反义抑制Survivin表达增强肝癌细胞系对阿霉素的敏感性

背景与目的:由于Survivin在大多数肿瘤细胞中过表达,而在正常成人终末分化组织中沉默,并参与了恶性肿瘤的发生、发展和化疗耐药,使其成为值得关注的抗癌治疗靶。反义寡核苷酸可用来封闭凋亡抑制基因Survivin,诱导肿瘤细胞凋亡或增强其化疗敏感性。本研究旨在探讨反义抑制Survivin表达对肝癌细胞系阿霉素敏感性的影响。方法:RT鄄PCR、Westernblot检测HepG2和HepG2/ADM细胞Survivin表达;MTT法评估HepG2和HepG2/ADM对反义复合物和阿霉素的敏感性;不同浓度的反义复合物分别转染HepG2和HepG2/ADM细胞,RT鄄PCR检测SurvivinmRNA表达;等辐射分析法评估不同浓度反义复合物和亚致死浓度阿霉素对HepG2和HepG2/ADM细胞的协同效应;流式细胞术检测激活型Caspase鄄3表达及凋亡率。结果:HepG2/ADM细胞SurvivinmRNA是HepG2细胞的15倍,蛋白水平是HepG2的18倍。两种细胞均显示对反义复合物敏感并呈浓度依赖关系,反义复合物对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为317.90nmol/L和480.74nmol/L,在500nmol/L时抑制率达到71.10%和53.67%。ADM对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为0.36μg/ml和2.12μg/ml,耐药指数为6。反义复合物剂量依赖性下调HepG2和HepG2/ADM细胞SurvivinmRNA表达,对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为271.93nmol/和365.72nmol/L,400nmol/L时表达水平分别下调了69.12%和60.01%。反义复合物和低浓度ADM联合使HepG2细胞的敏感性增加了6倍,使HepG2/ADM细胞的敏感性增加了4倍。联合处理激活了HepG2/ADM细胞Caspase鄄3活性,诱导细胞凋亡,激活型Caspase鄄3和凋亡率随反义复合物浓度的增加而逐渐递增。结论:反义抑制Survivin表达增强肝癌细胞系对阿霉素的敏感性,反义寡核苷酸和阿霉素联合可能是耐阿霉素肝细胞癌临床治疗的一种合理策略。

Survivin-值得关注的抗癌治疗靶

肿瘤发生发展的研究虽然进入了复杂和多样的癌基因蛋白网络时代,但这些基因的功能效应最终汇聚到一个共同的环节一细胞增生失控和凋亡受阻Survivin是近年来发现的抗凋亡分子,参与了上述过程,常过表达于肿瘤组织中.因此,Survivin信号通路的开发和利用有助于肿瘤的早期诊断及判断预后,同时为肿瘤生物学治疗提供新的靶位.

肝癌复发转移再切除治疗的疗效分析(附30例报告)

目的 :评价再手术在肝癌复发治疗中的地位。方法 :回顾分析 1 988年～ 1 999年 30例肝癌复发再手术切除的随访资料。结果 :首次手术后 1、2、3和 5年总生存率分别为 93 .3 %、73 .3 %、56 .7%和 36.7%。第一次再手术后 1、3和 5年生存率分别为 63 .3 %、2 3 .3 %和 1 3 .3 %。肺叶切除后 1、3和 5年生存率分别为 71 .4%、42 .9%和 2 8.6 %。结论 :肝癌复发病人再手术后的预后与复发时肿瘤大小、数目、类型相关 。

LC+LCBDE和ERCP/EST+LC在胆囊合并胆总管结石中应用的随机对照研究

目的对比腹腔镜胆囊切除术(LC)联合腹腔镜胆总管切开胆道镜探查取石术(LCBDE)、内镜逆行胰胆管造影/内镜下十二指肠乳头括约肌切开取石术(ERCP/EST)联合LC两种联合术式在胆囊合并胆总管结石治疗中的疗效差异,分析术式优越性。方法前瞻性分析上海交通大学医学院附属仁济医院胆胰外科2014年7月至2016年3月间114例胆囊合并胆总管结石患者临床资料,按随机数字表法分为LC+LCBDE组以及ERCP/EST+LC组。对比两组手术成功率、手术时间、术中出血、住院时间和费用、术后胃肠道生活质量指数(GIQLI)和患者手术耐受性,以及术后早期及中远期并发症发生率。结果 LC+LCBDE组与ERCP/EST+LC组比较,手术成功率差异无统计学意义(96.5%vs 92.9%,P>0.05);并发症方面,LC+LCBDE组残石率,胰腺炎、胆管炎、腹胀发生率均低于ERCP/EST+LC组,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,LC+LCBDE组在住院费用、耗材费用、术后GIQLI生存质量和患者手术耐受性方面均优于ERCP/EST+LC组,差异有统计学意义(P<0.05);但在住院时间、胆漏发生率方面,ERCP/EST+LC组优于LC+LCBDE组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LC+LCBDE术式在胆囊合并胆总管结石的治疗中与ERCP/EST+LC术式手术成功率相近,但LC+LCBDE术式具有创伤小、并发症低、费用少、患者耐受性好、术后生存质量高等优点,可作为首选术式。

卡培他滨在Ⅲ期结直肠癌一线化疗后维持治疗的临床分析

目的评估卡培他滨在Ⅲ期结直肠癌一线化疗后维持治疗的有效性及安全性。方法回顾性分析213例Ⅲ期结直肠癌术后患者的临床及随访资料。以上患者术后接受8周期奥沙利铂联合卡培他滨（XELOX）方案化疗，然后分组：A组（n=76）维持组，B组（n=137）非维持组。比较两组3年无瘤生存率（DFS）、5年总生存率（OS）以及A组维持化疗前后临床不良反应发生率。结果中位随访时间45月。A组3年DFS为62．0％，B组为51．3％（HR=0．6168，95％CI：0．4173—0．9118，P=0．0305），差异有统计学意义。A组5年OS为70．2％，B组为54．5％（HR=0．6502，95％CI：0．4150～1．1090，P=0．0498），差异有统计学意义。A组维持化疗前后的不良反应多数是Ⅰ／Ⅱ级，严重Ⅲ／Ⅳ级不良反应少见。A组和B组两组之间的Ⅰ／Ⅱ级和Ⅲ／Ⅳ级不良反应发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论结直肠癌一线化疗后加单药卡培他滨维持治疗可显著延长患者3年DFS和5年OS，且耐受良好。

贞芪扶正胶囊联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性胆管炎对甲状腺功能的影响

目的观察贞芪扶正胶囊联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)的疗效,及其对甲状腺功能的影响。方法在我院诊治的PBC患者70例,随机将患者分为观察组和对照组,每组各35例。对照组予以熊去氧胆酸治疗,观察组在对照组的基础上予以贞芪扶正胶囊治疗。比较两组治疗后的疗效,观察两组治疗前后丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、总甲状腺素(TT4)和游离甲状腺素(FT4)水平的变化。结果观察组的总有效率为97.14%,对照组的总有效率为77.14%(P<0.05)。两组治疗后血清ALT、AST、TBIL、ALP、HA、TIMP-1、LN和PCⅢ水平均较治疗前明显降低(P<0.01),两组血清TT3、FT3、TT4和FT4水平均较治疗前明显升高(P<0.01),而观察组的降低或者升高水平与对照组比较更加明显(P<0.01)。结论贞芪扶正胶囊联合熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性胆管炎的疗效显著,能够改善机体的纤维化,缓解甲状腺功能低下。

疏血通联合乌司他丁治疗高脂血症性胰腺炎对肠道激素和脂肪因子的影响

目的:观察疏血通联合乌司他丁治疗高脂血症性胰腺炎的疗效,及其对肠道激素和脂肪因子的影响。方法:选择2017年1月至2019年12月在我院诊治的高脂血症性胰腺炎患者70例,按照随机数字法将患者分为观察组和对照组,每组各35例。对照组予以乌司他丁治疗,观察组在对照组的基础上予以疏血通注射液治疗。比较两组患者治疗后的疗效和临床指标,观察两组患者治疗前后甘油三酯(TG),急性生理及慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、Balthazar CT评分、胃动素(MTL)、肠抑胃肽(GIP)、血管活性肠肽(VIP)、瘦素、网膜素-1和内脂素水平的变化。结果:观察组的总有效率为97.14%,对照组的总有效率为77.14%,观察组的疗效明显优于对照组(χ^2=4.590,P<0.05)。观察组患者的腹痛缓解时间、肠鸣音恢复时间、肛门排气恢复时间、恢复进食时间、淀粉酶恢复时间和住院时间短于对照组(P<0.01)。两组患者治疗前TG、APACHEⅡ评分、Balthazar CT评分、MTL、GIP、VIP、瘦素、网膜素-1和内脂素水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者TG、APACHEⅡ评分、Balthazar CT评分、GIP、VIP、网膜素-1和内脂素水平均较治疗前降低(P<0.01),MTL和瘦素水平较治疗前升高(P<0.01),而观察组患者以上指标的降低或者升高较对照组更为明显(P<0.01)。结论:疏血通联合乌司他丁治疗高脂血症性胰腺炎疗效显著,有助于胃肠功能恢复、提高疗效,其机理可能与脂肪因子水平变化相关。

血清CA199,NLR和PLR水平在急性胆管炎肾功能损害中的诊断价值

目的观察血清糖类抗原(CA)199,中性粒细胞计数/淋巴细胞计数(NLR)和血小板计数/淋巴细胞计数(PLR)水平在急性胆管炎肾功能损害中的诊断价值。方法选择2017年1月至2019年12月在我院收住的胆总管结石患者140例,根据是否合并急性胆管炎分为非胆管炎45例(胆总管结石组)和急性胆管炎95例(急性胆管炎组)。选择同期在我院健康体检者45例为健康对照组。比较3组血清CA199,NLR和PLR水平变化,及其与急性胆管炎严重程度和肾功能损伤的关系,和预测肾功能损害方面的灵敏度和特异性。结果急性胆管炎组血清CA199,NLR和PLR水平明显高于胆总管结石组和健康对照组(P<0.01),而胆总管结石组明显高于健康对照组(P<0.01)。急性胆管炎患者CA199,NLR和PLR水平随着急性胆管炎严重程度的加重而出现明显升高(P<0.01)。急性胆管炎患者肾功能异常组的血清CA199、NLR和PLR水平明显高于肾功能正常组(P<0.01)。急性胆管炎患者血清CA199、NLR和PLR在诊断肾功能损伤方面具有较高的灵敏度和特异性,联合CA199、NLR和PLR检测的灵敏度为90.0%,特异性为93.8%,曲线下面积(AUC)为0.933,明显优于CA199(Z=3.322,P<0.01)、NLR(Z=3.042,P<0.01)和PLR(Z=2.301,P<0.05)单个指标检测的AUC,而各个指标在预测肾功能损害方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清CA199,NLR和PLR水平与急性胆管炎严重程度和肾损害相关,在预测急性胆管炎肾功能损害方面具有较高的灵敏度和特异性。

靶向抑制survivin对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响

目的 探讨反义survivin 脂质体复合物对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响及机制 ,为胰腺癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法 用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胰腺癌细胞系PANC 1细胞 ;通过RT PCR、Western印迹试验检测survivin表达水平 ;MTT法测量细胞生长情况 ;流式细胞术测定caspase 3活性及凋亡率 ;电镜观察细胞形态学变化 ;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物在亚细胞水平对survivin蛋白分子的影响。结果 反义survivin脂质体复合物有效下调survivin表达水平 ,并呈剂量依赖关系 ,IC50 值为 30 0nmol/L ,最大效应浓度为5 0 0nmol/L ,此时表达水平下调了 80 %。类似细胞生长抑制结果为MTT实验所证实。与此同时 ,caspase 3活性和凋亡率随转染时间延长而逐渐递增 ,并出现凋亡形态学变化 ,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。免疫荧光分析 ,标记有FITC 绿荧光染色的survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见 ,并呈“斑点”状分布 ;而在转染细胞中几乎没有发现 ,但是符合细胞凋亡的形态学特征。结论 靶向抑制联系细胞增殖和凋亡的关键分子

腹腔镜胆道探查临床应用分析(附340例报告)

目的 评价腹腔镜胆道探查的优越性。方法 前瞻性设计 ,将诊断为胆总管结石或合并胆囊结石的病人分成四组 :腹腔镜下胆总管切开取石 (一期缝合 )组 ;腹腔镜下胆总管切开取石 (置T管 )组 ;传统开腹胆总管一期缝合组 ;传统开腹置T管组。对于手术效果进行统计分析。结果 四组胆漏发生率分别为 5 0 %、3 3%、5 0 %、3 8% ,术后肠道恢复平均时间分别为 2 1d、2 6d、3 3d、3 5d。结论 腹腔镜胆总管结石胆道探查术具有并发症率低、住院时间短、痛苦少、恢复快等优点 ,是一种安全、有效的好方法。

反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响

目的探讨反义survivin-脂质体复合物(survivin-ASODN)对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Westernblot检测survivin表达水平;以MTT法测量细胞生长情况;以流式细胞术测定caspase-3活性及凋亡率,电镜观察细胞形态学变化,并应用流式细胞仪同步分析survivin-ASODN对肝癌细胞系HepG2增殖周期的影响。结果surviving-ASODN可有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,其IC50值为250nmol/L,最大效应浓度为600nmol/L;可抑制细胞生长,激活caspase-3活性,诱导细胞凋亡,使其出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。细胞周期的同步分析显示,surviving-ASODN对HepG2细胞增殖周期有明显影响,HepG2先出现细胞周期阻滞,紧接着出现细胞凋亡;低浓度处理后,可将细胞先后阻滞在S期和G2/M期;高浓度时,S期阻滞被加强,可快速诱导细胞凋亡,并且,细胞凋亡率随着药物浓度的增加和作用时间的延长明显上升。结论surviving-ASODN对肝癌细胞有强的生长抑制效应,其机制是与阻断细胞周期及诱导细胞凋亡有关。

胆道再手术原因和对策

目的探讨胆道再手术原因及对策。方法回顾分析我院1999年1月至2002年12月间共行了胆道手术2 881例,其中因各种原因行胆道再手术260例;并对其首次手术方式,再次手术方式和再次手术原因进行了详细分析。结果109例行胆总管切开取石,其中33例同时行肝叶切除;32例行胆总管空肠Roux-Y吻合术;94例行胆道镜取石术;2例行胰十二指肠切除术;残余胆囊再切除1例;22例分别行引流、止血或修补术。再手术原因早期主要以胆漏(7.3%)、腹腔内出血(1.2%)为主。晚期主要以结石残留或复发(76.9%),胆管良性狭窄(11.5%)为主。结论胆道再手术主要原因是处理胆道手术并发症。为降低胆道再手术率应强调术前全面分析诊断、术中审慎操作,并结合胆道镜、B超及胆道造影等检查行根治性手术,术后加强抗感染预防炎性狭窄。

野生型survivin表达的上调促进胃癌对多西他赛的耐药性

目的研究胃癌组织survivin基因各转录变异体表达情况及其与胃癌化疗药物抗药性的关系。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,对39例胃恶性肿瘤患者肿瘤标本中的survivin转录变异体进行定量检测。采用组织培养肿瘤药敏实验(HDRA)技术,检测胃癌组织对多种化疗药物的敏感性,并且分析该敏感性与survivin转录变异体表达的关系。结果在39例胃癌组织标本中,survivin的表达率100%(39/39),survivin2B的表达率795%(31/39),survivin△Ex3的表达率667%(26/39)。胃癌标本对顺铂、丝裂霉素、5氟尿嘧啶、多西他赛(TXT,商品名泰索帝)和双氟脱氧胞苷在体外实验中的敏感率分别是368%(14/38)、312%(10/32)、231%(9/39)、205%(8/39)和125%(4/32)。泰索帝耐药组中患者野生型survivin的表达水平显著高于泰索帝敏感组(P=0021)。结论研究结果提示野生型survivin的表达促进了胃癌患者对泰索帝的抗药性。

再切除在肝癌复发治疗中的作用和地位

目的 探讨再切除在肝癌术后复发治疗中的价值。方法 回顾性分析 1988～ 1999年30例肝癌复发再手术切除的随访资料。结果 对 30例肝癌术后复发病人共行 33例次手术 ,首次手术后 1,2 ,3,5年总生存率分别为 93 3,73 3,5 6 7,36 7%。第一次再手术后 1,3,5年生存率分别为6 3 3,2 3 3,13 3%。肺转移切除后 1,3,5年生存率分别为 71 4 ,4 2 9,2 8 6 %。结论 肝癌术后复发行再切除能显著提高病人远期生存率 ,是目前肝癌术后复发的首选治疗方案。

肝移植治疗急性肝功能衰竭的临床疗效分析

目的评价急性肝功能衰竭肝移植患者的近期及远期生存情况和分析影响移植疗效的相关因素。方法回顾性分析2001年1月至2004年12月在我院连续施行的318例肝移植资料(随访至2005年12月),根据 UNOS 肝功能分级标准,对受体的术前状态进行评估,其中包括54例急性肝功能衰竭(UNOS1和2A)和264例慢性肝病肝硬化(UNOS2B 和3),并统计了术后并发症的发生率、再移植率、再移植原因和死亡原因。结果术前肝功能状态为 UNOS2B 和3的移植组,围手术期死亡率为3.7%,术后并发症发生率为16.7%,再移植率1.1%,其1、3年生存率分别为91.3%和86.4%。术前肝功能状态为 UNOS1和2A 的肝移植组,围手术期死亡率为22.6%,术后并发症发生率为55.6%,再移植率18.5%,其1、3年生存率分别为74.1%和68.5%。结论肝移植效果主要取决于肝外器官功能和术前肝功能状态,术前肝功能状态为 UNOS2B 和3的慢性肝病肝硬化患者肝移植后近期和远期疗效较好,而术前肝功能状态为 UNOS1和2A 的急性肝功能衰竭患者则围手术期死亡率较高。

Survivin转录变异体在胃癌组织中的表达及其与预后的关系

目的研究survivin各转录变异体在胃癌组织中的表达情况及与其预后的关系。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,对77例胃恶性肿瘤患者的肿瘤组织、正常胃黏膜的成对标本进行mRNA定量检测。结果在检测患者肿瘤组织中野生型survivin、survivin-2B与survivin-△Ex3的表达量均显著高于其对应正常胃黏膜组织中的表达量(P<0.01)。在胃癌组织中,survivin的表达率为100%(77/77),survivin-2B的表达率为79.8%(61/77),survivin-△Ex3的表达率为64.9%(50/77)。survivin高表达组患者的生存率明显低于低表达组(P<0.01)。结论Survivin的3个转录变异体中,野生型survivin对胃癌患者预后具有重要的评估价值。

免疫磁珠与荧光定量逆转录聚合酶链反应在胃癌患者外周血癌细胞检测中的应用价值

目的研究免疫磁珠和荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测胃癌患者外周血癌细胞的应用价值。方法将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份。其中1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞。然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RTPCR检测其相对拷贝数;并检测45例胃癌、30例胃溃疡患者和30名健康人外周血CEAmRNA。结果方法Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ测得的CEAmRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和ⅢP<005;方法ⅣP<001),尤以Ⅳ方法为佳,可检测出每毫升血中含有的1个胃癌细胞。Ⅰ～Ⅳ方法检测胃癌患者阳性率分别为4222%、5333%、5111%和6444%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<005)。用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性;30名健康人中4种方法均未检出扩增产物。结论免疫磁珠与荧光定量RTPCR法可提高胃癌患者外周血CEAmRNA的检出率。

生存素转录变异体在胃癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的 研究生存素各转录变异体表达及其与胃癌细胞增殖和凋亡的关系。方法 采用实时荧光定量RT PCR技术 ,对 77例胃恶性肿瘤患者的肿瘤组织和正常胃黏膜的成对冰冻标本进行mRNA定量检测。对相同病例的石蜡标本 ,采用DNA缺口原位末端标记 (TUNEL)技术检测肿瘤细胞凋亡 ,免疫组化 (Ki 6 7)检测细胞增殖。结果 与患者正常胃黏膜比较 ,肿瘤组中 3个转录变异体表达水平显著上调 (P <0 .0 0 0 1)。野生型生存素在胃癌中的表达率为 10 0 .0 % (77/77) ,生存素 2B表达率是 79.2 % (6 1/77) ,并且高表达组为早期胃癌 (P =0 .0 0 1)、分化型胃癌 (P =0 .0 0 7)以及浸润浅的胃癌组织 (P =0 .0 31) ;生存素△Ex3在胃癌中的表达率为 6 4 .9% (5 0 /77) ,并且高表达组的凋亡指数显著降低(P =0 .0 19,r =0 .2 6 7)。本实验未发现生存素的 3个转录变异体表达水平与肿瘤细胞增殖指数相关。结论 生存素 2B的表达与肿瘤的分期、分化和肿瘤浸润深度相关 ,表明生存素 2B可能是野生型生存素和生存素 △Ex3的天然拮抗物 ;同时还发现生存素 △Ex3在胃癌组织中的表达与凋亡指数负相关。