低氧对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞表达葡萄糖-6-磷酸异构酶及细胞周期的影响

目的 研究将通过对骨性关节炎（OA）和RA患者的关节滑膜成纤维样细胞（FLS）进行正常氧和低氧培养后,观察FLS表达葡萄糖-6-磷酸异构酶（G6PI）和缺氧诱导因子（HIF）-1α的变化情况及对细胞周期的影响.方法 原代培养OA和RA患者的滑膜成纤维细胞,分别在正常氧和3％氧环境中培养24 h,实时荧光定量PCR检测G6PI、HIF-1α mRNA表达水平,蛋白印迹法检测G6PI、HIF-1α蛋白表达水平.流式细胞仪检测细胞周期.采用t检验、Mann-Whitney U检验进行统计学处理.结果 与正常氧培养相比,经3％氧培养RA FLS G6PI mRNA的升高倍数（2.6±0.4）明显高于OA FLS的升高倍数（1.5±0.4）（t=4.94,P＜0.05）;RA FLS G6PI蛋白表达水平明显高于OA FLS（t=2.81,P＜0.05）.与正常氧培养相比,RA FLS经3％氧培养HIF-1α mRNA的升高倍数（2.9±0.8）明显高于OA FLS的升高倍数（1.4±0.4）（t=4.51,P＜0.05）;RA FLS HIF-1α蛋白表达水平明显高于OA FLS（t=14.54,P＜0.05）.在3％氧低氧培养环境中,与正常氧培养相比,RA FLS G1期显著减少（t=11.31,P＜0.05）,S期（t=-7.62,P＜0.05）、G2期显著增加（t=-9.95,P＜0.05）.结论 在RA低氧环境中,G6PI、HIF-1αmRNA和蛋白水平在FLS中的表达增高,FLS细胞增殖加快.

G6PI对阿霉素诱导类风湿关节炎关节滑膜细胞凋亡的保护作用

研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6PI)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响,探讨其作用机制。本研究从RA的关节滑膜组织中分离培养FLS,利用ADR建立细胞凋亡模型,通过流式细胞仪检测G6PI对细胞凋亡的影响,并通过western blot、Q-PCR检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Fas、Cyclin B1的表达;收集细胞培养上清,通过ELISA方法测定IL-1β和TNF-α含量。结果显示,G6PI(1μg/ml)和G6PI(10μg/ml)组RA-FLS的凋亡指数均显著低于ADR对照组;G6PI(1μg/ml)组与G6PI(10μg/ml)组间无显著差异。ADR凋亡模型中,Caspase 3、Fas和Bax表达明显上调,Cyclin B1下调;G6PI作用后,Caspase 3和Fas表达明显低于对照组,Cyclin B1表达则明显高于对照组。G6PI处理组的细胞培养上清中IL-1β和TNF-α含量均显著高于ADR对照组。研究表明G6PI可能通过Fas介导的Caspase通路来保护FLS免遭凋亡,同时促进RA-FLS分泌炎症因子IL-1β和TNF-α,从而参与RA的发生与发展。