼠肺病理切片中的孢子比感染组数量少且聚集在一起,未长出菌丝,而体外分离的真菌孢子,青蒿琥酯组的活性明显受到抑制。经Western-blot显示青蒿琥酯具有增强肺巨噬细胞Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达。结论青蒿琥酯可通过抑制烟曲霉的活性和增强鼠肺巨噬细胞的自噬水平,对抗鼠肺烟曲霉感染。

青蒿琥酯抗蜡螟烟曲霉感染自噬机制初步研究

目的探究青蒿琥酯在蜡螟感染烟曲霉后,对蜡螟的自噬相关蛋白的表达影响。方法用一定量的烟曲霉的活化孢子感染蜡螟,经过1 h,用青蒿琥酯注射一组蜡螟,两性霉素B注射一组蜡螟,剩余的作为感染组。12 h后,取各组蜡螟进行病理切片染色,观察各组的病理情况;取各组的蜡螟的淋巴液,收集各组的孢子,用真菌活性检测试剂盒检测孢子活性并将淋巴细胞分离、裂解,离心取上清,用Western-blot法检测上清液中的Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达水平。结果青蒿琥酯注射组的蜡螟病理切片中的孢子比感染组数量少且聚集在一起,未长出菌丝,而体外分离的真菌孢子,青蒿琥酯组的活性明显受到抑制。经Western-blot显示青蒿琥酯能增强淋巴细胞Dectin-1、ROS、LC3Ⅱ的表达。结论青蒿琥酯可通过抑制烟曲霉的活性和增强蜡螟淋巴细胞的自噬水平,对抗蜡螟烟曲霉感染。