Notch信号转导通路在原代肝星状细胞体外培养活化中的作用

目的探讨Notch信号转导通路在肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)体外培养活化中的作用。方法采用两步酶灌注法分离培养原代大鼠HSC并进行体外培养。激光共聚焦显微镜检测体外培养HSC第1天和第7天时形态、胞内维生素A、静止标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和活化标志α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的变化。采用RTPCR和Western blot检测HSC体外培养0天、3天和7天时上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关分子α-SMA、Ⅰ型胶原(collegenⅠ)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、蜗牛家族转录抑制因子1(snail family transcriptional repressor 1,Snail 1)等和Notch信号转导通路(受体Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4与靶基因Hes1、Hey1、Hey2、HeyL)的变化。使用Notch受体阻断剂DAPT干预后,检测体外培养的HSC中活化相关分子(α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1等)的改变。结果 (1)初分离的HSC经7天体外培养后逐渐向肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFs)样转化,表现为形态变长、维生素A水平和GFAP表达降低,α-SMA表达升高。(2)RT-PCR与Western blot结果表明,HSC体外培养存在自发EMT现象,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snai l表达上调及E-cadherin、CK7、CK19和Desmoplakin表达下调,同时Notch 2、Notch 3及Notch靶基因Hey2、HeyL表达逐渐增加。(3)使用DAPT后,可显著抑制原代HSC体外活化,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1的下调及E-cadherin、CK 7、CK 19和Desmoplakin转录或蛋白表达水平上调。结论 Notch信号转导通路的激活可能参与HSC的活化,可能是抗肝纤维化治疗的潜在靶点。

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒DNA与肝纤维化4项检测指标相关分析

目的探究慢性乙型肝炎(以下简称"乙肝")患者检测血清乙肝病毒(HBV)-DNA、肝纤维化4项指标的临床意义。方法对该院2013年4月至2014年12月收治的100例慢性乙型肝炎患者进行肝脏穿刺活检,同时检测血清血清HBV-DNA水平与肝纤维化4项,包括透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ),比较不同肝组织炎症活动度分级和纤维化程度分期患者的血清HBV-DNA水平与肝纤维化4项水平。结果 60例乙肝病毒表明抗原(HBeAg)阳性患者的血清HBV-DNA水平在不同炎症分级及不同纤维化分期患者间差异无统计学意义(P>0.05)。40例HBeAg阴性患者的血清HBV-DNA水平在不同炎症分级及不同纤维化分期患者间差异有统计学意义(P<0.05)。G1分级患者的HA、LN、PCⅢ和CⅣ水平和正常值接近,从G2分级开始到G4分级,慢性乙型肝炎患者的肝纤维化4项水平逐步升高,且与G1患者比较差异有统计学意义(P<0.05);各纤维化分级患者的HA、LN、PCⅢ和CⅣ水平均高于正常值,且水平逐级升高,其他级肝纤维化4项水平均高于S1患者的水平(P<0.05)。结论 HBeAg阴性患者血清HBV-DNA水平在不同炎症分级和纤维化分期间差异明显,对于HBeAg阳性患者临床意义不大。肝纤维化4项水平随炎症分级和纤维化分期的水平逐级升高,且各级间差异较大,具有较高的临床诊断价值。

大鼠肝脏细胞同步分离与培养方法的建立

目的建立一种同时分离大鼠肝细胞(parenchyma cell,PC)、肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,SEC)与库普弗细胞(Kupffer cell,KC)的操作方案。方法采用EDTA/胶原酶两步灌注法获取肝细胞悬液,通过低速离心首先分离出PC组分,然后通过链蛋白酶E去除非实质细胞(nonparenchymal cell,NPC)中的PC,最后通Nycodenz和Percoll溶液进行梯度离心分离并纯化HSC、SEC和KC,体外培养并观察各细胞表型和功能的变化。结果 PC、HSC、SEC和KC平均每克组织产量分别为(26±9.2)×10~6、(1.5±0.2)×10~6、(7.4±1.5)×10~6和(3.1±0.9)×10~6,活力分别为(93.1±2.3)%、(90.1±3.4)%、(96.2±2.1)%和(98.2±1.7)%,纯度分别为(98.5±1.2)%、(95.1±2.5)%、(93.6±3.6)%和(98.1±1.4)%;HSC在体外培养过程中逐渐丧失维生素A,转化为肌成纤维样(myofibroblast,MF)细胞;SEC在体外培养第3天出现凋亡,至7天凋亡达到顶峰,随后少量存活的细胞在体外增殖,至培养14天时形成典型的"铺路石"形态;培养14天的SEC保留清道夫功能,但丧失窗孔结构;KC可在体外增殖,培养至14天仍具有吞噬功能,表达特征性标志CD68。结论本方法可同时分离大鼠肝脏细胞,细胞数量、纯度和活力可满足下游实验。

浅析PCT、CRP在诊断支气管哮喘合并呼吸道感染中的应用价值

目的:浅析PCT、CRP在诊断支气管哮喘合并呼吸道感染中的应用价值。方法:对2013年6月~2013年12月期间我院收治的100例支气管哮喘合并呼吸道感染患者的临床资料进行回顾性分析。按照这些患者合并呼吸道感染的情况将其分为单纯哮喘组、哮喘合并病毒感染组和哮喘合并细菌感染组,其中单纯哮喘组患者有26例,哮喘合并病毒感染组患者有29例,哮喘合并细菌感染组患者有45例。对这100例患者空腹静脉血的化验情况进行分析,了解其血液中血清降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)的水平。研究这三组患者PCT和CRP的水平在诊断其所患支气管哮喘合并呼吸道感染中的应用价值。结果:哮喘合并细菌感染组患者的PCT、CRP的水平明显高于哮喘合并病毒感染组患者及单纯哮喘组患者PCT、CRP的水平,三者相比差异具有显著性(P<0.05)。对三组患者患者PCT、CRP的阳性率进行比较,结果哮喘合并细菌感染组患者的阳性率明显高于单纯哮喘组患者和哮喘合并病毒感染组患者PCT、CRP的阳性率,三者相比差异具有显著性(P<0.05)。结论:对哮喘合并细菌感染者可通过检测其PCT和CRP的水平进行鉴别诊断,这两项检测结果还可作为患者是否需要应用抗菌药物的依据。此诊断方法值得在临床上推广使用。

金标试纸法与ELISA法检测血清标本HbsAg对比探析

目的探讨在临床诊疗中用金标试纸快速法和酶联免疫吸附法(ELISA法)在HbsAg检测中的差异。方法分别用金标试纸法和ELISA法对1970例标本的乙肝表面抗原(HbsAg)检测并进行比较分析。结果两种方法阳性符合率为96.47%,结果无显著性差异(P>0.05)。结论金标法试纸法具有准确,省时、简便等特点,可以替代ELISA法在临床诊疗检验乙肝表面抗原中广泛应用,是预防乙型肝炎医院内感染的重要有效措施。

冠心病患者D-二聚体、血小板膜糖蛋白测定及临床分析

目的探究冠心病患者血液中血小板膜糖蛋白(GP)和D-二聚体(D-D)的变化情况及临床意义。方法对37例不稳定型心绞痛(UA)患者(UA组),23例稳定型心绞痛(SA)患者(SA组)和30例正常人(对照组)体内的GP和D-D浓度进行检测,并对有无冠状动脉事件发生者之间的关系加以分析。结果 UA组患者中GP和D-D浓度与SA组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。有心血管事件发生组GP和D-D含量高于无心血管事件发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GP和D-D浓度能够当作冠状动脉血栓形成的重要指标,并可以在一定程度上将冠状动脉事件发生的危险性加以全面反映。

老年恶性肿瘤筛查的荧光定量聚合酶链式反应方法构建

目的基于荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,用于老年恶性肿瘤筛查。方法根据Foxp3基因保守序列,设计特异性引物,构建实时荧光定量PCR反应体系;收集临床恶性肿瘤和体检者各60例的血液标本,用构建的方法进行检测并比较两组的差异。结果成功构建荧光定量PCR反应,并对反应体系、反应条件进行优化。临床标本检测发现,恶性肿瘤组Foxp3mRNA相对表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建Foxp3的实时荧光定量PCR方法,对恶性肿瘤早期筛查、辅助诊断具有重要意义。

浅析初中数学有效教学的途径

对于初中生来说,初中数学本身的难度会让她们在理解与学习的过程中充满一定的阻碍。而这也使得他们对数学缺乏兴趣与好感,进而不能将自身的主观意识投入到学习当中,这不利于初中数学的教学。而实现初中数学有效教学,教师就不能忽视这方面的特性,更应当结合以生为本的教育理念,深入到课堂当中,调整教学方向与方法,让课堂更适合学生的学习,这样的课堂才能实现教学的有效性,进而提高初中数学教学质量。

受血患者血清感染性指标检测与分析

目的探讨输血患者受血前血清感染性指标的阳性率及分布,为临床输血方法指导建议。方法对2012年1月-2013年12月11 279例受血前患者使用化学发光法检测包括抗丙型肝炎病毒抗体(HCV)、人体免疫缺陷病毒抗体(Anti-HIV)、苍白密螺旋体抗体(Anti-TP),同时使用时间分辨免疫荧光法进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测,分析阳性率及不同科室阳性率分布。结果乙型肝炎表面抗原阳性569例,阳性率5.04%;2例HIV抗体检测阳性患者均出现在产科,梅毒检测阳性主要出现在妇科。结论输血患者受血前血清感染性指标存在一定阳性比例,应加强筛选,及时发现潜在感染源,提高安全性。

高处坠落伤术后并发食酸代尔夫特菌感染1例报道

食酸代尔夫特菌是一种条件致病菌,较少引起人类疾病,但在免疫力低下或有侵入性操作的患者可引起肺炎、败血症、心内膜炎、伤口感染等[1]。本文报告1例多发伤合并食酸代尔夫特菌的病例。1临床资料患者,男,38岁,因"高处坠落致多发伤3天"于2019年4月6日入院。

溶血对临床生化检验影响探析

目的：探寻标本溶血对临床生化检验结果的影响。方法：随机抽取60例健康人的血液标本，等量分为两份，每份3ml，一份标本常温下进行标准检验，另一份人工溶血后检验，对比相同检验项目结果的差异。结果：正常标本和溶血标本中ALT、AST、LDH、ALP、K、CK、Na、TP的检验结果存在明显差异（P〈0．05）；C1、BUN、Cr、GLU、UA、GGT的结果无明显差异（P〉0．05）。结论：临床检验过程中应尽量避免溶血的发生，避免假阳性或者假阴性结果的错误报告，为临床诊疗提供准确的参考。