大肠杆菌磺胺类抗生素耐药基因二重PCR技术的建立

为建立一种一次性检测多个磺胺类抗生素耐药基因的检测方法,用磺胺类抗生素耐药大肠杆菌作为受试生物,根据磺胺类抗生素耐药基因Sul1和dfrA1设计一对引物进行二重PCR检测。结果发现:本方法能有效检测出大肠杆菌Sul1和dfrA1两种磺胺类抗生素耐药基因,检出限为4.5 cfu/μL,对于Sul1和dfrA1两种磺胺类抗生素耐药基因具有较强的检出特异性。此方法对检测大肠杆菌磺胺类抗生素耐药基因提供了有力的技术支撑。

山区农畜血吸虫病流行病学及控制技术研究

【目的】按农畜血吸虫病不同山区疫区研究控制技术,为防治提供指导。【方法】将四川山区农畜血吸虫病疫区划分为以芦山县为代表的半封闭式疫区(Semi-closingepidemicdistrict)和以普格县为代表的封闭式疫区(Closingepidemicdistrict)两大类,并进行了流行病学及控制技术研究。【结果】此病牛是血吸虫病流行最主要的传染源,3～8岁的牛IPC较高,以牛粪为主的野粪是重要的传播因数,农畜之间以及与人之间的血吸虫病疫情呈显著正相关(r>r0.01,P<0.01)。在半封闭式疫区中,水牛作用大于黄牛,水牛RTI为67.8%,黄牛RTI为20.4%,牛以外的其它农畜在血吸虫病流行病学上不占重要地位。在封闭式疫区中,黄牛作用大于水牛,黄牛RTI为80.1%,水牛RTI为19.4%;马、羊、猪在血吸虫病流行病学中也不同程度地占有重要位置(马的感染率13.5%,羊为8.5%,猪为6.7%),狗在血吸虫病流行病学上的地位不可忽视。人既是传染源,又是所有传染源的控制者。所以,人在血吸虫病流行病学上占有特殊地位。【结论】明确了各农畜血吸虫病控制的适宜药物、剂量和方式,以秋末冬初查治优于传统的夏季查治。在半封闭式疫区,主要抓耕牛的查治。在封闭式疫区,所有农畜都须查治。并加强牛粪管理和道路边沟灭螺,反复查治是降低感染率的最有效措施。

不同山区疫区家畜血吸虫病流行病学及防制对策研究

对四川山区家畜血吸虫病两类不同疫区:以芦山为代表的半封闭式疫区和以普格为代表的封闭式疫区进行了流行病学及防制对策研究。结果表明,血吸虫病牛是此病流行最主要的传染源,3～8岁的牛潜在传播指数(IPC)较高,以牛粪为主的野粪是重要的传播因数,动物之间以及与人之间的血吸虫病疫情呈显著正相关(r>r0 01,P<0 01)。在半封闭式疫区中,水牛作用大于黄牛,水牛RTI(相对污染指数)为67 8%,黄牛RTI为20 4%,牛以外的其它家畜在血吸虫病流行病学上不占重要地位。在封闭式疫区中,黄牛作用大于水牛,黄牛RTI为80 1%,水牛RTI为19 4%;马、羊、猪在血吸虫病流行病学中也不同程度地占有重要位置(马的感染率13 5%,羊8 5%,猪6 7%),狗在血吸虫病流行病学上的地位不可忽视。人既是传染源,又是所有传染源的控制者。所以,人在血吸虫病流行病学上占有特殊地位。通过研究,明确了各种家畜血吸虫病控制的适宜药物、剂量和方式,以秋末冬初查治优于传统的夏季查治。在半封闭式疫区,主要抓耕牛的查治。在封闭式疫区,所有家畜都须查治。并加强牛粪管理和道路边沟灭螺,反复查治是降低感染率的最有效措施。

四川山区动物日本血吸虫病流行病学研究

对四川山区动物日本血吸虫病流行病学调查、分析和研究,揭示了各种动物在此病流行病学中的地位和作用。结果表明,病牛是此病流行的主要传染源,3～8岁的牛IPC较高。牛、人和狗的RTI分别是95.2％、4.6％和0.2％。牧区的马、羊、猪在血吸虫病流行病学上占有重要地位,野生动物如老鼠和非牧区的猪在此病流行病学上意义不大。以牛粪为主的野粪是此病流行的重要传播因素,动物之间以及与人之间的日本血吸虫病疫情呈显著的正相关(r>r0.01,P<0.01)。

凉山彝族山区日本血吸虫病流行因素及规律研究

对凉山彝族自治州普格县彝族山区的日本血吸血病流行因素及流行规律研究结果表明,牛是血吸虫病最主要的传染源,3～8岁的牛IPC较高;以牛粪为主的野粪是很重要的传播因素;田边水沟和道路边沟的螺情很严重(阳性螺占有螺面积的62%),是最危险的易感地带.31～40岁的人感染率较高.人和牛间的RTI分别是2.6%和97.4%.人粪中,一个可孵出血吸虫的卵到达钉螺孽生地的机率为0.401～0.620.

四川山区家畜血吸虫病疫区的划分及流行病学研究

本文研究结果表明,四川山区家畜日本血吸虫病流行严重,且呈回升趋势,牛是此病流行最主要的传染源,以牛粪为主的野粪是重要的传播因素。并首次根据四川山区家畜日本血吸虫病流行县的不同特点,划分为以芦山为代表的以人为主的半封闭式疫区和以普格为代表的以家畜为主的封闭式疫区两大类。对各种家畜在流行病学上的意义进行了研究。

养殖场绵羊寄生虫病的控制技术

采用粪便寄生虫虫卵检测和虫体鉴定方法调查四川凉山半细毛羊原种场及周围的羊寄生虫,主要有血矛线虫、奥斯特线虫、仰口线虫、夏伯特线虫、食道口线虫、毛首线虫、肺线虫、细颈线虫、片形吸虫、前后盘吸虫。根据凉山州半细毛羊原种场的主要寄生虫发育史、流行病学和中间宿主及该地的气候等制订寄生虫病的定期监测程序,即每年的2、5、8、11月各进行一次监测;根据该场主要寄生虫病疫情、绵羊的抵抗能力等制订进行预防性驱虫的参考标准,即15%羊的片形吸虫虫卵EPG值大于300时或20%羊的线虫虫卵EPG值大于1 000时进行驱虫;再根据“虫净灵”效果,制订驱虫效果考核参考指标,即口服药物后4 d线虫虫卵转阴率95%以上、20 d吸虫虫卵转阴率100%。从而建立起“定期监测、按需驱虫、及时评估”的控制技术,实施2年来的结果表明,该场绵羊的主要寄生虫病即片形吸虫病和线虫病的感染率分别下降了80.51%和27.80%。

四川省放牧地方黑猪的寄生虫病调查与分析

为提高放养地方黑猪寄生虫病防治效果,采用猪粪便中虫卵计数和刮屑镜检方法,对四川省9个区县13个种养结合模式放牧地方黑猪场的粪便和发酵处理肥料中寄生虫虫卵或卵囊进行了检测,并对地方黑猪进行体表寄生虫检查,同时采用现场观察和问卷方式调查寄生虫病流行因素。结果表明,四川省放牧地方黑猪的寄生虫种类主要有蛔虫、毛首线虫、其他线虫、球虫和疥螨;放牧黑猪的寄生虫病感染率和感染程度与驱虫药物的使用和活动场粪污清理频率有关。

恩拉霉素人工抗原合成工艺的优化

为制备恩拉霉素(Enramycin)抗体及建立恩拉霉素残留检测方法提供参考,采用L9(34)正交试验设计优化恩拉霉素-牛血清白蛋白人工免疫抗原(Er-BSA)的合成工艺条件,通过紫外光谱对合成效果进行鉴定。结果表明:最佳合成反应条件为反应物质量比(mBSA∶mER)为1∶1,反应溶剂比(VPBS∶V二氧六环)为2∶1,pH 6.7和反应温度28℃,其合成物的偶联率为25.70。反应物质量比和反应温度是影响反应的主要因素。

四川部分地区半舍饲肉羊消化道蠕虫感染调查

为掌握四川半舍饲肉羊消化道蠕虫病的感染情况,试验采用廖氏法对四川6个市州的13个半舍饲羊场共计289份新鲜羊粪,进行了寄生虫种类和感染程度鉴定,随后对19只粪检阳性羊进行蠕虫剖检和成虫内转录间隔区(ITS)基因序列扩增测序。结果表明,四川半舍饲肉羊消化道蠕虫感染阳性率为64.36%(186/289),每个养殖场至少感染2种消化道蠕虫,其中线虫感染率最高,达60.55%(175/289),其次为片形吸虫、同盘吸虫和绦虫,阳性率分别为15.22%(44/289)、14.88%(43/289)和2.08%(6/289);线虫、片形吸虫和同盘吸虫的平均每克粪便虫卵数(EPG)分别为1197(56~28187)、527(51~1407)和413(63~1291);四川半舍饲肉羊流行12种消化道蠕虫,即肝片形吸虫、大片形吸虫、鹿同盘吸虫、鹿列叶吸虫、捻转血矛线虫、羊夏伯特线虫、粗纹食道口线虫、羊毛首线虫、达氏背板线虫、普通奥斯特线虫、贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫。生产上需加大对此类寄生虫病尤其线虫病的防控。

四川省部分地区奶牛寄生虫病流行调查及与中国奶牛寄生虫名录的比较

在四川省成都市、眉山市、西昌市的12个奶牛场和5个奶牛养殖小区,采用临床调查、奶牛粪便检测等方法进行了奶牛寄生虫病流行调查。结果表明,螨虫病和前后盘吸虫病在各奶牛场和小区均有感染,比例为100%;片形吸虫病的虫卵阳性场有10个,比例为83.3%,牛群的感染范围为4.9%~10.53%,EPG值范围为78~123;线虫病的虫卵阳性场有11个,比例为91.7%,牛群的感染范围为5.3%~44.4%,EPG值范围为60~400;奶犊牛球虫病卵囊阳性场有12个,比例为100%,牛群的感染范围为12.3%~75.0%,OPG值为62~4 186。此次调查为进一步了解我国奶牛的寄生虫感染情况、收集和整理奶牛的寄生虫相关报告提供了颇有价值的参考。

恩拉霉素人工抗原的合成与鉴定

建立酶联免疫方法以检测食品中恩拉霉素的残留,采用戊二醛法,偶联半抗原恩拉霉素(Er)和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备人工免疫抗原和人工包被抗原,分别为Er-BSA和Er-OVA。经紫外光谱鉴定,在紫外270～280 nm波长处得到Er-BSA和Er-OVA特征性偶联吸收峰。试验结果表明人工合成的2个人工抗原均偶联成功。人工免疫抗原和人工包被抗原的偶联比均达到26∶1,为进一步制备抗血清和酶联检测方法的建立奠定了基础。

四川部分地区肉鸡球虫病调查与药物治疗试验

为调查四川地区肉鸡球虫病流行现状,并筛选抗肉鸡球虫的有效药物,我们开展了本试验。结果表明,四川地区肉鸡球虫病感染场阳性率达95.24%,流行的球虫种类为柔嫩艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫;妥曲珠利和磺胺氯吡嗪钠可溶性粉比复方磺胺氯吡嗪钠预混剂的短期驱虫效果更好,但复方磺胺氯吡嗪钠预混剂的药效维持时间比前两种药物更长。

猪蓝耳病与猪链球菌、副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

2017年10月份,四川省某规模化猪场育肥猪发生死亡,经临床诊断及实验室确诊为猪蓝耳病与副猪嗜血杆菌病、猪链球菌混合感染导致。发病猪群采用七清败毒散拌料、黄芪多糖饮水,肌注头孢噻呋钠,仔猪肌注倍健+倍康肽组合治疗,发病猪群很快得到有效控制。

捻转血矛线虫虫卵体外培养观察

为了解捻转血矛线虫虫卵在体外发育过程中的形态变化,对分离自绵羊和山羊的捻转血矛线虫成虫进行了短暂体外培养并获得纯种成熟虫卵,同时在室温16℃~29℃条件下的生理盐水中培养虫卵,并进行形态测量和胚胎发育观察。结果表明:捻转血矛线虫虫卵呈短椭圆形,浅灰或黄褐色,多数对称,少数不对称;虫卵长81.27 μm±5.59 μm,宽54.34 μm±6.63 μm,长宽比1.51±0.14。虫卵在体外发育依次经历桑葚期、蝌蚪期和幼虫期;培养至第6 d虫卵中幼虫开始逸出,9 d后幼虫全部逸出。分离自绵羊和山羊的捻转血矛线虫虫卵在体外发育至各阶段所需时间差异不大,但在长、宽和长宽比上差异显著,具有统计学意义。

硝硫氰醚、吡喹酮治疗猪血吸虫病研究

用人工感染定量日本血吸虫尾蚴方法,通过不同剂量的两批试验,获得硝硫氰醚微晶粉25毫克/千克一次灌服治疗猪血吸虫病,灭虫率和灭雌率分别达99.4%和99.7%,吡喹酮片剂30毫克/千克一次灌服,灭虫率83.5%,灭雌率达100%。由于硝硫氰醚价格低于吡喹酮,且剂量也小,故首选药物应是硝硫氰醚。结合生产实际(种母猪多在80千克以内)。建议以3个体重级别给药,体重10千克以下、60千克以下和80千克以下分别按40kg,60kg和81kg给药,硝硫氨醚分别为1.0克、1.2克和1.8克,吡喹酮分别为1.2克、1.8克和2.4克。

坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。