共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的表达及其免疫病理意义

观察共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的动态表达并分析叶酸肾病的免疫病理的可能机制。以小鼠叶酸性肾病为研究对象,采用免疫组织化学方法检测肾脏组织中CD40/CD40L、B7-1/CD28和4-1BB等共刺激分子的表达,免疫荧光标记和流式细胞术分析脾脏T淋巴细胞及其亚群,并行肾功能等常规检测。实验结果表明,病变先后涉及两个时期即急性期和慢性期。在早期,小鼠免疫应答增强,肾脏组织呈现CD40、B7-1、4-1BB的异常表达,CD28、CD40L在浸润淋巴细胞中表达,同时伴有炎症细胞浸润,表现为急性肾功能衰竭;在晚期,表现为慢性肾功能衰竭。同时肾脏组织呈现共刺激分子的异常表达和脾脏T淋巴细胞数量明显下降。这些均表明共刺激分子在小鼠叶酸性肾病不同阶段的发生发展中起着重要的作用。

共刺激分子在免疫性肾病中的作用机制及其信号干预在肾病治疗中的意义

肾病的发生发展都与免疫分子密切相关 ,因此共刺激分子及其信号调节在其中的作用及其作用机制的探讨具有理论意义和临床应用价值。

人源化SCID小鼠模型的建立及其鉴定

目的:探讨在SCID小鼠体内移植人免疫细胞,建立人源化SCID小鼠模型及其特性鉴定。方法:SCID小鼠腹腔注射环磷酰胺(CTX)抑制骨髓造血,连续4天后,通过腹腔注射移植人外周血单个核细胞(PBMC)。4、8和12周后分别取小鼠外周血、脾脏、肝脏。荧光显微镜下观察SCID小鼠外周血中人CD3+、CD19+细胞;流式细胞仪测定全血中人CD3+、CD19+细胞百分率;免疫组织化学分析SCID小鼠肝脏和脾脏中人CD3+、CD19+细胞;ELISA检测SCID小鼠血清中人免疫球蛋白含量。结果:(1)SCID小鼠移植人外周血单个核细胞4、8和12周后在小鼠外周血中通过荧光显微镜下可观察到人CD3+、CD19+细胞,4周后流式细胞仪测得小鼠外周血单个核细胞中人CD19+、CD3+细胞百分率分别为10·6%、31·7%;(2)免疫组织化学结果显示在小鼠脾脏中存在人CD3+、CD19+细胞;(3)移植人外周血单个核细胞4、8和12周后ELISA测得小鼠血清中人免疫球蛋白的含量分别为390、1100和1040μg/ml。结论:成功地在SCID小鼠体内建立了人免疫系统。

桥本甲状腺炎甲状腺组织中共刺激分子的表达

目的:探讨共刺激分子在桥本甲状腺炎(HT)发病中的免疫病理作用。方法:采用免疫组织化学法检测20例HT和20例甲状腺瘤旁正常组织(对照组)CD40/CD40L、B7-1/CD28、GL50、CD4和CD8分子的表达,进行分析。结果:(1)HT甲状腺滤泡细胞(TFC)B7-1表达明显高于对照组,CD40表达明显低于对照组,且有显著性差异(P<0.01);(2)HT组织浸润细胞CD28、GL50、CD4和CD8表达明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.01),但CD40L表达无显著性差异(P>0.05)。结论:CD40/CD40L、B7/CD28、GL50等共刺激分子表达异常以及局部CD4+和CD8+/T淋巴细胞浸润异常可能与HT甲状腺滤泡细胞破坏和功能减退有关。

哈萨克羊骨骼肌差异表达基因的筛选及功能分析

骨骼肌是家畜重要的器官,直接影响家畜的产肉量和品质。骨骼肌的生长取决于胎儿期纤维的数量和成年期的肥大程度,因此,研究骨骼肌胎儿期发育时的调控基因有助于改善家畜的生产性能。利用RNA-seq技术分析胎儿期和成年期哈萨克羊骨骼肌的转录组数据,筛选出2692个差异表达基因。对差异表达的基因使用GO和KEGG富集分析发现,被显著富集的包括细胞周期、钙信号通路、cGMP-PKG信号通路、p53信号通路、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路等在调控骨骼肌生长发育中发挥重要功能的信号通路。且本研究筛选了5个与肌肉发育相关的候选基因:POSTN、MYL4、ARHGAP36、BCAT1和FBN2。不仅为绵羊的分子选育提供科学依据,并且为肌肉生长机制的深入研究、提高绵羊生产性能打下良好基础。

马盲肠纤维素降解厌氧菌的分离与鉴定

试验旨在从马盲肠中分离出能够降解纤维素的厌氧细菌并对其进行鉴定。试验以采集的新疆伊犁马盲肠内容物为样品,在厌氧条件下使用CMC-Na初筛培养基进行菌株分离纯化,刚果红染色筛选出能够降解纤维素的细菌,测定复筛后菌株的酶活力,并进行16S rDNA测序分析,构建系统发育树。结果显示,从马盲肠内容物中共筛选出12株具有纤维素降解能力的厌氧细菌,经16S测序鉴定分别为敏捷乳杆菌(Lactobacillus agilis)、海氏肠球菌(Enterococcus hirae)、雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、摩根氏菌(Morganella morganii)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis),其中敏捷乳杆菌(F2-A4)的纤维素酶活力最高为14.841 U/mL。研究表明,试验筛选出的厌氧菌株有望为饲料微生物添加剂的开发及应用提供候选菌的菌种资源。

CD40/CD40L和B7-1/CD28在小鼠叶酸性肾病中的作用

目的研究CD40/CD40L、B7-1/CD28在肾小管间质浸润的免疫活性细胞、损伤的肾组织固有细胞上的表达以及其可能的作用。方法一次性腹腔注射叶酸制作CD1小鼠叶酸性肾病模型,在第1、2、3、7、14、21天分别处死动物,取其右肾进行免疫组织化学染色;取左肾提取蛋白进行蛋白印迹分析;采血检测BUN、Scr。以抗B7-1功能性单克隆抗体(B7-1mAb)联合叶酸应用,观察21d后,采血行BUN、Scr检测,病理图像分析肾病变区域及保护率。结果小鼠在给予叶酸后第1天,CD40、B7-1在肾小管上皮表达上调,并持续至第21天。通过蛋白印迹半定量检测,CD40在各时间点实验组肾组织表达量均增加5倍以上(P均<0.01),在间质区域浸润的免疫活性细胞上可见CD28和CD40L的表达。经B7-1mAb干预性治疗,小鼠死亡率从47.83%下降到11.01%,P<0.01;BUN、Scr水平明显降低;肾组织保护率从7.45%上升至66.51%。结论在小鼠叶酸性肾病中,肾组织CD40/CD40L和B7-1/CD28的表达上调并参与了肾小管上皮细胞损伤、免疫活性细胞浸润和肾小管间质纤维化的过程。B7-1mAb干预治疗能减轻上述的肾损害,为肾间质纤维化的特异性免疫治疗提供新的途径。

靶向肠道M细胞的PEDV COE基因的蛋白表达与纯化

为构建靶向肠道微折叠细胞(microfold cell, M细胞)的猪病毒性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)COE基因的原核表达载体并表达重组蛋白,用于后续将PEDV抗原靶向M细胞引发黏膜免疫应答来制备亚单位疫苗奠定基础。将M细胞靶向肽Col基因插入至PEDV COE基因的C端,设计引物扩增COE和COE-Col基因序列,并构建原核表达载体pET-32a(+)-COE和pET-32a(+)-COE-Col。将其转化到大肠杆菌TransB(DE3)中进行IPTG诱导和SDS-PAGE验证蛋白表达后,使用HisTrapFF Crude亲和层析柱纯化并浓缩。结果表明,成功克隆了PEDV COE和插入靶向肽Col的COE-Col基因并分别构建了原核表达载体,转化TransB(DE3)诱导后表达成功,纯化后在约35 kDa(COE)和37 kDa(COE-Col)均得到单一的蛋白条带,复性浓缩后质量浓度提高,为后续利用M细胞激发的黏膜免疫治疗PEDV及其他疾病提供方向和奠定理论基础。