高糖高脂及肝素结合蛋白对HK-2/中性粒细胞共培养体系的炎症作用

目的以人肾皮质近曲小管上皮(human kidney-2 cells,HK-2)细胞/中性粒细胞共培养体系为研究对象,探讨高糖高脂及肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)处理对共培养体系的炎症反应、氧化应激及细胞凋亡的影响。方法从正常人外周血中分离获得中性粒细胞,HK-2细胞与中性粒细胞悬液均以1×10^(5)/mL的浓度混匀建立共培养细胞体系。通过CCK-8试验确定脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和肝素钠(heparin sodium,Hep)的处理浓度,分别通过免疫荧光干式定量法、邻苯三酚自氧化法、基于细胞测量珠阵列技术及检测表达Annexin V-FITC荧光的流式细胞术分别检测HBP浓度、氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量、炎性细胞因子[白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL6和IL-8]浓度及细胞凋亡百分率。结果CCK-8试验确定LPS和Hep的处理浓度分别为10μg/mL和50μmol/L;高糖高脂处理的HBP(4.11±0.07)、SOD(2.67±0.06)、IL-1β(11.28±0.35)、IL-6(2.57±0.10)、IL-8(1.32±0.05)及细胞凋亡发生率(1.08±0.04)相对值均较正常对照组明显增加;LPS处理(刺激HBP的产生)可使HBP(7.09±0.08)、SOD(3.07±0.14)、IL1β(22.96±0.49)、IL-6(2.79±0.11)、IL-8(1.55±0.07)及细胞凋亡发生率(1.17±0.05)相对值升高;通过Hep处理(降低HBP的产生)可使由LPS引起的HBP(5.43±0.09)、SOD(2.76±0.07)、IL-1β(16.51±0.56)、IL-6(2.64±0.16)、IL-8(1.47±0.06)及细胞凋亡发生率(1.13±0.05)相对值降低。结论高糖高脂状态及HBP均可影响肾小管上皮细胞的功能,其机制可能与促进氧化应激和炎症反应有关。