仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶基因检测分析

为研究20日龄左右仔猪腹泻发病机理,检测仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因种类,分析仔猪腹泻大肠杆菌耐药特性,为兽医临床更好地预防控制仔猪腹泻大肠杆菌病提供参考,从腹泻发病仔猪粪便中分离出34株致病性仔猪腹泻大肠杆菌,用10种头孢类抗生素药敏纸片对其进行药物敏感试验,并设计针对ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9的特异性引物,检测34株仔猪腹泻大肠杆菌ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9存在情况。药敏试验结果表明,34株仔猪腹泻大肠杆菌对10种头孢类抗生素的敏感度不同,其中,对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛的耐药率为68%、65%和56%,敏感率为29%、15%和35%;对头孢哌酮、氨曲南的耐药率为15%、9%,敏感率为70%、79%。ESBLs基因检测结果表明,34株仔猪腹泻大肠杆菌全部检测到TEM耐药基因,检出率为100%;检测到1株细菌具有CTX-M-9耐药基因,检出率为2.8%。由于该养猪场分离出的仔猪腹泻大肠杆菌对头孢类抗生素普遍耐药,并且全部检测出ESBLs的TEM基因,因此建议对养猪场的头孢类抗生素使用应定期进行耐药性检测和合理规范使用。

大蒜原汁对乳鸽腹泻大肠杆菌的抗菌效果研究

为检测大蒜汁对乳鸽腹泻大肠杆菌的抗菌作用,采用常量试管稀释法检测4种大蒜汁对乳鸽腹泻大肠杆菌的最小杀菌浓度(MBC)和最小抑菌浓度(MIC)。试验结果表明:37℃时紫皮多瓣蒜的MBC为2.5%,MIC为1.25%;白皮多瓣蒜、独头蒜和三瓣蒜的MBC均为5%,MIC均为2.5%。不同温度下,白皮多瓣蒜、三瓣蒜和独头蒜75℃时的MIC分别为2.5%、10%和10%,三者加热到85℃和95℃后均没有抗菌作用;紫皮多瓣蒜在85℃时有一定的抗菌作用,MIC为2.5%,加热到95℃后没有抗菌作用。4种大蒜汁在37℃时对乳鸽腹泻大肠杆菌均具有抗菌作用,对乳鸽腹泻大肠杆菌病具有良好的预防与治疗作用。

南京地区奶牛乳房炎的现状、成因与防制

通过对南京市不同类型奶牛场奶牛临床型乳房炎、隐性乳房炎的发病率、发病规律、发病因素及发生危害进行调查与分析 ,并提出防制奶牛乳房炎的配套措施。

中药体外抑菌效果及其对无乳链球菌LDH的影响

将复方蛇床子涂膜剂中单味药及不同组合制成煎剂,用平板法观察各煎剂对无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用,并测定了各煎剂对奶牛乳房炎病原无乳链球菌LDH酶活力的抑制浓度。结果显示,无论是单味药蛇床子、金银花,还是组合金银花-紫花地丁-蒲公英和蛇床子-紫花地丁-蒲公英及复方蛇床子涂膜组方都有抑菌效果,以复方蛇床子涂膜组方效果最好;蛇床子、金银花、金银花-紫花地丁-蒲公英和蛇床子-紫花地丁-蒲公英组合在0.062 5 g/m l时均可降低无乳链球菌LDH酶活力。复方蛇床子涂膜剂中的药物成分可能是通过抑制LDH酶而起抑菌作用的。

一株鸡大肠杆菌1型及P型菌毛蛋白结构基因的克隆

据国外发表的人致病性大肠杆菌 1型及P型菌毛蛋白结构基因 (pilA及papA)序列 ,设计并合成了分别位于PilA及papA保守区的 2对引物。经PCR从 1株带有甘露糖敏感血凝特性 (MSHA)及甘露糖抵抗血凝特性 (MRHA)的鸡致病性大肠杆菌 (HJ2 0e)染色体中扩增到大小分别在 6 5 7bp及 5 41bp的 2种阳性产物。通过核酸序列测定分别确证所扩增的DNA片段分别为pilA及papA基因。经酶切、连接、转化和筛选 。

仔猪黄痢K88-K99-987p-F41多价菌毛混合油乳剂灭活疫苗的制备及小鼠免疫保护试验

根据我国仔猪大肠杆菌性腹泻流行的实际情况 ,用产菌毛粘附因子的野生分离菌株HN2 0 0 1(K88ab)、HN2 0 0 2 (K88ac)、HN2 0 0 3(K88ad)、HN2 0 0 4 (K99)、C83915 (987p)及C836 2 1(F4 1)提取菌毛制成 5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗 ,5批多价灭活疫苗对小鼠的平均保护率达 95 0 % (38 4 0 )。

鸡大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位苗交叉保护的初步研究

含Ⅰ型菌毛的３ 个不同血清型（Ｏ１ 、Ｏ７８ 及Ｏ８８） 的菌株， 大容量培养后提取菌毛制备３ 种单价菌毛油乳苗。用１ 日龄雏鸡分别免疫３ 种单价菌毛油乳剂苗， 每雏免疫量为１２５ μｇ ， 隔离饲养至２ 周龄经气囊攻毒， 并评价疫苗的免疫原性。结果未免疫鸡出现８７－５ ％ ～１００ ％ 的死亡率， 免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率仅１２－５ ％ ， 用异源菌株攻毒出现３７－５％ ～６２－５ ％ 的死亡率。免疫鸡攻毒后未死亡者， 经扑杀观察， 可见在气囊、心包及肝脏的病变非常轻微，

鸡大肠杆菌多价1型菌毛亚单位疫苗在鸡体内的免疫原性研究

用 1日龄雏鸡免疫评价了鸡大肠杆菌多价 1型菌毛油乳剂苗在鸡体内的免疫原性。用含 1型菌毛的 3个不同血清型 (O1、O78及O88)菌株 ,大容量培养后提取菌毛制备多价菌毛油乳剂苗。接种多价菌毛油乳剂苗的鸡用同源菌株攻毒后出现 10 %～ 11.2 %的死亡率 ,阳性对照组鸡攻毒后出现 70 %～ 80 %的死亡率 ;用异源菌株 (O36)攻毒后 ,免疫鸡出现 33.3%的死亡率 ,而未免疫阳性对照组鸡死亡率达 70 %。免疫鸡在气囊 ,心包及肝脏的病变非常轻微 。

鸡源大肠杆菌1型菌毛结构基因(pilA)克隆

根据人源大肠杆菌 1型菌毛结构基因 (pilA)DNA序列 ,在其保守区设计了 1对带有 BamHI/Hind Ⅲ酶切位点的引物 ,经PCR扩增 ,从 2 4株鸡源大肠杆菌致病株染色体中得到 2 1个大小约 6 5 7bp的阳性产物 ,经酶切、连接、转化及筛选 ,得到 3种来自不同血清型鸡源大肠杆菌 (O1、O78及O88)PCR产物的阳性克隆。经核酸序列测定 ,确认所克隆的外源基因为

3个血清型鸡源大肠杆菌1型菌毛蛋白抗原位点变异分析

采用Goldkey及DNA Star分析软件对发表的3个不同血清型的鸡大肠杆菌1型菌毛结构基因(pilA)进行同源性及抗原位点分析。结果显示,3种鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))l型菌毛pilA基因相似性为91.36％～98.38％,所编码的氨基酸同源性为93.50％～97.84％;3种血清型鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))1型菌毛蛋白二级结构在1～73位及150～185位氨基酸的二级结构基本相似,而111～150位氨基酸的α螺旋与β折叠的数量有所不同。菌毛蛋白亲水性、抗原性及抗原决定簇预测表明,来源于3种血清型大肠杆菌的1型菌毛蛋白在l～110位及150～184位氨基酸存在相似的二级结构及抗原位点,且不同血清型之间存在一定的共同抗原。

鸡源大肠杆菌1型菌毛菌株粘附鸡呼吸道上皮的电镜观察

用电子显微镜观察了鸡大肠杆菌 (O78) 1型菌毛在不同温度中的表达情况。细菌在营养肉汤中 37℃培养 4 8h可表达大量的菌毛 ,而 18℃培养 4 8h则缺乏菌毛。扫描电镜观察结果 ,37℃培养的鸡大肠杆菌可大量粘附鸡呼吸道上皮粘膜 ,而 18℃培养的同种菌则不能粘附 ,表明鸡大肠杆菌粘附鸡呼吸道上皮的过程由

禽大肠杆菌菌毛粘附特性的研究

用透射电镜观察了鸡大肠杆菌的３个致病菌株ＧＬ７（Ｏ５０）、ＨＢ５（Ｏ７８）及ＴＧ１８（Ｏ８８），发现在营养肉汤中于３７℃培养均表达菌毛，但在１８℃培养不表达菌毛，用３７℃培养的大肠杆菌对鸡气管粘膜做粘附试验，并用扫描电镜观察，发现它们对体内体外的鸡气管均可粘附，但１８℃培养的大肠杆菌均缺乏这种粘附作用。采用粘附抑制试验测定这３种菌株对体外鸡气管节段粘附的特异性，结果是抗这３种细菌菌毛的抗体能显著抑制各自相应的菌株对气管上皮的粘附；Ｏ７８株和Ｏ８８株对气管上皮的粘附作用可被甘露糖显著抑制，表明甘露糖对介导菌体对气管粘膜上皮细胞受体起重作用。用甘露糖不能抑制Ｏ５０菌株对气管上皮的粘着，表明该菌体的粘附作用不由甘露糖介导。用高碘酸钠处理能抑制所有菌株的粘附作用。

鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因(papA)的克隆与序列测定

根据国外发表的 4种来源不同的人尿道致病性大肠杆菌 pap A基因序列 ,在其保守区设计了带有 Sac /Bam H 酶切位点及保护碱基的 1对引物 ,应用 PCR从 1株带有 MRHA特性的鸡大肠杆菌染色体上扩增到 1个阳性产物 ,经酶切、连接、转化和筛选 ,得到 PCR产物的阳性克隆。通过对 PCR产物核酸序列测定 ,确证所扩增和克隆的 DNA片段为 pap

鸡大肠埃希氏菌菌毛分类方法的研究

用D 甘露糖敏感血凝特性 (MSHA/MRHA)及聚合酶链反应 (PCR)扩增 2种方法对鸡大肠埃希氏菌菌毛进行分类 ,证明MSHA/MRHA具有方便、快速及较可靠的特点 ,但不太敏感 ;PCR则具有快速、敏感、准确、可靠的优点 。

禽霍乱鸡胚组织灭活油乳苗的研究

选择禽多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１强毒株（血清１型），接种鸡胚，收集死胚制备组织灭活油乳苗，分别免疫鸡和鸭，设肉汤培养的Ｃ４８－１菌株灭活乳化苗作免疫对照。免疫后４周用异源血清型禽多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９（血清３型）攻击。经组织灭活油乳苗免疫的鸡保护率达９３．３％，鸭保护率达１００％，而经肉汤培养的灭活苗对鸡和鸭均无保护作用，说明鸡胚培养的多杀性巴氏杆菌具有交叉保护作用。

鸡大肠杆菌菌毛研究进展

鸡大肠杆菌菌毛是鸡大肠杆菌病的一种重要的致病因子,为一种蛋白质突起,具有良好的免疫原性。在体外培养时,大肠杆菌菌毛的产生具有温度依赖性。本文就鸡大肠杆菌菌毛在不同培养条件下的表达,提难和纯化、与大肠杆菌致病性的关系、生物学及其免疫学特性作一扼要介绍。