生长抑素与乙肝表面抗原真核表达载体构建及其对Vc獭兔生长的影响

人工合成生长抑素(Somatostatin,SS)基因,与乙肝表面抗原基因融合,插入pMD-18T克隆载体,经序列分析证明,所得目的基因743bp,与设计一致。提取质粒后用Sma和Nhe双酶切,克隆入pIRES1neo-CMV表达载体,构建pIRES-HBsAg/SS质粒。用乳酸-乙醇酸共聚物包裹后,在Vc獭兔后肢进行肌肉注射,比较与注射生理盐水的对照组的增重差异,结果发现60d后,试验组家兔累积增重比盐水组高61.02%(P<0.01)。

PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响

将HBsAg与Somatostatin（SS）融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV，构建了pIRESlneo—HBsAg／SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg／SSM质粒，用Poly D，L—lactide co—glycolicacid（PLGA）微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15～30d，质粒注射组日增重较对照组高106．8％（P〈0．01）；30d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29．2％（P〈0．05）；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。

Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响及其作用机制

目的:观察Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响并探讨其作用机制。方法:30只Wistar大鼠制备高脂大鼠模型,随机分为药物组、高脂组及正常对照组。药物组大鼠尾静脉注射Sak衍生体进行干预,剂量为0.5mg·kg-1,隔天注射,共15次;其他两组大鼠注射生理盐水作为对照,在给药前和最后一次给药24h后采血,检测各组大鼠的血小板黏附率和二磷酸腺苷二钠(ADP)诱导的血小板聚集率;采用放免法检测血小板中钙调蛋白(CaM)含量以及ADP诱导的血小板聚集时血栓素(TXA2)的释放量。结果:与高脂组大鼠比较,药物组高脂大鼠血小板黏附功能及ADP诱导的血小板聚集率明显降低(分别是63.5%±6.71%与44.7%±8.13%,P<0.05;91.56%±9.01%与81.22%±3.45%,P<0.05),血小板中CaM含量与TXA2的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Sak衍生体通过对引起血小板活化途径的干预,抑制血小板的黏附及聚集。

医学院校研究生细胞培养课教学探索

细胞培养技术是医学专业研究生从事基础医学研究过程中必备的一项基本研究技术。因此,有针对性地开展细胞培养技术教学课程,为医学专业研究生在基础学习阶段掌握细胞培养的实验能力及课题的顺利开展奠定了坚实的基础。该文结合科研实践和相关的教学资料,对医学专业硕士研究生进行了细胞培养技术的相关理论与操作技术的教学,使学生具备了初步进行细胞培养的实验能力,并培养了其科研思维,实现从学生到科研工作人员的启蒙培养。

CMV与SP双启动子增强外源基因在小鼠骨骼肌中的表达效率

构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生长激素释放因子(GRF)表达载体(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射后1周、2周、3周以及4周时,分别提取肌肉组织RNA,应用半定量RT-PCR检测报告基因(EGFP)的表达量,发现pCMV-SP-EGFP组EGFP表达量显著高于pCMV-EGFP组和pSP-EGFP组(P<0.01);经荧光检测得到了较强的荧光信号.将3种GRF表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌,在注射后每隔10d记录小鼠累积增重,采血并用RIA法测定血清胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)浓度,结果pCMV-SP-GRF组累积增重、IGF-I浓度分别高于生理盐水组、pCMV-GRF组和pSP-GRF组(P<0.05).结果表明:CMV与SP两种启动子组合,在小鼠骨骼肌内使外源基因表达效率提高.本研究为提高外源基因在肌肉组织的表达提供了新的途径.

微球包裹pcDNA3-GRF(1-32)在小鼠肌肉组织的表达及对生长的影响

以乳酸 乙醇酸共聚物为载体 ,采用复乳 液中蒸发法制备载生长激素释放因子 (Growthhormonereleasingfactor,GRF)真核表达质粒pcDNA3 GRF(1 32 )微球 ,其中包封率达 6 9% ,平均粒径为 2 2 0 μm ,载药量 80 μg mg ,收率70 % ;体内转染小鼠肌肉组织 ,提取注射部位肌肉组织DNA和总RNA ,经PCR和RT PCR ,发现注射pcDNA3 GRF(1 32 )微球组的GRF表达水平最高 (UVIBANDVersion 99分析 ) ,释放的GRF表达质粒在小鼠肌肉内存在并表达的时间至少 30d。体重统计结果表明 ,30d后微球包裹质粒组累积增重与其它组相比差异极显著 (P <0 0 1 ) ,比裸质粒组、质粒和空白微球混合物组、生理盐水组分别高 1 2 87% ,1 9 72 % ,5 8 5 8% ;结论认为 ,载pcDNA3 GRF(1 32 )微球具有缓释作用 ,并可实现GRF基因体内局部基因转染、表达 ,发挥其相应的生物学效应 。

马鹿茸不同部位IGF-1含量的比较分析

采用醋酸溶液和乙醇提取了6支马鹿茸的主杠尖部、中部、根部3个部位的多肽,进行了IGF-1的SDS-PAGE和Western blot分析,采用RIA法测定了马鹿茸酸粗提物及醇提多肽的IGF-1含量。结果表明,酸粗提物中IGF-1存在游离和与结合蛋白结合两种形式,醇提物中只存在分子量为7.5 ku的游离IGF-1。马鹿茸不同部位酸粗提物和醇提物之间IGF-1含量经RIA法检测表明,主杠尖部、中部、根部3个部位IGF-1含量差异显著,其中尖部IGF-1含量分别比中部和根部高43.10%(P<0.01)、284.83%(P<0.01),中部比根部高168.93%(P<0.01);经醇提后,各部位之间IGF-1含量差异显著,其中尖部IGF-1含量分别比中部和根部高42.33%(P<0.05)、164.04%(P<0.01),中部比根部高85.51%(P<0.05)。该试验为马鹿茸的分段利用提供了内在质量上的依据。

生长激素释放肽 - 6缓释微球的制备及其对动物生长的影响

以生物降解材料乳酸乙醇酸共聚物 (PL GA,L A- GA 85∶ 1 5 )为载体 ,采用复乳 -液中蒸发法制备含生长激素释放肽 - 6的乳酸乙醇酸共聚物微球 ,并通过体外药物释放试验评价载药微球的释药特征。结果得到收率、粒径大小和分布及含药量均满意的微球 ,其中包封率为 1 0 0 %,平均体积径为 3 .4 5μm ,收率为 79%。在 3 7℃、p H 7.0的生理等渗缓冲液中 ,首日释药 1 9.1 9%,其后以平均日释药 3 .2 3 %的速度释药 2 5 d。小鼠肌肉注射微球 3 0 d后 ,累积增重比注射生长激素释放肽 - 6、生理盐水分别高 2 2 .5 6 %(P<0 .0 5 )和 5 3 .1 7%(P<0 .0 1 )。结果表明 ,生长激素释放肽 -

共表达生长激素释放激素(GHRH)与垂体腺苷酸环化酶(PACAP)对动物生长的影响(英文)

生长激素释放激素(GHRH)与垂体腺苷酸环化酶(PACAP)在序列及功能方面均相似,且同为PACAP/胰高血糖素超家族成员.研究了这二者对生长激素释放的刺激作用,以及对动物生长的影响.构建了3个表达载体,pIRES1-GHRH-PACAP(P-G-P),pIRES1-GHRH(P-G)及pIRES1-PACAP(P-P),并转染到CHO细胞中,进行RT-PCR,Dot-ELISA以及Westen-blot检测.此外,给大鼠注射细胞上清表达产物,检测其生物学活性.注射8h后,注射表达P-G-P上清的大鼠血清中IGF-Ⅰ浓度显著高于其他组(P<0.05).用PLGA微球包裹各种质粒,并注射到家兔后肢胫前肌.观察家兔生长情况,并于注射后0,15,30,45天时分别采集家兔血液,检测血液中IGF-Ⅰ浓度.结果显示,三质粒注射组动物体重变化及血液中IGF-Ⅰ浓度均高于对照组.注射后30天时,P-G-P组增重较对照组提高81%(P<0.01),P-G组比对照组提高15%(P>0.05),P-P组比对照组高7%(P>0.05).另一方面,P-G-P组动物血液中IGF-Ⅰ含量比分别比P-G、P-P及对照组提高16.68%(P>0.05),17.14%(P>0.05),50.46%(P<0.05).以上结果揭示:给动物注射PLGA微球包裹的共表达GHRH与PACAP质粒,可以增强动物体内生长激素(GH)的分泌,并促进动物生长.通过上述研究发现,肌肉注射PACAP表达质粒可以促进家兔的生长,PACAP和GHRH共表达可以起到协同作用.这可能为动物的促生长研究提供新的方法.

生长调控因子与GHRP-6微球的制备及对水貂生长的影响

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体,利用复乳-液中蒸发法制备pcDNA3-GRF微球、pIRES-HBs/AgSSM微球和GHRP-6微球。将空微球、pcDNA3-GRF微球(1 mg/kg),pIRES-HBs/AgSSM微球(1 mg/kg)和GHRP-6微球(1mg/kg)分别肌肉注射至水貂骨骼肌。120 d后,3个试验组水貂体长均高于空微球组(P<0.01);采用RIA法测定各组水貂血清IGF-Ⅰ浓度,3个试验组水貂血清IGF-Ⅰ浓度均比空微球组高,但pcDNA3-GRF微球组血清IGF-I浓度显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:pcDNA3-GRF乳酸乙醇酸共聚物微球有明显的促水貂生长作用。

生长激素释放因子和垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的共表达

通过PCR扩增化学合成了PACAP和GRF基因。构建了PACAP、GRF单基因和PACAP-GRF双基因真核表达载体;通过脂质体介导3种真核表达载体在CHO细胞均有表达,RT-PCR、Dot-blot、Western-blot结果阳性,通过检测证明表达产物具有生物学活性;以PLGA为载体,采用复乳-液中蒸发法将3种重组质粒制备成微球,通过肌肉注射给小鼠和獭兔,实验结果表明实验组累积增重与生理盐水组比差异极显著(P<0.01),双基因组增重效果优于单基因组;双基因组对IGF-1促分泌作用也高于单基因组。首次证明了PACAP和GRF双基因共表达,对动物的促生长具有协同作用。

GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达

目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。

番茄红素解除PM2.5暴露内皮细胞的氧化损伤

目的探讨番茄红素对PM2.5暴露内皮细胞氧化损伤的分子机制。方法利用CCK-8明确番茄红素减轻PM2.5暴露内皮细胞损伤的最适宜浓度;检测细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,评估番茄红素解除PM2.5对内皮细胞氧化损伤的作用;Western印迹检测细胞内缺氧诱导因子(HIF)-1α表达;q-PCR、ELISA检测细胞白介素(IL)-6表达水平。结果解除因PM2.5暴露造成氧化损伤的最佳番茄红素浓度为80μg/ml;番茄红素作用使PM2.5暴露内皮细胞氧化应激指标SOD活性升高48.04%,MDA含量下降38.89%,IL-6、HIF-1α恢复到正常细胞水平。结论番茄红素具有解除PM2.5暴露内皮细胞氧化损伤的作用。

初步探索高校实验室公共科研平台的建设

随着我国对科研投入的稳步提升,全国各大高校实验室的科研仪器数量也日益增多,各地高校积极推进公共实验平台的建设。科研实验平台是高校开展科研工作重要的基础条件。高校实验室公共科研平台建设的目的是整合高校优势实验资源,完善资源共享服务机制,进而更好地服务于教学和科研工作。努力建成布局合理,多层次和高水平的开放式实验室体系,充分提高仪器的使用效率,以促进高校教学和科研的发展。拥有先进仪器和管理理念的公共科研平台,已成为高校培养创新人才的保障和支持,因此有必要建设多层次的公共科研平台。

穿心莲内酯抑制肿瘤细胞分泌物诱导的血管新生

目的:探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成管能力的影响。方法:将不同体积浓度的Andro溶液作用于HUVECs,采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞存活率。采用半数致死量(IC50)的Andro溶液作用于HUVECs,采用Matrigel胶使HUVECs成管,通过计算成管率来评估Andro溶液对HUVECs成管能力的影响。此外,将A549细胞分泌物与Andro溶液同时处理HUVECs,检测其成管情况。采用Western印迹检测Andro溶液对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达水平的影响。结果:Andro溶液可抑制HUVECs的增殖,且呈浓度依赖性;Andro溶液对HUVECs的IC50为20μmol/L。选取20μmol/L的Andro溶液作用于HUVECs 24 h,发现Andro溶液显著抑制HUVECs的成管能力。另外,A549细胞分泌物促进HUVECs成管作用,而Andro溶液拮抗肿瘤细胞分泌物对HUVECs成管的促进作用,降低MMP-9的表达。结论:Andro能够抑制HUVECs成管,而且能够拮抗肿瘤细胞分泌物对HUVECs成管的促进作用,从而抑制血管新生。

细胞及分子医学虚拟仿真实验教学建设的探索

细胞及分子医学实验教学是培养医学生实践能力和创新思维的重要途径,但因时间、空间、资源和危险性等因素的限制,不能很好地开展。将虚拟仿真技术应用于细胞及分子医学实验教学,能够突破这些因素的限制,促进实验教学的发展。依托国家级虚拟仿真实验教学中心平台,广州医科大学生物学实验中心在细胞及分子医学虚拟仿真实验教学建设中进行了探索并取得良好的成效,现从虚拟仿真实验教学意义、教学理念与建设原则、教学资源、教学特色以及管理体系五方面进行总结,旨在促进虚拟仿真实验教学的发展。

研究型教学模式在生物技术综合实验的探索与实践

生物技术综合实验是培养创新型生物卓越人才的重要课程,目前传统教学模式存在知识片面、缺乏前沿知识融合、评价单一的局限,亟需进行教学模式的改革。我校生物技术综合实验课程进行了研究型教学模式的探索与实践,建立“教师引导,小组自主讨论、设计、准备、实施、分析和总结课题,思政教育融入课堂”的教学活动,形成“自主设计,虚实结合,引入前沿,多元评价,思政融合”为特色的教师制研究型教学模式,取得了良好的教学效果,可满足创新型人才培养需求,促进生物技术教学改革发展。

医学院校生物技术综合大实验教学改革分析

生物技术综合大实验是生物技术专业的一门重要课程。该文就当前高校开设本课程的情况从经费投入、师资力量、教学大纲、实验设计、教学手段、考核方式等方面分析了存在的一些问题,并结合该校教学改革实践工作,总结了一些改革经验。

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成及pIRES1-PACAP表达载体的构建

根据文献报道的垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)基因序列和信号肽基因序列 ,设计 10条单链寡核苷酸片段 ,通过 5次 PCR扩增获得 PACAP基因片段 ,同时两端设有 Sm a 和 Xba 酶切位点 ,酶切后将其克隆至 p IRES1- neo质粒中 ,经 PCR、酶切和测序鉴定 ,证明已获得 PACAP基因并构建了 p IRES1-

生物技术专业生物化学与分子生物学教学改革探究

生物化学与分子生物学是我院生物技术专业重要的基础课程,新时期我国高等教育教学的发展,以及生物医药对人才需求的逐年上升和素质要求的升级,该课程原有的教学内容和手段严重滞后,教学效果不尽如人意。因此在我院新的生物技术专业人才培养方案确定之际,我们将对该课程进行改革,从教学内容、教学方法等方面进行探索,提高教学水平,改善教学效果以适应当前教育教学改革的发展,提升本专业学生的专业素质。