利用在线数据库分析乳腺癌中程序性死亡蛋白-1相关信号通路基因的临床意义

针对程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)的免疫疗法在乳腺癌中获得了显著成功。但是,并非所有患者都能从抗体治疗中受益。为了鉴定PD-1信号通路相关基因的表达及在乳腺癌中作为预后标志物的潜力,本文通过Oncomine、GTEx数据库和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库挖掘了PD-1信号通路相关基因的表达特征及预后作用,并且使用STRING数据库对其蛋白质-蛋白质相互作用网络进行了预测。结果显示,PD-1信号通路相关基因的表达在不同的癌症中表现出显著差异。在乳腺癌中,PD-1信号通路相关基因的表达水平显著高于正常组织,并且其表达情况与乳腺癌患者的分期及年龄无关。将乳腺癌患者按照PD-1和程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达的中位值分为高表达组与低表达组,高表达组显示出更好的总体生存率。此外,蛋白质-蛋白质相互作用网络预测结果显示,PD-1与非受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase non-receptor,PTPN)家族的表达高度相关。综上所述,本研究为开展新的基于PD-1的免疫疗法提供了理论支持。

基于TCGA与Oncomine数据库挖掘MKL-1基因在KIRC中的临床意义

[目的]阐明MKL-1基因在肾透明细胞癌中的表达情况与临床意义。[方法]从TCGA与Oncomine数据库中收集与MKL-1的表达相关的数据,对收集到的数据进行荟萃分析,同时使用Kaplan–Meier方法分析MKL-1的表达量与生存的相关性。[结果]从Oncemine数据库中共收集到154项与MKL-1有关的研究,分析表明在MKL-1在9种癌症中表达上升,且在肾透明细胞癌中的表达显著性上升(P<0.05)。进一步分析发现MKL-1与癌症患者的特征无显著性关系,但与预后成负相关性。最后通过蛋白质网络预测MKL-1相互作用的蛋白。[结论]基于不同数据库深度挖掘提示MKL-1基因在肾透明细胞癌中高表达,并与肾透明细胞癌的预后有显著相关性,有望被用作肾透明细胞癌的治疗的新靶点。

信号转导和转录活化因子3通过趋化因子CX3C配体1促进血管内皮细胞增殖迁移

信号转导和转录活化因子3 (STAT3)与趋化因子CX3C配体1 (Fractalkine/CX3CL1)在血管炎症和损伤中起重要作用,为了探讨STAT3是否通过CX3CL1促进血管内皮细胞增殖和迁移,在血管内皮细胞(HUVEC)中过表达或敲降STAT3,通过quantitative real-time PCR、Western blotting实验确定STAT3对CX3CL1表达的影响。构建含有STAT3结合位点及突变STAT3结合位点的CX3CL1启动子荧光素酶报告基因质粒,利用荧光素酶活性分析实验研究STAT3对CX3CL1启动子转录活性的作用。利用MTT实验检测过表达或敲降STAT3或CX3CL1对血管内皮细胞增殖率的影响。利用划痕实验检测过表达或敲降STAT3或CX3CL1对血管内皮细胞迁移率的影响。结果显示,过表达STAT3可以促进CX3CL1表达,敲降STAT3可以使CX3CL1表达下调。STAT3可以直接结合到CX3CL1的启动子促进其转录激活,其促进作用依赖于CX3CL1启动子上的GAS位点。敲降STAT3可以抑制血管内皮细胞的迁移,过表达CX3CL1拮抗该抑制作用。总结得出,STAT3通过结合到CXCL1启动子促进CX3CL1转录与表达进而促进血管内皮的增殖与迁移。

PKM2对乳腺癌细胞有氧糖酵解、增殖和凋亡的影响

[目的]探讨siRNA介导的PKM2基因沉默对乳腺癌细胞中有氧糖酵解、细胞增殖和凋亡产生的影响。[方法]荧光定量PCR检测乳腺癌细胞转染siRNA-PKM2的效率,葡萄糖和乳酸试剂盒及Western Blot检测细胞的糖酵解能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western Blot检测细胞的凋亡状况。[结果]与对照组相比,转染PKM2的siRNA 48h后,细胞摄取葡萄糖量及乳酸分泌量均明显降低(P<0.05),两种与糖酵解相关的蛋白Glut1和PFK-1表达量均降低;细胞增殖速率减慢(P<0.05);抗凋亡蛋白bcl-x L蛋白表达降低,促凋亡蛋白caspase-9蛋白表达增多。[结论]siRNA介导的PKM2基因沉默能抑制乳腺癌细胞的有氧糖酵解及增殖能力,并促进细胞凋亡。

MKL1靶向CAAP1促进胃癌细胞的自噬并抑制凋亡

[目的]探讨MKL1和CAAP1对胃癌细胞凋亡的影响及其分子机制。[方法]蛋白质印迹和实时荧光定量PCR检测MKL1、CAAP1过表达效果;蛋白质印迹、流式细胞术、自噬检测试剂盒检测细胞的自噬和凋亡情况;荧光素酶报告基因活性测定、染色质免疫共沉淀验证MKL1和CAAP1基因启动子的结合。[结果]在MGC80-3细胞中过量表达MKL1后,凋亡抑制蛋白CAAP1的mRNA和蛋白水平与对照组相比均上调(P <0. 05),自噬标记基因LC3BII表达升高(P <0. 05),促凋亡蛋白Caspase3表达降低(P <0. 05)。敲降MKL1,Caspase3蛋白表达升高(P <0. 05)。敲降CAAP1,Caspase3蛋白表达升高(P <0. 05)。过表达CAAP1拮抗敲降MKL1,LC3BII蛋白表达下降,Caspase3蛋白表达升高(P <0. 05)。荧光素酶活性分析以及染色质免疫共沉淀分析结果表明MKL1促进CAAP1基因的转录活性。[结论]MKL1可通过上调CAAP1的表达进而促进胃癌细胞的自噬并抑制细胞凋亡。

FOXP3通过靶向S100A6启动子促进肺腺癌细胞迁移

[目的]探讨FOXP3和S100A6对肺腺癌细胞迁移的影响及其分子机制。[方法]TCGA肿瘤数据库中查看FOXP3和S100A6在肺腺癌中的表达及与病人生存率的关系(P <0.01)。沉默S100A6和FOXP3后用Western Blot和实时荧光定量PCR检测FOXP3和S100A6的表达;伤口愈合实验和Transwell检测细胞的迁移情况;荧光素酶报告基因活性测定验证FOXP3和S100A6基因启动子的结合。[结果]FOXP3和S100A6在肺腺癌中表达增高,与肺腺癌病人的生存曲线成负相关。在A549细胞中沉默S100A6后,细胞迁移降低,迁移相关标志物CDH1的mRNA和蛋白水平与对照组相比上调(P <0.05),Snail2/MMP2/MMP9的mRNA和蛋白水平均下调(P <0.05)。在沉默FOXP3的肺癌细胞系中,细胞迁移降低,CDH1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P <0.05),Snail2/MMP2/MMP9的mRNA及蛋白表达均降低(P <0.05)。沉默FOXP3后,S100A6的mRNA和蛋白表达均降低(P <0.05)。荧光素酶报告基因活性分析结果表明FOXP3促进S100A6基因的转录活性。[结论]S100A6和FOXP3与肺腺癌病人预后相关,FOXP3可通过结合S100A6启动子从而上调S100A6的表达进而促进肺癌细胞的迁移,是肺腺癌治疗潜在的新靶点。

ERα-36和STAT3协同促进乳腺癌细胞的迁移

[目的]探讨ERα-36和STAT3通过MMP2和MMP9对乳腺癌细胞迁移的影响。[方法]使用Transwell实验检测ERα-36和STAT3对乳腺癌细胞迁移能力的影响,荧光定量PCR和Western Blot检测在乳腺癌细胞中过表达ERα-36和STAT3对MMP2和MMP9表达的影响,Luciferase实验检测ERα-36和STAT3对MMP2和MMP9启动子转录活性的影响。[结果]与对照组相比,过表达STAT3组的乳腺癌细胞迁移能力明显升高(P <0. 05),两种与迁移相关蛋白MMP2和MMP9表达量均升高(P <0. 05);过表达STAT3增强了乳腺癌细胞中MMP2和MMP9的转录活性,而ERα-36过表达对MMP2和MMP9的转录活性具有较弱的影响。但是共表达ERα-36和STAT3显著增强了MMP2和MMP9的转录活性与表达。[结论]ERα-36和STAT3协同结合到MMP2和MMP9的启动子上,促进它们的转录与表达进而促进乳腺癌细胞迁移。