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单管巢式PCR结合熔解曲线分析检测乙肝病毒YMDD变异 被引量:6
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作者 杨建荣 戴利亚 陈占国 《实用医学杂志》 CAS 2007年第2期195-198,共4页
目的:在建立针对乙肝病毒(HBV)聚合酶基因的单管巢式PCR方法的基础上,结合熔解曲线分析,提高HBVYMDD变异检测的灵敏度。方法:针对HBV聚合酶基因段设计两对熔解温度(Tm)差异较大的内、外引物,在一个封闭反应体系中进行二次扩增并结合熔... 目的:在建立针对乙肝病毒(HBV)聚合酶基因的单管巢式PCR方法的基础上,结合熔解曲线分析,提高HBVYMDD变异检测的灵敏度。方法:针对HBV聚合酶基因段设计两对熔解温度(Tm)差异较大的内、外引物,在一个封闭反应体系中进行二次扩增并结合熔解曲线分析法检测HBVYMDD变异。结果分别与单纯PCR结合熔解曲线分析和测序法进行比较,并对107例未经拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBVYMDD的自发变异进行分析。结果:建立在单管巢式PCR方法上的熔解曲线分析检测HBVYMDD变异灵敏度要高于单纯PCR结合熔解曲线分析的方法(P<0.001),与直接测序法的符合率为81.3%。在114例CHB标本中YMDD及其变异检出率为95.6%。用本方法在107例未经拉米夫定治疗的CHB病人中YMDD自发变异检出率为31.8%。结论:单管巢式PCR结合熔解曲线分析法提高了YMDD变异检测的灵敏度,而且是一种简便、特异性较好的方法。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 聚合酶链反应 熔解曲线分析 YMDD 变异
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IL-17、MMP-3在类风湿关节炎患者滑膜液及血浆中的表达及意义 被引量:10
2
作者 卢洁 魏国忠 戴利亚 《放射免疫学杂志》 CAS 2011年第2期205-207,共3页
目的:分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血浆中白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的水平及其临床意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者滑膜液及血浆中IL-17及MMP-3的水平,分析IL-17及MMP-3与临床指标的关系。结... 目的:分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血浆中白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的水平及其临床意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者滑膜液及血浆中IL-17及MMP-3的水平,分析IL-17及MMP-3与临床指标的关系。结果:RA患者滑膜液IL-17及MMP-3水平明显高于对照组(P均<0.01);RA患者活动组血浆IL-17及MMP-3水平明显高于稳定组(P均<0.01),而后者又明显高于对照组(P均<0.01);RA患者滑膜液及血浆中MMP-3水平与CRP、DAS28评分呈正相关性(P均<0.05),与RF不存在相关关系(P>0.05);RA患者滑膜液及血浆中IL-17水平与MMP-3、CRP、RF及DAS28评分均呈正相关(P均<0.05)。结论:RA患者的滑膜液及血浆中存在异常增高的IL-17及MMP-3,且其水平与病情活动相关,血浆IL-17可作为RA病情活动的参考指标之一。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 白细胞介素-17(IL-17) 基质金属蛋白酶-3(MMP-3) 酶联免疫吸附法
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妊娠妇女抗心磷脂抗体的调查及其与不良妊娠的关系 被引量:15
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作者 卢洁 张德亭 戴利亚 《医学研究杂志》 2012年第6期158-160,共3页
目的通过检测抗心磷脂抗体(aCL)水平,调查温州地区妊娠妇女aCL的阳性率及亚型的分布。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测妊娠孕妇aCL水平,分析其与不良妊娠的关系。结果 3448例妊娠待产孕妇中aCL阳性者79例,阳性率2.3%;79例aCL阳... 目的通过检测抗心磷脂抗体(aCL)水平,调查温州地区妊娠妇女aCL的阳性率及亚型的分布。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测妊娠孕妇aCL水平,分析其与不良妊娠的关系。结果 3448例妊娠待产孕妇中aCL阳性者79例,阳性率2.3%;79例aCL阳性孕妇其亚型以IgG和IgM多见,发生不良妊娠亦以IgG和IgM亚型多见;79例aCL阳性孕妇其抗体效价以低效价为主(73.4%),中效价次之(25.3%),高效价仅出现1例(1.3%);aCL阳性与阴性的孕妇的妊娠结局比较,其各种不良妊娠的发生率均没有统计学意义(P均>0.05)。结论 aCL在温州地区妊娠妇女中阳性率较低,对妊娠结局影响不大,可能不是孕妇不良妊娠的危险因素。 展开更多
关键词 抗心磷脂抗体(aCL) β2-糖蛋白1妊娠结局不良妊娠流产
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干扰素-γ诱导单核细胞因子(MIG)在类风湿关节炎患者滑膜液及血清中的表达及意义 被引量:2
4
作者 卢洁 童郁 +1 位作者 张德亭 戴利亚 《医学研究杂志》 2011年第12期87-89,共3页
目的分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血清中干扰素(IFN)-γ诱导单核细胞因子(MIG)水平变化,探讨MIG在RA的临床意义。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测RA患者滑膜液及血清中MIG及IFN-γ水平,分析MIG与IFN-γ及临床指标的关系。... 目的分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血清中干扰素(IFN)-γ诱导单核细胞因子(MIG)水平变化,探讨MIG在RA的临床意义。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测RA患者滑膜液及血清中MIG及IFN-γ水平,分析MIG与IFN-γ及临床指标的关系。结果滑膜液中,RA患者MIG及IFN-γ水平明显高于对照组(P均<0.01),MIG与IFN-γ水平呈正相关(r=0.486,P=0.035);血清中,RA患者活动组MIG及IFN-γ水平明显高于稳定组(P均<0.01),而后者又明显高于对照组(P均<0.01),RA活动期患者MIG与IFN-γ水平呈正相关(r=0.304,P=0.043);30例活动期RA患者治疗前MIG及IFN-γ水平明显高于治疗后(P均<0.01),且治疗前后MIG水平的变化与RF、ESR、CRP的变化无相关性(P均>0.05),与DAS28的变化呈正相关(r=0.405,P=0.029)。结论 RA患者的血清及滑膜液中存在异常增高的MIG,且其水平与病情活动相关,可作为RA病情活动新的参考指标,血清中MIG水平变化可为RA的疗效提供参考。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 干扰素-γ诱导单核细胞因子(MIG) 干扰素-Γ
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HT合并妊娠妇女外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的临床分析 被引量:1
5
作者 卢洁 许锴 +1 位作者 张德亭 戴利亚 《放射免疫学杂志》 CAS 2011年第2期221-223,共3页
桥本甲状腺炎(HT)是一种器官特异性自身免疫性疾病,而HT的病理特点为大量淋巴细胞浸润,甲状腺组织破坏。妊娠是一种半同种异体移植现象,正常妊娠时母体形成一种特殊类型的外周免疫耐受,即妊娠免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不... 桥本甲状腺炎(HT)是一种器官特异性自身免疫性疾病,而HT的病理特点为大量淋巴细胞浸润,甲状腺组织破坏。妊娠是一种半同种异体移植现象,正常妊娠时母体形成一种特殊类型的外周免疫耐受,即妊娠免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠。 展开更多
关键词 血T淋巴细胞亚群 妊娠妇女 临床分析 细胞因子 特异性自身免疫性疾病 桥本甲状腺炎 淋巴细胞浸润 同种异体移植
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一个遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症家系的基因分析 被引量:20
6
作者 戴利亚 张德亭 +3 位作者 谢海啸 张扬 郑芳秀 王明山 《温州医学院学报》 CAS 2015年第5期376-380,共5页
目的:对一个遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症家系进行FⅪ基因突变的分析和家系调查,探讨其分子发病机制。方法:检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(... 目的:对一个遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症家系进行FⅪ基因突变的分析和家系调查,探讨其分子发病机制。方法:检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、凝血因子Ⅻ活性(FⅫ:C)、FⅪ活性(FⅪ:C)和FⅪ抗原(FⅪ:Ag)含量等进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者FⅪ基因所有15个外显子、侧翼、5’和3’非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序证实所发生的突变。结果:先证者APTT延长为50.0 s(正常为27.0~41.0 s),先证者弟弟与儿子APTT同样延长,分别为53.7 s和51.8 s,家系其他成员APTT无明显延长;先证者及其弟弟、儿子、父亲的FⅪ:C明显减低,分别为22.5%、22.3%、35.5%和42.0%,FⅪ:Ag含量分别为29.0%、18.0%、29.0%和40.0%,表现为交叉反应物质(CRM)阴性;先证者母亲凝血指标均在参考范围内。基因测序发现先证者及其父亲、弟弟、儿子FⅪ基因第8号外显子存在C16642T杂合无义突变,导致编码第263位氨基酸谷氨酰胺提前出现终止密码(Gln263stop)。结论:FⅪ基因第8号外显子C16642T杂合无义突变是导致该遗传性FⅪ缺陷症家系FⅪ水平降低的主要原因。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅺ 家系 杂合 无义突变
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UPLC-Q-TOF/MS联用技术在妊娠期糖尿病血清标记物筛选中的应用 被引量:4
7
作者 李君 戴利亚 吴文鹤 《现代实用医学》 2020年第2期195-197,I0003,共4页
目的运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术全面筛选妊娠期糖尿病潜在血清标记物。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析妊娠期糖尿病(GDM)患者(孕中期23例,孕晚期24例)和健康对照孕妇(孕中期30例,孕晚期24例)血清中... 目的运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术全面筛选妊娠期糖尿病潜在血清标记物。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析妊娠期糖尿病(GDM)患者(孕中期23例,孕晚期24例)和健康对照孕妇(孕中期30例,孕晚期24例)血清中小分子代谢物差异,结合无监督的主成分分析方式和正交偏最小二乘判别分析法筛选生物标记物。结果与健康对照孕妇比较,孕中期和孕晚期GDM患者共筛选到13个潜在血清标记物,分别是参与糖代谢的丙酮酸、乳酸,氨基酸代谢的半胱氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、亮氨酸和脂质代谢的亚油酸、棕榈酸、花生四烯酸、花生二烯酸、12-过氧羟基二十四碳四烯酸、12-羟基二十碳四烯酸和十八烷二酸。结论建立的UPLC-Q-TOF/MS代谢组学分析方法可为全面研究GDM发生发展提供一个优良的技术平台,筛选到的13个血清标记物有望促进GDM的早期和系统诊断。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 血清标记物 超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 代谢组学
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新的纯合子Leu519Arg导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析 被引量:8
8
作者 戴利亚 张德亭 +4 位作者 林杰 王莹宇 童郁 李君 王明山 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期466-469,共4页
目的对一个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行FⅫ基因突变的分析和家系调查,探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ... 目的对一个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行FⅫ基因突变的分析和家系调查,探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、FⅪ活性(FⅪ:C)、凝血因子Ⅻ活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅫ:Ag)含量等进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者FⅫ基因所有14个外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序证实所发生的突变。选择100名健康体检者作对照。结果先证者APTT明显延长为106.4S,先证者二女儿和外孙女APTT略延长,分别为42.8s和43.6s,家系其他成员APTT无明显延长;先证者及其儿子、大女儿、二女儿、外孙女的FⅫ:c明显减低,分别为2.0%、23.0%、23.0%、24.0%和23.0%,FⅫ:Ag含量分别为1.0%、21.0%、23.0%、23.0%和23.0%,表现为交叉反应物质(CRM)阴性。基因测序发现先证者FⅫ基因启动子区为46T/T型及13号外显子存在c.1556T〉C纯合突变,导致Leu519Arg;先证者儿子、大女儿、二女儿及外孙女为46C/T型,并且发现存在c.1556T〉G杂合突变;先证者妻子启动子区C/C型,且无上述基因突变。结论该家系发现的FⅫ基因13号外显子区c.1556T〉G尚未见报道。c.1556T〉G影响了FⅫ催化功能,与FⅫ水平的降低有关。 展开更多
关键词 因子Ⅻ缺乏 系谱 纯合子 突变
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急性冠脉综合征血浆抗凝血酶与凝血指标的检测及其临床意义 被引量:4
9
作者 戴利亚 李君 张德亭 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第7期1753-1754,1756,共3页
目的:检测急性冠脉综合征患者外周血抗凝血酶和凝血指标并评价临床意义。方法:急性冠脉综合征患者102例为ACS组,其中急性心肌梗死(AMI)49例,不稳定型心绞痛(UA)53例。测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB... 目的:检测急性冠脉综合征患者外周血抗凝血酶和凝血指标并评价临床意义。方法:急性冠脉综合征患者102例为ACS组,其中急性心肌梗死(AMI)49例,不稳定型心绞痛(UA)53例。测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、抗凝血酶活性(AT:A)、D-二聚体(D-D)。稳定型心绞痛组(SA)66例,正常人50例为对照组。结果:ACS组AT:A明显低于SA组及对照组,PT,APTT明显缩短、FIB及D-D明显升高(均P<0.01)。SA组与对照组各指标差别无统计学意义。AMI组与UA组比较:AT:A降低、PT和APTT缩短、FIB和D-D增高(P<0.01)。ACS组AT:A与FIB、D-D相关系数分别为r2=0.4751和r2=0.5612,P<0.05,有一定相关性。结论:抗凝血酶及凝血指标能及时反映ACS患者体内凝血和抗凝系统失衡情况,可作为有效预测急性心血管事件发生及危险分层的临床指标。 展开更多
关键词 冠脉综合征 抗凝血酶 凝血指标
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纯合子Gly542Ser导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析 被引量:6
10
作者 戴利亚 许锴 +4 位作者 赵秘胜 程晓丽 童郁 李君 王明山 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期214-218,共5页
目的探讨姨表近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系的发病机制。方法家系调查。2015年2月于温州医科大学温州市第三临床学院收治1例遗传性FⅫ缺陷症患者。经用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活... 目的探讨姨表近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系的发病机制。方法家系调查。2015年2月于温州医科大学温州市第三临床学院收治1例遗传性FⅫ缺陷症患者。经用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ:C)、FⅫ活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅫ:Ag)测定进行表型诊断。用DNA直接测序法分析先证者F12基因所有14个外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序证实所发生的突变。采用ClustalX-2.1-win软件分析突变氨基酸的保守性,同时采用四个生物信息学评分软件(PolyPhen-2,PROVEAN,SIFT和MutationTaster)分析突变对蛋白质功能的影响。结果先证者及其弟弟APTT明显延长,分别为116.4 s和101.3 s;先证者父亲APTT略延长,为48.8 s,家系其他成员APTT无明显延长;先证者及其弟弟、父亲的FⅫ:C明显减低,分别为2.0%、2.0%和18.0%,FⅫ:Ag含量分别为1.0%、1.0%、和13.0%,表现为交叉反应物质(CRM)阴性。基因测序发现先证者及其弟弟的F12基因启动子区为46T/T型及14号外显子存在c.1681G〉A(p.Gly542Ser)纯合突变;先证者父亲、母亲及儿子均存在c.1681G〉A杂合突变,其中先证者父亲表现为46T/T型,其余二者均为46C/T型;先证者丈夫启动子区为C/C型,且无上述基因突变。ClustalX-2.1-win软件保守性分析结果表明,Gly542在同源物种间高度保守。四个生物信息学软件对该突变的预测结果一致:Polyphen-2评分(1.000分)、PROVEAN评分(-4.975分)均预示为有害突变;SIFT评分(0.00分)预示可影响蛋白质功能;Mutation Taster评分(0.999分)预示可引起相应疾病。结论c.1681G〉A(p.Gly542Ser)和46T/T与该遗传性FⅫ缺陷症家系FⅫ水平明显降低有关。(中华检验医学杂志,2018, 41:214-218) 展开更多
关键词 因子Ⅻ缺乏 系谱 纯合子 突变
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一个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系的表型与基因型分析
11
作者 戴利亚 许锴 +3 位作者 赵秘胜 苏看看 李君 王明山 《中国优生与遗传杂志》 2019年第3期284-286,共3页
目的对1个姨表近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行实验室表型和F12基因突变分析,探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员(共3代6人)血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、... 目的对1个姨表近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行实验室表型和F12基因突变分析,探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员(共3代6人)血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ:C)、FⅫ活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅪ:Ag)等指标,明确临床表型诊断。采用DNA直接测序法分析先证者F12基因所有外显子、侧翼、启动子区及家系成员相应的突变位点区域,并用反向测序证实所发现的突变。用ClustalX-2.1-win软件分析突变氨基酸的保守性;突变对蛋白质功能的影响则应用四个生物信息学评分软件(PolyPhen-2,PROVEAN,SIFT和MutationTaster)进行分析。结果先证者APTT(102.8s)、FⅫ:C(2%)和FⅪ:Ag(2%)明显异常;家系其他成员APTT正常,其姐姐、大女儿、二女儿和外孙的FⅫ:C和FⅫ:Ag均减低为正常对照的一半左右,表现为交叉反应物质(CRM)阴性型。基因测序发现先证者F12基因第13号外显子存在c.1556T>G纯合突变,导致p.Leu519Arg;其姐姐、大女儿、二女儿和外孙均存在c.1556T>G杂合突变。保守性分析结果显示Leu519在同源物种间呈高度保守;四个生物信息学软件对该突变预测的评分结果均显示为有害突变。结论F12基因13号外显子区p.Leu519Arg突变是导致该家系遗传性FⅫ缺陷症发病的原因;推测先证者纯合p.Leu519Arg突变基因分别遗传自近亲结婚的父母。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅻ缺陷症 遗传性 基因突变 生物信息学
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老年脑梗死患者COX非依赖性信号转导途径对血小板聚集率的影响
12
作者 叶玲丽 冯梅 +1 位作者 戴利亚 王耀光 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1341-1342,共2页
阿司匹林抵抗(AR)现象,与AR发生机制相关的环氧化酶1(COXl)及血小板糖蛋白(GP)的基因多态性研究较多,但COX非依赖性信号转导途径(包括跨膜蛋白受体、磷脂酶、钙离子释放、腺苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶、蛋白激酶c)弱激动剂(如... 阿司匹林抵抗(AR)现象,与AR发生机制相关的环氧化酶1(COXl)及血小板糖蛋白(GP)的基因多态性研究较多,但COX非依赖性信号转导途径(包括跨膜蛋白受体、磷脂酶、钙离子释放、腺苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶、蛋白激酶c)弱激动剂(如ADP、肾上腺素、胶原蛋白)血小板活化与老年脑梗死关系鲜见报道,本研究对急性脑梗死患者的Cox非依赖性信号转导途径弱激动血小板聚集率进行检测,探讨该途径在脑梗死发生中的作用。 展开更多
关键词 脑梗死 血小板聚集
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