园参叶及林下参叶中人参皂苷含量比较

目的建立UPLC法同时测定园参叶及林下参叶中人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、Rb2、Rd的含量,并比较两者人参皂苷含量。方法采用UPLC CORTECS C 18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.6μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.25 mL/min;柱温30℃;检测波长203 nm。对8种人参皂苷进行偏最小二乘法判别分析。结果8种人参皂苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.9999),平均加样回收率97.47%~103.41%,RSD<3.0%。正交偏最小二乘法判别分析可区分2种药材,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg2的VIP值大于1。结论该方法稳定可靠,原人参三醇类(人参皂苷Rg1、Re、Rg2)和原人参二醇类(人参皂苷Rc、Rb1、Rb2、Rd)人参皂苷的比值可作为园参叶和林下参叶区别的重要依据。

大豆GmLecRlk基因耐盐功能分析

凝集素类受体蛋白激酶属于类受体蛋白激酶(RLKs)家族,在植物的抗病防御反应、生长发育、胞内信号传导以及非生物胁迫反应过程中发挥重要作用。实验室前期对过表达抗逆转录因子GmNFYB1大豆进行转录组测序,获得了差异表达基因GmLecRlk(Glyma.07G005700),其开放阅读框长度为546 bp,编码181个氨基酸,蛋白结构域分析显示其含有两个丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,属于一种G型凝集素类受体蛋白激酶。实时荧光定量PCR结果显示,GmLecRlk基因在大豆的根、茎、叶、荚中均有不同程度的表达,在根中表达量最高;200 mmol/LNaCl处理下,GmLecRlk的mRNA丰度先降低后升高,在12 h时达到最高值,表明该基因参与大豆对盐胁迫的响应。利用发根农杆菌K599获得GmLecRlk过表达转基因发状根复合植株,在盐胁迫处理下,其存活率高于对照;在拟南芥中异源表达GmLecRlk基因,转基因拟南芥在盐胁迫处理下的萌发率、绿化率和根长均高于野生型拟南芥。综上所述,GmLecRlk参与大豆对盐胁迫的反应,过量表达基因能提高大豆和拟南芥的耐盐性,为培育和改良抗盐大豆新品种提供新的途径和理论指导。

高速逆流色谱快速分离山竹子素的制备方法实验研究

目的:制备山竹子素(garcinol)化学对照品。方法:采用高速逆流色谱法,从多花山竹子、山木瓜、大叶藤黄三种藤黄属植物粗提物中快速分离化合物garcinol,溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-95%乙醇-水(8:8:12:4,体积比),上相做固定相,下相做流动相,仪器转速850 rpm,温度25℃,检测波长254 nm,目标化合物馏分经Sephadex LH-20凝胶柱柱色谱纯化,所得样品由高效液相色谱法检测纯度。结果:可从104.765 g多花山竹子枝、105.270 g山木瓜枝、102.318 g大叶藤黄果实中分离得到garcinol的量分别为45 mg、281 mg、4080 mg,纯度分别为98.72%、98.36%、98.42%。结论:通过对比三种植物样品处理方法,结果以大叶藤黄果实作为原料时,正己烷-乙酸乙酯-95%乙醇-水(5:5:5:5,体积比)萃取的上相浸膏,经高速逆流色谱法结合凝胶柱柱色谱法,可快速高效、大量制备化合物garcinol。实验表明该方法效率高,可操作性强,制备量大。

基于网络药理学与GEO生信统计的瘀血痹抗类风湿性关节炎的活性成分及作用机制研究

目的:基于网络药理学与基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库挖掘初步揭示瘀血痹胶囊发挥抗类风湿性关节炎(RA)的潜在活性成分及作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、GeneCards数据库筛选出瘀血痹胶囊活性化学成分、作用靶点及RA靶点,采用STRING 11.0数据库对其交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建,采用Bioconductor数据库进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;通过GEO数据库下载基因芯片数据(GSE55457),经过基因探针富集分析(GSEA)筛选出差异表达基因,联用分子对接对差异基因与排名靠前的活性化合物进行虚拟验证。结果:筛选出瘀血痹胶囊128个有效成分和85个与RA的交集靶点,其中度值排名靠前的化合物有槲皮素、木犀草素和山柰酚等。GO功能富集结果显示,RA靶点参与生物过程、分子功能、细胞组分的多种调控过程。KEGG通路富集结果显示,炎性因子和受体信号通路可能为瘀血痹胶囊对RA发挥作用的主要通路。差异表达基因与交集靶点交集有白细胞介素-6(IL-6)、DNA修复酶1(PARP1)、核转录因子-κB激酶亚基β抑制剂(IKBKB)、雄激素受体(AR)、半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、多不饱和脂肪酸5-脂氧合酶(ALOX5)等。分子对接结果显示,β-谷甾醇、鞣花酸、7-O-甲基异鼠李糖醇、木犀草素、槲皮素、异鼠李素、山柰酚、β-胡萝卜素等与差异性基因对接活性较好。结论:瘀血痹胶囊中的β-谷甾醇、木犀草素、槲皮素等核心化合物可能是通过作用于IL-6、PARP1、IKBKB、AR、CASP3等靶点对RA起治疗作用,为瘀血痹胶囊后续深入研究及临床应用提供了数据支持。

运用网络药理学和分子对接技术探究瘀血痹胶囊抗神经病理性疼痛的活性成分与作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术探究瘀血痹胶囊抗神经病理性疼痛的活性成分与作用机制。方法:整合药材化学成分靶点和疾病靶点数据库信息,运用网络药理学技术分析瘀血痹胶囊的潜在活性成分和作用机制,并通过分子对接软件对瘀血痹活性成分与核心作用靶点进行对接、可视化。结果:共筛选得到活性成分128个、交集作用靶点43个,GO(Gene Ontology)富集分析显示与核酸转录因子结合和受体的活性相关,KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析显示与神经退行性疾病、肿瘤坏死因子、白介素-17等的信号通路相关,分子对接结果显示活性成分与核心作用靶点的对接活性良好。结论:瘀血痹胶囊系通过作用于神经、炎症等相关信号通路,调节肾上腺素、神经递质等受体活性和甾体激素与其受体结合等生物过程,最终产生抗神经病理性疼痛效果的。

林下参茎叶总皂苷与园参茎叶总皂苷对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤活性研究

目的:比较林下参茎叶总皂苷与园参茎叶总皂苷对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤活性,为林下参茎叶的药用价值提供实验依据。方法:将H22荷瘤小鼠随机分为9组,空白对照组,模型组,阳性对照组(参一胶囊,10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组(剂量分别为10、20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组(剂量分别为10、20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃给药14 d,给药结束后,计算相对肿瘤增殖率和抑瘤率。ELISA法检测不同处理组血清中IgG、IgM和外周血IFN-γ、IL-2、TNF-α的含量;流式细胞术检测外周血CD3^(+)CD4^(+),CD3^(+)CD8^(+)细胞的含量比例。结果:(1)林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组对H22荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率T/C(%)分别为70.0%、51.0%、34.5%,抑瘤率分别为21.2%、43.1%、60.4%;园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组对H22荷瘤小鼠的T/C(%)分别为77.9%、60.3%、40.5%,抑瘤率分别为19.0%、37.8%、54.7%;阳性对照组对H22荷瘤小鼠的T/C(%)为30.5%,抑瘤率为62.7%;与园参茎叶总皂苷对应剂量组相比,林下参茎叶总皂苷中、高剂量组能显著降低瘤重(P<0.05)。(2)与空白对照组比较,模型组小鼠血液中CD3^(+)CD4^(+)含量比例降低(P<0.01),CD3^(+)CD8^(+)含量比例升高(P<0.01);与模型组比,阳性对照组,林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组和园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组中CD3^(+)CD4^(+)含量比例升高,CD3^(+)CD8^(+)含量比例降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与空白对照组比较,模型组IgG、IgM、IL-2、TNF-α、IFN-γ含量均显著降低(P<0.01);与模型组比,阳性对照组,林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组和园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组中IgG、IgM、IL-2、TNF-α、IFN-γ含量均显著升高(P<0.01);与园参茎叶总皂苷对应剂量组相比,林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组IgG、IgM、IL-2、TNF-α含量均显著升高(P<0.01),低、中剂量组IFN-γ含量明显升高(P<0.05)。结论:林下参茎叶总皂苷和园参茎叶总皂苷对H22荷瘤小鼠移植瘤生长均有一定抑制作用,机制可能与影响CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、IgG、IgM、IL-2、TNF-α、IFN-γ的表达水平有关;林下参茎叶总皂苷中、高剂量组抗肝癌活性及低、中、高剂量组增强免疫功效略强于园参茎叶总皂苷对应剂量组。

不同生境人参茎叶总皂苷对免疫抑制小鼠的作用比较

目的:检测不同生境人参(园参、林下参)茎叶总皂苷对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:将80只小鼠随机分为空白对照组,模型组,园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg),林下参茎叶总皂苷低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)。以环磷酰胺构建小鼠免疫抑制模型,除正常组与模型组外,其余各组小鼠给予不同剂量的园参、林下参茎叶总皂苷治疗。检测各组小鼠血清IgG、IgM水平与外周血CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)细胞百分率。结果:与空白组相比,模型组小鼠血清IgG、IgM水平显著降低(P<0.01),CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)比例降低(P<0.01),CD3^(+)CD8^(+)比例升高(P<0.01);园参、林下参茎叶总皂苷各剂量组小鼠血清IgG、IgM水平较模型组明显升高(P<0.01),给药剂量等同时林下参茎叶总皂苷的效果更优。较模型组,园参、林下参茎叶总皂苷各剂量组小鼠血液CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)比例显著升高(P<0.05),CD3^(+)CD8^(+)比例显著降低(P<0.05)。结论:园参、林下参茎叶总皂苷均能增强免疫抑制小鼠的免疫功能,在改善体液免疫方面,林下参茎叶总皂苷的效果更好。

大豆GmPUB32基因的克隆及耐盐功能分析

泛素化系统通过介导蛋白质的翻译后修饰,参与包括细胞分化、激素应答、生物与非生物胁迫响应等多个生物学过程,其中含有U-box基因的泛素连接酶为泛素化系统的重要酶之一。课题组前期研究发现大豆Glyma.13G115900(GmPUB32)基因编码一个泛素连接酶(PUB),其表达量在根中受盐胁迫影响显著。本研究在大豆品种垦丰16中克隆得到大豆U-box家族基因GmPUB32,序列分析结果表明GmPUB32基因的开放阅读框长度为513bp,编码170个氨基酸,在其83-131个氨基酸之间含有一个RING/U-box保守结构域;亚细胞定位分析结果显示GmPUB32蛋白定位于细胞膜与细胞质中;GmPUB32基因在大豆根、茎、叶片与荚果中均能检测到不同程度的表达,在根中表达量最高,GUS组织化学染色进一步明确其在根中发挥主要作用;荧光定量PCR分析结果显示,在200 mmol/L NaCl处理后,与对照相比随着处理时间的延长GmPUB32在根中的表达量呈现出显著的下降趋势,表明GmPUB32可能参与大豆对于盐胁迫的应答过程;通过对过表达GmPUB32的T3拟南芥的盐胁迫耐受性进行分析,结果表明转基因拟南芥的萌发率、子叶绿化率与盐胁迫下的存活率均明显低于野生型,此外,GmPUB32过表达转基因毛状根的生长速率相比野生型也明显受到抑制。由此推断,GmPUB32可能作为负调控因子参与大豆对于盐胁迫的应答过程,降低植物对于盐胁迫的耐受性。

不同生境人参茎叶总皂苷对心律失常小鼠的作用比较

目的探讨园参茎叶总皂苷(GSLS)和林下山参茎叶总皂苷(MSLS)对心律失常小鼠的改善作用。方法将80只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、园参茎叶总皂苷低(GSLS-L)、中(GSLS-M)、高(GSLS-H)剂量组、林下山参茎叶总皂苷低(MSLS-L)、中(MSLS-M)、高(MSLS-H)剂量组。各给药组小鼠预先给予相应药物7 d。末次给药1.5 h后,采用尾静脉注射0.4%氯化钡溶液制备小鼠心律失常模型,并通过生物信号采集处理系统监测模型组和给药组小鼠Ⅱ导联心电图;采用ATP酶测试盒检测各组小鼠心肌组织中Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的表达。结果与模型组相比,园参茎叶总皂苷低、中、高剂量组和林下山参茎叶总皂苷低、中、高剂量组心律失常持续时间均有所降低(P<0.01),园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷各同等剂量组比较未见统计学差异;园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷对模型小鼠心电图的P波、QRS波和PQ间期均具有明显改善作用(P<0.01,P<0.05);园参茎叶总皂苷中、高剂量组和林下山参茎叶总皂苷中、高剂量组小鼠心肌组织中Na^(+)-K^(+)-ATP酶及Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶表达水平显著升高(P<0.01),园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷各同等剂量组比较未见统计学差异。结论园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷均可以通过升高氯化钡致心律失常小鼠心肌组织中Na^(+)-K^(+)-ATP酶及Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶的表达来改善心律失常,并且各同等剂量组间未见统计学差异。

不同生境人参茎叶总皂苷对气虚血瘀大鼠的作用比较

目的通过相关指标的检测,探究园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷对气虚血瘀模型大鼠的作用差异,为不同生境人参茎叶资源的开发利用提供理论依据。方法采用游泳力竭联合肾上腺素皮下注射法,构建气虚血瘀模型大鼠。分别给予不同剂量(10、20、40 mg/kg)园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷干预后,经腹主动脉取血,进行血液流变学检测;通过酶联免疫吸附法检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血栓素B2(TXB2).Na^(+)-K^(+)-ATP酶的表达。结果与正常组相比,模型组的各项指标均有显著升高或降低,具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷给药对降低气虚血瘀模型大鼠血清CK CK-MB.ET-1.TXB2水平及全血黏度高切、中切、低切水平.提高气虚血瘀模型大鼠血清NO.Na_(+)-K^(+)-ATP酶水平均具有--定的作用,并且具有统计学差异(P<005,P<0.01)。而园参茎叶总皂苷与林下山参茎叶总皂苷对气虚血瘀模型大鼠的改善作用未见统计学差异(P>0.05)。结论园参茎叶总皂苷和林下山参茎叶总皂苷均能改善气虚血瘀模型大鼠的血液流变学指标,其作用机制可能与保护心肌细胞.改善内皮功能、保证能量代谢等有关;且同等剂量园参茎叶总皂苷与林下山参茎叶总皂苷对气虚血瘀模型大鼠的作用相当。

经典烘干工艺对大黄中总蒽醌含量的影响

目的:探索用于大黄药材干燥的经典烘干工艺的最佳条件。方法:以烘干后大黄总蒽醌含量为指标,采用HPLC法测定5种蒽醌成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的含量,采用单因素试验以及正交试验考察烘干温度、烘干时间、"发汗"时间对大黄总蒽醌含量的影响。结果:筛选的烘干工艺的最佳条件为烘干温度60℃、烘干时间15 h、"发汗"时间18 h,大黄总蒽醌的含量为41.2 mg/g。结论:在最佳烘干条件下,大黄总蒽醌含量较高,此法适用于大黄生药材的初加工。