人骨髓间充质干细胞的分离培养、多向分化与鉴定

目的探索一个高效分离和扩增人骨髓间充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定。方法抽取人胸椎骨髓标本,联合利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR。在地塞米松、左旋VitC、β-磷酸甘油、FK506作用下向成骨细胞诱导分化;在TGF-beta3、重组人胰岛素、丙酮酸钠、亚硒酸等作用下向软骨细胞诱导分化;在地塞米松、IBMX、吲哚美辛的作用下向脂肪细胞诱导分化;在VEGF、bFGF作用下向血管内皮细胞分化。结果原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好。细胞表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性。经定向诱导分化后,细胞分别呈现成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的表型特征。结论该方法能从人骨髓中高效分离和扩增MSCs,能成功定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞。

人骨髓间充质干细胞结合多孔β-TCP构建生物相容性人工骨

研究人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)结合多孔β磷酸三钙(β-TCP)的生物相容性与体内成骨作用。密度梯度离心结合差异贴壁法分离HBMSCs,常规扩增传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR;分别在成骨、成软骨和成脂肪细胞培养基中定向诱导分化,验证其多向分化能力。将HBMSCs在低压下载入多孔β-TCP立方块,形成MSCs/β-TCP复合物,电镜观察材料内部与细胞结合情况。继续成骨诱导培养2周后植入裸鼠背部皮下,于植入4周和8周后取出复合物做组织学检查。设非成骨诱导培养复合物为对照。原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好;流式细胞仪检测间充质细胞来源表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,造血细胞来源表面标记物CD34、CD45和HLA-DR阴性;能成功高效定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞;细胞在β-TCP材料表面贴附、增殖良好;MSCs/β-TCP复合物植入皮下4周后即有少量新骨生成,至8周时更明显;对照组新骨生成量较少。本方法快速、高效分离扩增HBMSCs;HRMSCs与多孔可降解β-TCP材料生物相容性良好;二者结合能显著提高体内新骨生成,提示其可用于临床作为骨移植替代物,可提高骨移植修复骨缺损的疗效。

连续股神经阻滞联合帕瑞昔布用于全膝置换术后镇痛的效果评价

背景:术后镇痛是全膝关节置换术(TKA)后处理的重要组成,直接影响术后功能恢复,有利于患者早期活动,积极康复锻炼,并降低并发症发生率。多模式联合镇痛方法是目前术后镇痛研究的热点。目的:评估TKA后采用连续股神经阻滞(CFNB)联合帕瑞昔布的镇痛效果和安全性。方法:2006年9月至2011年12月行初次单侧TKA治疗骨关节炎患者80例,随机分为2组,各40例。联合镇痛组,术后使用CFNB联合帕瑞昔布镇痛模式;连续硬膜外镇痛(CEA)组,术后使用硬膜外自控镇痛泵。术后12、24、48 h采用目测类比疼痛评分法(VAS)分别对患膝静息和活动时进行疼痛评分,记录各组术后4、6、8、10 d的膝关节活动范围(ROM);监测副作用如恶心、呕吐、尿潴留、导管相关问题等。结果:80例患者全部获得随访。两组术后12、24、48 h的静息和活动时的VAS评分比较无统计学差异;两组术后4、6、8、10 d 的患膝 ROM 比较无统计学差异;A 组术后尿潴留、恶心、呕吐的发生率均低于 B 组(P<0.05);两组导管相关并发症发生率无统计学差异(P>0.05)。结论:CFNB联合帕瑞昔布镇痛能有效减轻全膝关节置换术后的疼痛,镇痛效果与CEA相当,副作用少,利于早期功能锻炼。

新型乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)/胶原复合材料用于软骨再生的体外研究

目的设计和制备新型乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]/胶原(collagen)复合材料,研究其在体外对软骨再生的促进作用,为软骨组织工程提供新型支架材料。方法利用冷冻干燥技术将胶原多孔海绵复合于PLGA编织网膜;扫描电镜观察材料表面微观结构,利用图像软件统计孔径大小;分离与培养牛膝关节软骨细胞(bovine articular chondrocyte,BAC),接种于PLGA/胶原材料,检测细胞接种效率,扫描电镜观察细胞在材料内部生长情况;体外培养1周后检测DNA和糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,real-time PCR检测I型胶原、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA表达强度。牛膝关节软骨组织和体外单层培养的BACs做对照。结果成功构建新型PLGA/胶原复合材料,表面孔径为(136.4±11.8)μm;细胞接种效率为87.8%±1.6%;BACs在材料表面和中心生长活跃,培养1周后的DNA、GAG含量,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达强度均显著高于对照组(P<0.05)。结论新设计制备的PLGA/胶原复合材料能促进体外软骨再生,可作为支架材料用于软骨组织工程研究。

海带废水及其处理工艺的初步研究

对加工海带时产生的废水水质进行了分析 ,对废水处理工艺进行了初步试验研究。结果表明 ,加工海带时正常排放废水的主要污染物是悬浮物 (SS) ,COD含量也超过了排放标准 ,采用人工悬浮层工艺处理海带废水的效果较好 ,过滤后的水质基本可以满足排放标准。

甲基强的松龙在腰椎后路椎体间融合手术后的应用

目的:探讨甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)在腰椎后路椎体间融合(posterior lumbar internal fixation,PLIF)手术后应用的价值。方法:50例患者,其中19例腰椎滑脱,26例腰椎管狭窄,5例腰椎间盘突出。随机分成对照组(地塞米松组)及试验组(MP组),各25例。MP组患者在术后1h内给予MP160mg/d静脉滴注,连用3d后减量至80mg1d、40mg1d后停用,共用药5d;地塞米松(DXM)组术后1h内给予DXM10mg/d静脉滴注,持续3d后减量至5mg应用1d后停用,共4d。在术前1d,术后1d、10d、3个月,根据美国脊髓损伤协会运动、感觉评分标准评分。结果:MP组在术后1d、10d的感觉、运动评分高于DXM组,差异有显著性(术后10d感觉及术后1d运动P<0.05,术后1d感觉及术后10d运动P<0.01),3个月后差异消失(P>0.05)。结论:在腰椎PLIF手术后早期应用小剂量甲基强的松龙,能预防手术导致的脊髓和神经损伤,其效果优于地塞米松。

骨组织工程研究进展

组织工程学是应用生命科学和工程学的原理及技术,构建、培育活组织,研制生物替代物,以修复或重建组织器官的结构,维持或改善功能的一门新兴学科。目前组织工程学研究的主要问题是:①种子细胞的体内、体外培养;②支架材料的研究与开发;③种子细胞与基质材料相互作用的调控等。骨创伤、肿瘤和炎症等导致的骨缺损是目前骨科临床的常见病和难治病,惟一的方法是通过骨移植进行修复。利用骨组织工程培养的人工骨不仅可修复大面积的骨缺损,而且可按需塑形及大量制备,是一种理想的创伤修复及功能重建的材料。

脉冲次数和卵龄对小鼠卵母细胞电活化效果的影响

以一定电场条件、不同次数的电脉冲刺激注射ＨＣＧ后不同时间（１５、１７、１９、２１和２３ｈ）小鼠卵母细胞，研究了不同电场条件下脉冲次数和卵龄对卵母细胞活化效果的影响。结果如下：（１）对注射ＨＣＧ后１７和１９ｈ卵母细胞的研究表明，在一定电场条件（如场强１．２ｋＶ／ｃｍ，持续时间８０μｓ）下，增加脉冲次数可提高卵母细胞活化率，这在注射ＨＣＧ后１７ｈ卵母细胞更为明显（１次脉冲活化率２６．５％，４次脉冲活化率６０％）。（２）１次脉冲刺激活化率较高的电场条件（场强１．２ｋＶ／ｃｍ，持续３２０μｓ），增加脉冲次数因死亡率上升而导致活化率下降（在注ＨＣＧ１９ｈ卵母细胞，１次脉冲活化率为６４．７％，３次脉冲为５０％）。（３）卵母细胞活化率随卵龄增加而升高（注ＨＣＧ后１５ｈ２６．７％，２１ｈ８３．７％），但活化卵体外发育率则随卵龄增加而下降。（４）体内和体外老化至注ＨＣＧ后１９ｈ卵母细胞的电活化率差异不显著。

放射性核素骨显像评估血管化组织工程骨修复兔长段骨缺损

目的:研究间充质干细胞(MSCs)和其诱导内皮细胞(ECs)联合种植于多孔β-TCP构筑血管化组织工程骨修复兔长段骨缺损的作用及放射性核素骨显像(ECT)在此过程中的监测效果。方法:制备兔双侧尺骨1.5 cm骨缺损共48侧,分4组修复(每组12侧),A血管化组织工程骨组(MSCs+ECs+β-TCP),B组织工程骨组(MSCs+β-TCP),C单纯材料组(β-TCP),D空白组。术后4、8、12周行ECT、组织切片等检查,观察各组骨缺损修复效能及移植物血管化情况。结果:D组骨缺损未修复,A组骨缺损修复效能及血管化情况优于B组,而B组又优于C组,各结果有显著差异(P<0.05)。结论:MSCs和其诱导ECs共培养构筑的血管化组织工程骨能促进成骨过程和新生骨的血管化,显著提高组织工程骨修复长段骨缺损的能力,ECT在修复过程中有较准确预测效果。

中国自然资源使用权制度比较研究

80年代中后期,通过颁行自然资源行政法而创设的一系列自然资源使用权,为中国经济的繁荣发挥了重要作用。但是,随着市场经济体制的逐步建立,由自然资源行政法所设立的这些使用权的不完善性日渐明显。该文介绍了物权的经济学和法学概念以及物权理论的经济学分析工具,阐述了推进物权制度建设经济学意义,对比分析了现行自然资源使用权制度的主要问题:农民民生权利与国家所有权的私益性之间的矛盾、普通法与特别法之间的失调、水权和野生动物驯养繁殖权概念的严重残缺、权利登记的公信力等。作者认为,制定物权法和修订自然资源法应当遵从物权法定的基本学理,权利的基本属性应当由全国人大或者其常务委员会立法明确,各级地方立法机关、国务院各部委以及各级地方政府不应当对权利的基本属性做出规定,并且考虑到现阶段农村与城市之间的巨大差距依然存在,国家所有权的私益性应当让位于农民的民生权利,停止以国家所有权为理论依据向农用地使用者收取使用费或使用金。

预处理方法对等离子体喷涂氧化钛涂层装载庆大霉素的影响研究

目的本文研究不同预处理方法对等离子体喷涂氧化钛涂层表面庆大霉素的装载量及缓释性能的影响。方法采用大气等离子体喷涂设备在钛合金上制备氧化钛涂层,采用酸碱等化学处理手段预处理涂层,然后在涂层表面嫁接固定庆大霉素,光学显微镜观察胶原在涂层表面的分布情况,采用邻苯二甲醛方法检测释放液中含有的庆大霉素量。结果经1M硫酸或10M氢氧化钠处理后,涂层表面抗菌药物装载量、稳定性皆有明显提高。庆大霉素的胶原溶液比其水溶液更利于其在氧化钛涂层表面的装载。结论酸或者碱处理皆能明显提高涂层表面抗菌药物的装载量及稳定性。这是由于预处理后形成的Ti-OH与胶原形成分子中存在的-COOH、-NH2、-OH等官能团反应,从而将胶原固定在涂层表面所致。

小干扰RNA抑制人端粒酶逆转录酶基因对恶性转化后骨髓间充质干细胞的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)表达对恶性转化后骨髓间充质干细胞(transformed mesenchymal stem cells,TMCs)增殖和在动物体内成瘤能力的影响。方法:构建针对hTERT的siRNA,通过脂质体转染的方法将hTERT-siRNA转染TMCs。实验组为3个浓度组,分别为50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L,设阴性对照组和空白对照组。用噻唑蓝(MTT)法检测siRNA对TMCs生长增殖的影响。用Westernblot法检测各浓度组TMCs端粒酶的含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各浓度组hTERT mRNA含量,并用TRAP-ELISA法检测各浓度组TMCs端粒酶的活性。用BALA/C裸鼠体内实验检测siRNA转染后各组TMCs在动物体内成瘤能力的变化。结果:通过Western blot,发现不同浓度的hTERT-siRNA组TMCs的端粒酶蛋白含量逐渐减少,与siRNA的浓度呈负相关。50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L组分别下降了46.2%、69.5%、91.5%;MTT法检测3个浓度组hTERT-siRNA对细胞的生长抑制率分别为2.74%、7.26%、10.23%。其中50nmol/L组和对照组之间差异无统计学意义,而100nmol/L组和200nmol/L组与阴性对照组之间差异有统计学意义。RT-PCR检测结果显示50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L hTERT-siRNA转染组hTERT基因分别下降了19.2%、47.2%、86.4%。端粒重复序列扩增(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA)法检查发现,不同浓度的hTERT-siRNA对TMCs的端粒酶活性都产生抑制作用,3组分别下降了11.0%、42.9%、86.2%。100nmol/L组和对照组TMCs在裸鼠皮下形成肿瘤的时间相似,分别为14.8d、14.2d;200nmol/L组成瘤时间较晚,为17.3d。对照组形成的皮下肿瘤体积和质量分别为2.56cm3、1.30g;而100nmol/L和200nmol/L组肿瘤体积分别为0.64cm3、0.31cm3,质量分别为0.78g、0.58g,与对照组间相比差异有统计学意义。结论:siRNA可以下调hTERT基因的表达,减少TMCs细胞内端粒酶的含量,也降低了端粒酶的活性,从而增加了TMCs的凋亡、抑制了TMCs的生长,并降低了TMCs在裸鼠体内的成瘤能力。端粒酶在MSCs恶性转化的过程中可能起了重要的作用。

钢管RPC短柱轴心受压试验研究

本文通过 1 8根钢管 RPC短柱轴心受压试验研究 ,分析钢管 RPC短柱受力性能 。

脉冲场强和波形对小鼠卵母细胞电活化效果的影响

实验以一定持续时间与不同场强搭配的一次电脉冲对注射ｈＣＧ后１７和１９ｈ的小鼠卵母细胞进行电刺激，研究脉冲场强和波形对印母细胞活化效果的影响．结果说明：（１）在一定持续时间下，只有当场强增至一定值时才获得较高活化率（ｈＣＧ后１７ｈ卵，４０％～５５％左右；ｈＣＧ后１ｇｈ卵，４２％～７０％左右）；（２）在某一持续时间，获得较高活化率的场强不止一个，而是有一定范围；低于这一范围的场强因刺激强度不够至使许多卵母细胞不能活化，高于这一范围的场强则因刺激强度过大造成卵大量死亡而使活化率下降；（３）随脉冲持续时间倍减，获较高活化率的场强约以０．２ｋＶ／ｃｍ的强度递增；（４）与注ｈＣＧ后１７ｈ卵相比，ｈＣＧ后１９ｈ卵获较高活化率的场强范围更宽；（５）在同等条件下，不规则波形脉冲的卵活化率、碎裂率和死亡率都明显高于方波脉冲．

关于BT模式若干问题的探讨及对PPP项目实施的借鉴

鉴于近期各级政府部门大力推进PPP项目,根据BT项目实施过程遇到的一些问题所总结经验,为防范PPP项目实施过程中可能产生的一些失误,本文提出一些认识和实例分析供参考。

克氏针交叉内固定治疗肱骨髁上骨折的疗效分析

目的:分析采用克氏针交叉内固定治疗肱骨髁上骨折的疗效。方法:采用克氏针交叉内固定治疗42例肱骨髁上骨折患者。结果:对42例患者随访5～36个月,平均(12.16±5.31)个月。采用MaZur评分标准评定疗效,优28例,良11例,可2例,差1例;优良率为92.9%。结论:对肱骨髁上骨折采用克氏针交叉内固定治疗后,复位理想,固定牢固;患者经过早期功能锻炼,能获得优良疗效。

预应力梁锚下有效预应力的快速检测方法研究

针对反向张拉检测法不能通过整束预应力检测直接得到该束内单根预应力筋的张拉力,造成检测效率较低的问题,在现有反向张拉检测法的基础上进行预应力梁锚下有效预应力的快速检测方法研究。新方法将整束预应力反向张拉过程中其内单根预应力筋受力状态划分为夹紧和松动2种工作状态,单根的松动表现为整束预应力刚度的变化,利用整束预应力的张拉荷载∽位移曲线,直接推导该束内各单根预应力筋张拉力的关系式,据此计算锚下有效预应力。工程实例应用结果表明,该方法能够通过整束预应力检测直接得到该束内单根预应力筋的张拉力,在保持检测精度的前提下有效加快预应力筋检测效率。

预制梁预应力欠张拉状态下补张拉方法研究

在预应力张拉施工中,受施工多种条件欠缺的影响,必然会出现检测得到的预应力筋张拉荷载小于设计要求,此时有必要改善该束预应力筋的工作状态,进行必要的补张拉,使得有效预应力值满足设计要求。本文通过对预制梁预应力在欠张拉状态下进行补张拉公式推导,并结合工程实例进行验证,对未来预应力施工具有借鉴价值。

预制梁施工过程中预应力张拉控制力取值研究

本文介绍预应力锚圈口摩阻损失和孔道摩阻损失的测试方法,根据试验梁实际测定的锚圈口摩阻力和孔道摩阻系数μ,达到补偿预应力摩阻损失和适当提高预应力的控制张拉力,提高有效预应力的精度。

修复关节囊及外旋肌群对预防全髋关节置换术后关节脱位的作用

目的探讨采用髋关节后外侧切口进行初次全髋关节置换术（THA）时修复关节囊及外旋肌的作用。方法2002年1月至2006年6月，初次采用后外侧切口行THA116例122髋，术中保留后方关节囊及外旋肌群，并且分别将其用疝缝线“8”字直接缝合至股骨大转子（修复组）。将修复组THA术后脱位率与同期常规行THA（未修复关节囊及外旋肌，对照组）的255例266髋THA做比较分析。结果术后6个月内，修复组仅1髋（1／122，0．8％）发生术后早期脱位；对照组则有15髋发生早期脱位（15／266，5．6％），早期脱位率差异有统计学意义（r=4．914，P=0．027）；两组术后6个月均无再脱位。结论采用后外侧切口进行THA时修复关节囊及外旋肌群技术能够有效预防术后早期脱位。