未折叠蛋白反应在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究进展

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)下的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)可调节脂质代谢,与非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的进展有极大的相关性。当肝细胞在受到某些刺激,如缺氧或氧化应激时,会发生ERS,启动UPR以恢复细胞稳态。ERS又有急性ERS和慢性持续性ERS两种形式,急性ERS所触发的UPR是维持细胞稳态的重要反应机制,而慢性持续性ERS会启动细胞的凋亡程序,诱导细胞凋亡,与NAFLD的发生发展密切相关,其可能是NAFLD进程中的关键因素。本文回顾了NAFLD进展与UPR的联系,从脂质代谢、自噬角度讨论了UPR与NAFLD的关系,以期进一步深入了解NAFLD的发病机制,为NAFLD的预防和治疗提供指导。

某院2006—2008年临床主要病原菌分布及耐药性变迁

目的分析某院2006-2008年临床主要病原菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性变迁。方法常规分离、培养并鉴定细菌,采用纸片扩散法对细菌进行药敏试验。结果共分离病原菌3 499株,其中革兰阳性(G^+)菌844株(24.12%),革兰阴性(G^-)菌2 655株(75.88%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为60.29%(208/345);肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍然高度敏感,大肠埃希菌和克雷伯菌属中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)株检出率分别为45.23%(403/891)和38.92%(130/334);铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率较高,分别为41.06%和34.52%,不动杆菌属细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率相对较低,分别为15.52%和31.90%。结论该院临床分离的病原菌中,MRSA与产ESBLs菌检出率较高;加强细菌耐药性监测有助于临床医生合理选择抗菌药物,防止耐药菌株的流行与传播。

瘦素对多柔比星诱导人肝癌细胞凋亡影响的实验研究

目的观察瘦素对多柔比星诱导人肝癌细胞株Huh7凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法用多柔比星作为凋亡诱导剂预处理细胞3h后,在培养液中加入浓度为100ng/mL的瘦素,24h后提取细胞DNA电泳检测DNA ladder,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果瘦素能够抑制多柔比星诱导的人肝癌细胞凋亡。与对照组相比,瘦素处理组的DNA ladder条带明显减弱,Hochest33258荧光染色也发现瘦素处理组的凋亡细胞明显减少,流式细胞仪检测发现对照组的凋亡率是(47.77±2.90)%,而瘦素处理组的凋亡率是(30.17±2.03)%,明显下降,P<0.01;实时荧光定量PCR检测发现Bcl-2 mRNA表达量增高至对照组的(2.31±0.17)倍,Bax mRNA表达量减弱至对照组的(0.46±0.04)倍,差异均有统计学意义,P<0.05和P<0.01。结论瘦素可以抑制人肝癌细胞的凋亡,可能是通过上调抗凋亡因子Bcl-2的表达及抑制促凋亡因子Bax的表达来实现其抗凋亡作用。

2007～2012年铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性分析

目的了解该院临床分离的铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况,为临床进一步合理使用抗菌药物提供依据。方法选取2007～2012年常规分离、培养并鉴定的细菌,运用纸片扩散法对细菌进行药物敏感试验,使用WHONET5.4软件进行耐药性分析。结果共分离出铜绿假单胞菌1 554株,占分离病原菌总数的17.2%,主要来自于呼吸道标本（79.4%）。6年来,铜绿假单胞菌对左氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南和美罗培南的耐药率相对较高,分别为41.2%、36.3%、38.2%和32.9%,而对氨基糖苷类阿米卡星的耐药率相对较低,为23.9%。结论铜绿假单胞菌的检出率和耐药率相对较高,应加强细菌耐药性监测,合理使用抗菌药物,防止耐药菌株的流行和传播。

瘦素促进人肝癌细胞侵袭性生长的体外研究

目的:观察瘦素(leptin)对人肝癌细胞Huh 7生长和侵袭的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:培养人肝癌细胞Huh 7,在不同浓度的瘦素作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期;用Transwell小室检测瘦素(100ng/mL)作用24h后对Huh 7细胞侵袭能力的影响,并用实时荧光定量PCR分析瘦素对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA的影响。结果:瘦素可以促进Huh 7细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),存在一定的剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G_0/G_1期细胞比例并提高S期细胞比例(P<0.05或P<0.01);瘦素(100ng/mL)处理24h后,Huh 7细胞穿透聚碳酸酯膜的能力比对照组显著增强(P<0.01);实时荧光定量PCR检测发现,MMP-2和MMP-9 mRNA表达量分别增高至对照组的4.25和2.73倍(P<0.01)。结论:瘦素可以明显提高人肝癌细胞Huh 7的增殖和侵袭力,瘦素提高其侵袭力的作用机制可能与MMP水平的增高有关。

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的:观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21waf1的表达。结果:MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素(100 ng/ml)处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异(P<0.01)。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高(P<0.01),P21waf1蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论:瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。

瘦素水平及其受体基因多态性与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨瘦素及其受体基因多态性与原发性肝癌的相关性。方法收集82例原发性肝细胞癌病人和102例健康体检者的外周血,采用PCR-RFLP方法检测瘦素受体基因Gln223Arg的多态性,同时运用ELISA法检测血清瘦素水平。结果肝癌组和正常对照组瘦素受体基因Gln223Arg多态性基因型和等位基因的频率分布具有显著性差异(P<0.01);肝癌组的血清瘦素水平明显高于正常对照组[(3.42±1.25)ng/mLvs(1.26±0.42)ng/mL,P<0.01]。结论瘦素及其受体基因多态性与原发性肝癌密切相关,可能参与肝癌的发生发展。

脂联素及其受体2在肝细胞癌组织中的表达和临床意义

目的 探讨脂联素及其受体2在人肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法 选取武汉大学人民医院2012年7月~2014年7月手术切除的48例肝细胞癌患者和48例健康体检对照者作为研究对象,运用放射免疫法检测肝细胞癌患者和健康对照者的血清脂联素水平,采用免疫组织化学法检测脂联素及其受体2在人肝细胞癌组织和癌旁组织的表达,并统计分析肝癌组织中脂联素及其受体2的表达高低与临床病理特征之间的关系。结果 肝细胞癌患者的外周血清中脂联素水平为（12.25±5.23）μg/m L,低于健康对照者的（27.36±8.26）μg/m L,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。脂联素在肝癌组织和癌旁组织中的阳性率分别为41.67%和81.25%,脂联素受体2在肝癌组织和癌旁组织中的阳性率分别为31.25%和77.08%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。进一步的分析发现,脂联素和脂联素受体2的阳性率与肝细胞癌患者的年龄、性别、HBs Ag、抗-HCVAb、是否合并有肝硬化、肿瘤大小、组织学分级和肿瘤分期均没有明显相关性,差异无统计学意义（P〉0.05）,但不同淋巴结转移情况和血管侵犯的肝癌组织中的脂联素和脂联素受体2的阳性率,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 脂联素及其受体2的表达下降可能与人肝细胞癌的发生发展密切相关。

瘦素促进人肝癌细胞Huh7增殖活性的实验研究

目的观察瘦素对人肝癌细胞Huh7增殖活性的影响并初步探讨其可能的机制。方法在培养液中加入不同浓度的瘦素后,细胞计数并绘制生长曲线,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Western blot法观察CyclinD1蛋白的表达。结果细胞计数发现处理组的细胞数明显高于对照组;MTT法检测细胞增殖显示瘦素可以促进Huh7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依耐性;流式细胞仪检测结果显示瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例,细胞凋亡率也有明显降低;Western blot法显示瘦素(100ng/ml)处理24h后,CyclinD1蛋白的表达明显增高。结论瘦素可以明显的促进人肝癌细胞Huh7的增殖,可能是通过提高CyclinD1蛋白的表达来实现其作用。

瘦素对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响

目的观察瘦素对人胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法在培养液中加入不同浓度的瘦素后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪观察细胞周期及凋亡情况,实时荧光定量PCR法检测增殖相关基因Cyclin D1和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,同时检测Caspase-3的活性。结果 MTT法显示瘦素可以促进QBC939细胞的增殖;流式细胞仪检测结果显示瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例,细胞凋亡率也有明显降低;实时荧光定量PCR法显示瘦素(50 ng/ml)处理QBC939细胞24 h后,Cyclin D1mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达量明显增高,而Bax mRNA的表达量下降,差异有统计学意义;而且瘦素作用QBC939细胞后能降低细胞的Caspase-3酶活性。结论瘦素可以明显的促进人胆管癌细胞QBC939从细胞周期G0/G1期向S期转换,进而促进细胞增殖,此外瘦素还可以抑制其凋亡。

瘦素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的影响

目的 :探讨瘦素对四氯化碳 (CCl4)所致的小鼠急性肝损伤是否有加重作用。方法 :分别在小鼠腹腔注射CCl4和 /或重组小鼠瘦素 ,测其血清转氨酶 (AST和ALT) ,并取肝组织作病理学观察 ,用RT PCR法检测肝组织TGF β1和αl (I)前胶原mRNA表达。结果 :与对照组相比 ,CCl4处理组和CCl4加瘦素处理组小鼠血清转氨酶增高(P均 <0 0 1) ;肝脏的炎症和坏死程度明显加重 ;肝组织TGF β1和α1(I)前胶原的mRNA表达都升高 (P <0 0 5和P <0 0 1)。瘦素处理组则无明显变化。但CCl4加瘦素处理组和CCl4处理组相比 ,各项指标进一步升高 (P均 <0 0 1)。结论 :瘦素可以明显增加小鼠肝脏急性损伤后的炎症反应和早期纤维的形成 ,可能是肝纤维化的促进因子。

食品中非O157大肠杆菌志贺毒素基因序列分析

对一株从食品中分离的非O157产志贺毒素1型大肠杆菌(EC6)进行研究。将该菌株所产志贺毒素Stx1用PCR扩增stx1基因全长并克隆测序,其stx1基因与GenBank数据库收录的stx1基因最高同源性为99%,表明EC6发生了一定程度的基因突变。采用邻位相连法构建进化树,结果表明EC6为stx1基因亚型。

Tetra-primer ARMS PCR检测丙型肝炎患者IL-28B rs12979860基因多态性

目的评价四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(Tetra-primer ARMS PCR)检测IL-28Brs12979860基因多态性在丙型肝炎患者抗病毒治疗中的应用。方法选取2015年5月至2016年7月就诊的慢性丙型肝炎患者275例,提取外周血DNA,建立Tetra-primer ARMS PCR检测体系,与Sanger测序法对比验证,检测该地区丙型肝炎患者IL-28Brs12979860基因多态性分布情况。结果 Tetra-primer ARMS PCR检测体系成功建立,与Sanger测序法的符合率100%,rs12979860基因的C/C型、C/T型和T/T型的分布频率分别为86.5%、12.0%、1.5%。在C/C型组与C/T或T/T型组中,年龄分布、性别分布、HCV基因1b型比例差异均无统计学意义(P>0.05);患者肝硬化比例和持续病毒学应答比例比较差异有统计学意义(P<0.05),在C/T或T/T组中肝硬化比例较高,在C/C组中持续病毒学应答比例较高。结论该研究建立的Tetra-primer ARMS PCR技术是一种操作简单、成本低廉、快速有效的基因多态性检测方法,对于丙型肝炎患者IL-28Brs12979860基因多态性基因分型具有很好的临床应用价值。

肝癌细胞免疫治疗研究进展

肝癌是临床上发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,发病率逐年升高,其发病机制与免疫系统密切相关,免疫治疗尤其是细胞免疫治疗近年在临床广泛研究和应用。细胞免疫治疗可通过调节机体免疫系统功能激活机体内抗肿瘤免疫应答,进而消灭肿瘤细胞,并避免肿瘤的转移和复发。目前临床应用的细胞免疫治疗方法主要包括靶向T细胞的免疫治疗和非靶向T细胞的免疫治疗。随着免疫技术的不断发展,细胞免疫治疗已成为肝癌综合治疗的重要手段,且多种细胞免疫疗法的联合使用可有效缓解治疗的不良反应,延长患者生存时间。目前肝癌的细胞免疫疗法仍需更多临床数据的支持,且应进一步深入研究不同肝癌的治疗策略。

新型冠状病毒肺炎合并2型糖尿病患者的临床特征及预后分析

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)合并2型糖尿病患者的临床特征及预后。方法收集武汉大学人民医院东院区2020年2月1日至2020年3月10日收治的76例COVID-19合并2型糖尿病患者的临床资料。总结患者的临床特征及预后。结果76例患者中,男、女各占50.0%,平均年龄为(68±10)岁,普通型15例(19.7%)、重型37例(48.7%)、危重型24例(31.6%)。临床表现主要为发热(64例,84.2%)、干咳(50例,65.8%)和乏力(51例,67.1%)等。与普通型和重型患者比较,危重型患者的白细胞计数、中性粒细胞计数、天冬氨酸转氨酶、血尿素氮、血糖、乳酸脱氢酶、C反应蛋白>10 mg/L者比例、D-二聚体、N末端B型脑钠肽前体、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白、高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)>0.04μg/L者比例均高,而淋巴细胞计数、血小板计数、白蛋白水平、CD3、CD4、CD8细胞计数均低(均P<0.05)。76例患者中,出现呼吸衰竭26例(34.2%)、急性心肌损伤9例(11.8%)、休克6例(7.9%)、肾衰竭3例(3.9%);好转出院55例(72.4%)、死亡21例(27.6%),死亡者均为危重型患者,3组患者的病死率差异有统计学意义(P<0.05)。结论COVID-19合并2型糖尿病患者的病死率相对较高,其中危重型患者更容易出现多器官功能损害,预后更差。

CPPT教学中传染病学课程改革出现的问题及对策分析

为适应医学教育改革全面发展的需要,武汉大学医学部近年来与芝加哥大学合作,推行了临床病理、病理生理及治疗学的教学模式。传统的传染病学课程整合其中,虽然取得了一些成果,但在课程改革实行的过程中也暴露出一些主要问题:没有合适的教材和病例资料库,教学内容没有及时更新;授课教师的教学能力和综合素质需要进一步提高;部分学生的自主学习能力不够。针对这些问题,本文进行了思考和分析,提出了下列解决方案:积极组织编写相关教材,加快医院临床数据库的建立;加强新发、突发传染病等内容的教学;加强师资队伍的建设、重视年轻教师的培养;适当调整讨论课的教学方式,提高学生的积极性和参与度。这对于培养出具有良好临床思维和自主学习能力的综合性医学人才具有重要意义。

2007年医院临床常见病原菌耐药性监测及分析

目的了解医院2007年临床分离菌对常用抗菌药物的耐药情况。方法常规分离、培养并鉴定细菌,运用纸片扩散法对细菌进行药物敏感试验。结果 1124株分离菌中,革兰阳性菌株占23.1%,革兰阴性菌株占76.9%;耐甲氧西林菌株在金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中的检出率分别为55.7%和75.0%;屎肠球菌的耐药率明显高于粪肠球菌,肠杆科细菌对碳青酶烯类抗菌药物仍然高度敏感,产ESBLs菌株在大肠埃希菌和克雷伯菌属中的检出率分别为44.6%和32.4%;铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率比较高,分别达到38.1%和41.0%,不动杆菌属细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率相对较低,分别为13.3%和17.2%。结论耐甲氧西林菌株和产ESBLs菌株的检出率高,加强细菌耐药性监测有助于临床医师合理使用抗菌药物,防止耐药菌株的流行和传播。

瘦素对小鼠肝纤维化影响的初步研究

近年研究发现,活化的肝星状细胞(HSC)的瘦素mRNA和蛋白质的合成增加[1],慢性肝病患者血清中瘦素水平亦升高[2].表明瘦素和肝纤维化的发生发展可能存在着一定的联系,现探讨瘦素对小鼠肝纤维化发展的影响和可能存在的机制.

武汉地区107例重症新型冠状病毒肺炎患者的预后危险因素分析

目的分析影响重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者死亡的危险因素。方法回顾性分析2020年2月12日至3月12日在武汉大学人民医院住院治疗的107例重症COVID-19患者的临床特征,根据患者预后将其分为存活组(n=58)和死亡组(n=49),先对两组患者的基线临床特征、实验室检查结果进行单因素分析。为了排除混杂因素,应用随机森林模型筛选出变量重要性排序,再纳入二分类Logistic回归模型,分析患者死亡的独立危险因素。结果单因素分析显示,两组在年龄、临床分型、干咳、呼吸困难及实验室检查指标方面比较,差异均具有统计学意义(P<0.05或<0.01)。应用随机森林模型对单因素分析有统计学意义的变量筛选进行重要性排序,将筛选的变量纳入二分类Logistic回归模型,经逐步回归分析,患者临床分型、年龄、中性粒细胞计数和CD3+T淋巴细胞比例是重症COVID-19患者死亡的独立危险因素。干咳是重症COVID-19患者死亡的独立保护因素。结论COVID-19死亡患者更多出现免疫功能受抑制、继发感染和炎性因子风暴,这些因素可能共同作用于重症患者,最终出现顽固性的低氧血症和多器官功能障碍而导致患者死亡,密切监测上述指标并及时干预可能是挽救重症COVID-19患者生命的有效策略。

N-乙酰半胱氨酸和还原型谷胱甘肽治疗重型肝炎的临床对比观察

目的比较N-乙酰半胱氨酸（NAC）和还原型谷胱甘肽（GSH）治疗重型肝炎的疗效。方法将55例住院的重型肝炎患者随机分为GSH组（25例）和NAC组（30例）两组，分别在综合治疗的基础上加用GSH1．2g和NAC8．0g静脉点滴，连续用药28天，在用药过程中记录患者的临床症状、体征、血生化指标和凝血功能，并进行Child-push和MELD评分，同时观察不良反应。结果两组患者的肝功能和凝血功能均改善，两组比较无显著性差异（P〉0．05）；在治疗的第21天和28天，NAC组的TBbil和DBil下降率明显高于GSH组，差异有显著性（P〈0．05）；28天时NAC组的PTA提升率高于GSH组[（67．26±28．64）％vs（36．92±21．23）％，P〈0．05]；NAC组的Child-Pugll评分和MELD评分均出现下降，并显著优于GSH组（P〈0．05）。NAC的不良反应主要为头晕、恶心、呕吐和皮肤瘙痒，无严重不良反应。结论与GSH组比较，NAC在减低重型肝炎患者的血清胆红素水平和改善凝血酶原活动度方面更具有优势，NAC治疗过程中患者耐受性较好，安全性较高。