抑制长链非编码RNA MALAT1对糖脂毒性诱导的内皮细胞功能障碍的影响及可能机制

目的:探讨糖脂毒性环境中抑制长链非编码RNA(lnc RNA)人类肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达水平对人脐静脉内皮细胞功能影响的分子机制。方法:用葡萄糖和棕榈酸处理人脐静脉内皮细胞,建立体外糖脂毒性内皮细胞模型,并分为对照组、高糖高脂组、高糖高脂对照组以及小干扰RNA(si-RNA)干预的高糖高脂+si-MALAT1组、高糖高脂+si-丝裂原活化蛋白激酶1(si-MAPK1)组。应用实时荧光定量PCR检测MALAT1、MAPK1的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测自噬、线粒体融合分裂、凋亡、通路相关蛋白的表达水平;免疫荧光共聚焦定位检测自噬及溶酶体相关蛋白的荧光共定位情况;透射电镜观察内皮细胞中自噬溶酶体的数目;线粒体探针染色检测线粒体形态;免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)的产生;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡;细胞增殖及划痕实验检测不同时间点各组细胞的增殖及迁移能力;血管形成试验检测各组细胞中新生血管数量。结果:与对照组相比,高糖高脂组、高糖高脂对照组的MALAT1 mRNA、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶1(p-MAPK1)的表达水平增加,磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平下降,P均<0.05。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MALAT1组微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、螯合体1(p62)、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、p-MAPK1的表达水平均下降,线粒体融合蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)、BCL-2、p-mTOR的表达水平均增加,P均<0.05;LC3和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白的荧光共定位阳性颗粒增加(P均<0.01),溶酶体数目减少;细胞增殖、迁移、成管能力均增加(P均<0.01)。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MAPK1组内皮细胞中p-MAPK1的表达下降,p-mTOR的表达上升(P均<0.01)。结论:抑制MALAT1表达,可降低糖脂毒性环境中线粒体的自噬水平,减少内皮细胞的凋亡及改善内皮细胞的功能,可能与调节MAPK1/mTOR信号通路有关。

乡村振兴背景下农村审计发展的创新研究

为了推动乡村治理现代化和乡村建设现代化,采用调查法、实证研究法,分析了在村集体合并后乡村治理中内部审计存在的问题,从逐渐优化农村财务环境和完善相关法规与政策等方面,提出构建农村财务审计工作的具体做法,以促进农村审计创新发展,助力乡村振兴。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9通过肝源性巨噬细胞移动抑制因子调控动脉粥样硬化炎症反应的研究

目的利用人细胞株,系统研究PCSK9是否通过肝源性MIF调控单核/巨噬细胞炎症反应,进而为动脉粥样硬化(Atherosclerosis)等炎症性疾病的临床防控提供新的思路和依据。方法利用小干扰RNA(Small interfering RNA,SiRNA)介导的MIF基因转染THLE-3细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THLE-3)和MIF正常表达组(Con-THLE-3),通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测肝细胞中PCSK9、MIF mRNA表达。在Si-MIF-THLE-3组和Con-THLE-3组中分别给与PCSK9重组蛋白进行干预,通过Western Blot检测肝细胞中PCSK9、MIF蛋白表达,并用ELISA测定培养液中PCSK9及MIF的含量,并收集上述肝细胞的培养液,-80℃冻存。利用SiRNA介导的MIF基因转染THP-1细胞,将实验分为MIF低表达组(Si-MIF-THP-1)和MIF正常表达组(Con-THP-1),通过Western Blot检测MIF的蛋白表达。将收集的肝细胞培养液分别加入Si-MIF-THP-1和Con-THP-1组共培养48 h,其中PCSK9干预组另设TLR4特异性抑制剂TAK-242(1μM)(P+T)。通过ELISA检测炎症因子表达;Western Blot检测THP-1细胞株中TLR4—NF-κB信号通路的表达。结果①Si-MIF-THLE-3组较Con-THLE-3组的MIF mRNA表达显著降低,而PCSK9的mRNA表达升高(P均<0.05)。②PCSK9干预后肝细胞MIF蛋白的表达以及分泌至培养液中的含量升高,而PCSK9蛋白的表达以及培养液中的含量不变(P均<0.05)。③Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的MIF蛋白表达显著降低(P均<0.05)。④Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组炎症因子的表达低,PCSK9干预组较正常组和P+T组的炎症因子表达升高;PCSK9干预组较正常组和P+T组的TLR4蛋白表达升高;Si-MIF-THP-1组较Con-THP-1组的IKBα蛋白表达高,PCSK9干预组较正常组和P+T组的IKBα蛋白表达低;PCSK9干预组较正常组和P+T组的P65/P50蛋白表达高(P均<0.05)。结论PCSK9可诱导肝细胞MIF的合成与分泌,肝细胞分泌的MIF可与巨噬细胞表面受体TLR4结合,激活下游NF-κB炎症信号通路,促进TNF-α、白介-6、白介-1β、单核细胞驱化因子-1等炎症因子的分泌,激发炎症效应。

抑制P53上调GLUT4改善高糖合并缺血缺氧诱导的心肌细胞糖代谢紊乱及减轻细胞凋亡

[目的]探讨抑制心肌细胞P53,增加葡萄糖转运体4(GLUT4)表达,能否改善高糖(HG)合并缺血缺氧(IH)诱导的心肌细胞糖代谢紊乱,减轻细胞凋亡。[方法]建立体外HG+IH心肌细胞模型,实验分为:对照组、HG组、IH组、HG+IH组、HG+IH+P53抑制剂组(HG+IH+Pifithrin-α组)、HG+IH+P53抑制剂+GLUT4抑制剂组(HG+IH+Pifithrin-α+Fasentin组)。CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、糖酵解关键酶活性和ATP含量,Western blot检测P53、GLUT4、Bax/Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡。[结果](1)体外HG+IH心肌细胞模型中,与对照组比较,心肌细胞P53表达增加75%,GLUT4表达减少16%,细胞ATP含量下降51%,细胞活力减低45%,LDH活性增加3.6倍,Caspase-3和Bax/Bcl-2表达分别增加54%和77%,细胞凋亡率增加(P均<0.05)。(2)抑制心肌细胞P53表达后,与HG+IH组比较,HG+IH+Pifithrin-α组心肌细胞GLUT4表达增加34%,细胞ATP含量增加60%,细胞活力增加50%,LDH活性减低13%,Caspase-3和Bax/Bcl-2表达分别减少31%和53%,细胞凋亡率下降(P均<0.05)。(3)在抑制GLUT4后,与HG+IH+Pifithrin-α组比较,HG+IH+Pifithrin-α+Fasentin组GLUT4表达减少22%,细胞内ATP含量减少39%,细胞存活力减低25%,LDH活性增加21%,Caspase-3和Bax/Bcl-2表达分别增加43%和89%,细胞凋亡率增加(P均<0.05)。[结论]在高糖合并缺血缺氧心肌细胞模型中,抑制P53可增加GLUT4表达,改善高糖合并缺血缺氧诱导的心肌细胞糖代谢紊乱,减轻细胞凋亡。

点免疫金渗滤法筛选胶体金标记抗人IgG的研究

目的:应用点免疫金渗滤法筛选适宜胶体金标记的抗人IgG(以下简称二抗),并运用多个评价指标进行比较和分析。方法:选择三个不同公司的二抗用胶体金标记,根据棋盘滴定法确定最佳标记条件;运用点免疫金渗滤法对三种二抗的胶体金标记后检测效能进行比较,采用包虫病人和健康对照血清,用包虫病特异性抗原检测包虫病患者血清中的特异性抗体,评价最优的二抗,并与酶联免疫吸附测定法进行比较。结果:A、B、C三种二抗标记的最佳标记条件为:p H均为8.5,加入量分别为38.4、24、19.2μg/ml,综合评价二抗B检测效能最优。将其与酶联免疫吸附测定法检测效能进行比较,两种方法检测结果的Kappa=0.895(P<0.05),吻合度较强。结论:应用点免疫金渗滤法,以及本文提出的评价指标,能够筛选出最佳二抗,对检测试剂盒中二抗的选择具有重要的参考价值。

PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪变性的机制研究

目的探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制。方法以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达。将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周。通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红O(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB)。免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比。Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P<0.001)。免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P<0.05),而IL-4、INF-γ、GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B(scavenger receptor B,SRB或CD36)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化IκBα激酶(phosphorylated inhibit kappa Bαkinase,p-IκBα)、磷酸化p65蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P<0.05)。结论PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性。

葡萄糖激酶调节蛋白基因rs1260326多态性与新疆维吾尔族人群2型糖尿病的相关性研究

目的探讨葡萄糖激酶调节蛋白(GCKR)基因rs1260326多态性与新疆维吾尔族2型糖尿病(T2DM)的关系。方法选取2012年6月—2013年3月新疆医科大学第一附属医院确诊为T2DM的维吾尔族患者1 000例为T2DM组,同期选取该院的体检健康者1 008例为对照组。收集所有受试者身高、体质量、臀围、腰围(WC)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)等一般临床资料,计算体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)。检测并比较其生化指标〔总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)〕。采用Sequenom Mass ARRAY系统对GCKR基因rs1260326位点进行基因分型,比较T2DM组和对照组GCKR基因rs1260326位点基因型分布及等位基因频率差异;采用Logistic回归分析GCKR基因rs1260326多态性与T2DM的关系。结果 T2DM组BMI、WHR、WC高于对照组(P<0.05);两组SBP、DBP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组TC、FPG高于对照组,HDL-C、LDL-C低于对照组(P<0.05);两组TG比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组GCKR基因rs1260326位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05),说明两组样本具有群体代表性。T2DM组与对照组rs1260326位点基因型分布、rs1260326位点等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果表明,GCKR基因rs1260326隐性遗传模式是T2DM的影响因素(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,入选主效应模型的变量有性别、WHR、TC、TG、HDL-C、GCKR基因rs1260326隐性遗传模式(P<0.05)。结论在新疆维吾尔族中,GCKR基因rs1260326多态性与T2DM相关,TT基因型可能是新疆维吾尔族人群T2DM发生的保护因素。

二元层状氢氧化物盐及其插层材料的制备和表征

采用共沉淀法制备二元氢氧化铜锌硝酸盐(CZL)和氢氧化镍锌硝酸盐(NZL),考察了p H和Cu/Zn(Ni/Zn)原料摩尔配比对其晶体结构的影响,并通过XRD、FTIR和TG-DTA对其结构和热稳定性进行表征。结果发现,NZL的热稳定性明显高于CZL。在此基础上,分别采用共沉淀法和离子交换法制备阴离子十二烷基硫酸钠(DS)和两性十二烷基二甲基羧基甜菜碱(DCB)表面活性剂插层CZL和NZL插层材料,并采用XRD和FTIR表征其结构,结果表明,采用离子交换和共沉淀法均可合成晶型单一且结构完整的NZL-DS;采用共沉淀法可合成晶型单一的NZL-DCB结构;采用离子交换和共沉淀法均可合成两种晶型的CZL-DS,且离子交换法不能完全取代层间的NO-3;采用离子交换法不能合成NZL-DCB和CZL-DCB,这与DCB的带电性弱有关。

新疆奇台县225例包虫病患者临床特征和药物治疗现状调查

目的了解新疆包虫病流行地区昌吉州奇台县包虫病患者的临床特征和药物治疗状况,为提高该地区包虫病的综合防治效果和制定有效的防治措施提供科学依据。方法通过双人录入2009—2017年奇台县疾病预防与控制中心登记在册的包虫病患者一般人口学和临床相关资料,进行包虫病患者临床特征和规范化药物治疗现状的调查研究,采用Logistic回归分析包虫病患者有效随访和服药规范的影响因素,所有患者均签署知情同意书。结果有效登记的包虫病患者共有225例,患者人数在2010年达到高峰,随后呈现下降趋势。高中及以下文化程度占94.22%(212/225),农牧民占73.33%(165/225),乡镇占82.22%(185/225);复发占52.44%(118/225),初发占47.56%(107/225),其中94.67%(213/225)为囊型包虫病(CE)患者,手术治疗辅以药物治疗占60.44%(136/225),单纯抗包虫药物治疗占39.56%(89/225);有效随访和服药规范占44.00%(99/225),随访服药不规范占56.00%(126/225);Logistic回归分析结果显示,随访中肝功异常、无副反应及B超检查次数2次及以上患者服药率更高。结论新疆包虫病流行区昌吉州奇台县包虫病患者药物治疗亟待规范,影响有效随访和服药规范的因素主要依赖于患者的依从性。需进一步整合监测点与定点医院资源,形成医防相结合的防治模式规范患者的药物治疗,以提高当地患者治疗效果和生存质量。

甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值对非ST段抬高型心肌梗死合并2型糖尿病患者心源性死亡的预测价值

目的探讨甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值(TG/HDL-C)对非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)合并2型糖尿病患者院内及院外心源性死亡的预测价值。方法连续纳入2013年12月至2020年3月于新疆医科大学第一附属医院确诊为NSTEMI合并2型糖尿病患者317例。采用多因素logistic、Cox回归,ROC曲线和Kaplan-Meier生存分析,评价TG/HDL-C对NSTEMI合并2型糖尿病患者院内及院外心源性死亡的预测价值。结果多因素logistic和Cox回归结果表明,TG/HDL-C是NSTEMI合并2型糖尿病患者院内及院外心源性死亡的独立危险因素(院内:OR=1.796,95%CI 1.382~2.335,P<0.001;院外:HR=1.726,95%CI 1.341~2.222,P<0.001)。ROC曲线显示,TG/HDL-C对患者院内及院外心源性死亡均具有一定的预测价值(院内:AUC=0.77,95%CI 0.689~0.855,P<0.001;院外:AUC=0.695,95%CI 0.573~0.817,P=0.003)。Kaplan-Meier生存分析显示,TG/HDL-C升高,患者的心源性死亡率明显增加,预后较差(Log-rank,P=0.013)。结论TG/HDL-C是NSTEMI合并2型糖尿病患者院内及院外心源性死亡的独立危险因素,其对患者远期预后具有预测价值。

心房颤动患者血清单核细胞趋化蛋白-1水平与心房纤维化的关系

目的 观察不同年龄心房颤动(房颤)患者血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平变化,探讨其与血清Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)、Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PⅠCP)的相关性。方法 2019年5月—2020年12月新疆医科大学第一附属医院诊治房颤患者244例为房颤组,同期体检健康窦性心率者244例为对照组。房颤组于入院次日,对照组于体检时行超声心动图检查测量左心房内径(LAD)、左室射血分数(LVEF),采集空腹静脉血检测血清MCP-1、PⅢNP和PⅠCP水平;房颤患者检测血肌酐、D-二聚体水平。比较房颤组与对照组性别,年龄,LAD,LVEF,血清MCP-1、PⅢNP和PⅠCP水平,合并高血压、糖尿病、心力衰竭及有脑卒中史比率。房颤患者入院后给予抗凝药物、他汀类药物、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、β受体阻滞剂等综合治疗方案。将房颤组根据年龄分为老年房颤组(≥65岁)142例和成年房颤组(<65岁)102例,比较2组性别,年龄,CHA2DS2-VASc评分,LVEF,LAD,血肌酐、D-二聚体、MCP-1、PⅢNP、PⅠCP水平,持续性房颤、高血压、糖尿病、冠心病、心力衰竭及有脑卒中史比率,应用抗凝药物、他汀类药物、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、β受体阻滞剂比率;采用Pearson相关法分析房颤患者血清MCP-1水平与PⅢNP、PⅠCP水平的相关性。结果 (1)房颤组LAD[(36.39±4.45) mm]大于对照组[(32.88±3.13)mm](P<0.05),LVEF[(62.82±3.35)%]低于对照组[(63.97±3.32)%](P<0.05),血清MCP-1[(532.98±188.95)ng/L]、PⅢNP[(64.07±23.05)μg/L]、PⅠCP[(236.41±74.24)ng/L]水平及男性(71.30%)、合并心力衰竭(31.97%)、有脑卒中史(40.16%)比率均高于对照组[(224.30±63.47) ng/L、(38.67±13.66)μg/L、(148.14±59.44) ng/L、48.40%、9.02%、13.93%](P<0.05),年龄,合并高血压、糖尿病比率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)老年房颤组CHA2DS2-VASc评分[(4.03±1.72)分],持续性房颤(52.11%)、合并高血压(64.79%)、合并糖尿病(32.39%)、合并冠心病(41.55%)、有脑卒中史(53.52%)比率及血清MCP-1[(681.90±74.63)ng/L]、PⅢNP[(78.32±17.25)μg/L]、PⅠCP[(267.20±76.19)ng/L]、D-二聚体[(375.42±43.03)μg/L]水平均高于成年房颤组[(2.51±1.46)分、33.33%、35.29%、11.76%、26.47%、21.57%、(325.70±60.39)ng/L、(44.22±13.56)μg/L、(193.60±45.31)ng/L、(353.04±36.49)μg/L](P<0.05),LAD[(37.24±4.81)mm]大于成年房颤组[(35.20±3.58)mm](P<0.05),LVEF[(62.08±3.03)%]低于成年房颤组[(63.84±3.51)%](P<0.05),血肌酐,男性、持续性房颤、合并心力衰竭及应用抗凝药物、他汀类药物、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、β受体阻滞剂比率与成年房颤组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)房颤患者血清MCP-1水平与PⅢNP、PⅠCP水平均呈正相关(r=0.855,P<0.001;r=0.625,P<0.001)。结论 房颤患者血清MCP-1水平随年龄增长而升高,且与血清PⅢNP、PⅠCP水平随呈正相关,可反映房颤患者心房纤维化程度。

竹原纤维/聚氨酯复合隔音材料的发展前景

环境恶化、资源缺乏和能源危机使得人类认识到保护环境和经济可持续发展的重要性。人们已越来越重视采用可再生生物资源来制造新材料。利用木材、麻、竹等环保型天然纤维开发复合材料已是近几十年来的研究热点,而如何改进复合材料性能便是今后的研究方向。本文着重介绍竹原纤维/聚氨酯复合材料的隔音性能,通过近几年竹原纤维/聚氨酯复合材料的发展状况,浅析竹原纤维/聚氨酯复合材料未来的发展。

二苯甲酮结晶热力学性质及其模型研究

采用静态法测定了常压下在278.15~313.15 K温度范围内二苯甲酮在不同配比的甲醇-乙腈混合溶剂中的溶解度数据。实验结果表明,当溶剂组成固定时,二苯甲酮的溶解度随温度的升高而增大;同时,二苯甲酮在甲醇-乙腈混合溶剂中存在潜溶现象。此外,分别使用改进的Apelblat方程和λh方程拟合二苯甲酮的溶解度实验数据,结果表明2种模型均能取得较好拟合效果。最后,基于NRTL模型和实验获得的溶解度数据,计算并分析了二苯甲酮的混合和溶解过程的热力学性质。二苯甲酮溶解度的测定与关联能够为其结晶工艺的开发提供重要的理论依据。

GLP1R基因rs1042044多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨胰高血糖素受体(GLP1R)基因rs1042044多态性与2型糖尿病患病风险的相关性。方法采用病例-对照研究,选取2型糖尿病患者147例(糖尿病组),非2型糖尿病患者463例(健康对照组),采用SNPscanTM多重SNP分型技术对GLP1R基因rs1042044位点进行分型。结果GLP1R基因rs1042044位点AA、AC和CC 3种基因型在两组的分布差异有统计学意义(P=0.036),糖尿病组AA型占20.4%,AC型占55.1%,CC型占24.5%,健康对照组AA型占26.6%,AC型占43.0%,CC型占30.5%。多因素非条件Logistic回归分析排除糖尿病发病的传统危险因素的影响后,GLP1R基因rs1042044位点AC/CC基因型仍然和糖尿病发病的危险因素相关,与携带AA基因型者相比,携带AC或CC基因型者患糖尿病的风险增加1.634倍(OR=1.634,95%CI=1.011~2.640,P=0.045)。结论GLP1R基因rs1042044多态性可能与2型糖尿病发病相关,AC或CC基因型可能是糖尿病发生的危险因素。

正交试验设计探索小鼠不同组织冰冻切片的优化制备方法

目的针对小鼠各种常规组织,优化冰冻切片的实验条件。方法选择固定、脱水方法,切片温度及切片厚度,三因素、三水平设计正交实验,经组织处理、包埋、冰冻切片、HE染色后,按照冰冻切片质量标准评分,经SPSS21.0软件分析,得到小鼠各常规组织冰冻切片制备的优化条件。结果不同固定脱水程序的差异有统计学意义,肝脏组织最佳切片条件为固定后脱水,切片厚度控制在5μm,-18℃切片;肌肉、心、脾、脑、肾、主动脉组织最佳切片条件为不固定、不脱水,切片厚度控制在5μm,-18℃切片。结论应用正交试验设计和分析,可以高效、快速而经济的获得小鼠各常规组织冰冻切片优化实验条件,减少了实验动物的使用数量及试验次数,提高了实验动物的利用率和实验的准确性。

抑制巨噬细胞移动抑制因子联合沉默PCSK9减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的 探讨在沉默前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9)的基础上,应用巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抑制剂,对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的综合治疗作用。方法 将ApoE^(-/-)小鼠普食饲养6个月建立AS模型。PCSK9^(si)组小鼠经尾静脉注射2×10^(11)vg/只AAV8.2-Lbcpf-CrRNA2。PCSK9^(si)+ISO-1组小鼠经尾静脉注射2×10^(11)vg/只AAV8.2-Lbcpf-CrRNA2,同时经腹腔注射5 mg/(kg·d) MIF抑制剂ISO-1。对照组小鼠(无治疗干预)。AS模型期间分别于0、2、4、6个月进行内眦静脉采血检测PCSK9、MIF水平。AS建模6个月后采血检测血清血脂四项及白细胞介素1β(IL-1β)水平,流式细胞术检测循环Ly-6C^(high)促炎单核细胞水平;全主动脉以及窦部取材,组织学检测斑块面积,纤维化及脂质浸润程度,CD68(巨噬细胞标志物)及核因子кB(NF-кB)p65蛋白在脂质斑块的表达。STRING数据库检索PCSK9与MIF的蛋白互作关系。结果 与对照组相比,总胆固醇水平在PCSK9^(si)组及PCSK9^(si)+ISO-1组分别降低49%和44%;低密度脂蛋白水平下降54%和52%(P均<0.000 1);甘油三酯水平降低25%和27%(P均<0.05);高密度脂蛋白胆固醇水平升高93%和77%(P均<0.01)。血清PCSK9水平在PCSK9^(si)组及PCSK9^(si)+ISO-1组分别降低59%和46%;MIF水平下降28%和44%。PCSK9^(si)组的Ly-6C^(high)促炎单核细胞百分比和血浆IL-1β水平无显著差异,而PCSK9^(si)+ISO-1组Ly-6C^(high)促炎单核细胞百分比和血浆IL-1β分别降低50%和48.4%(P均<0.05)。PCSK9^(si)组及PCSK9^(si)+ISO-1组主动脉AS斑块面积分别减少16%(P>0.05)和31.2%(P<0.05),主动脉窦的斑块面积分别减少20%和46.9%(P均<0.05),主动脉窦部斑块内的天狼星红染色阳性区面积分别减少23.6%(P>0.05)和57.3%(P<0.05)。蛋白互作分析显示MIF通过趋化因子受体4(CXCR4)及表皮细胞生长因子(EGF)与PCSK9发生交互作用。结论 在沉默PCSK9的基础上,应用MIF抑制剂ISO-1可显著减轻ApoE^(-/-)小鼠AS病变程度。

福文化背景下的消费心理及对设计的启示

通过对"福文化"的阐述及"福文化"对中国人消费心理的影响的分析,延伸出"福文化"作为一种设计元素、"福文化"作为一种设计附加值,如何导向成功的设计。

内脂素基因rs61330082、rs4730153位点多态性与血脂水平及急性冠脉综合征关联研究

目的探讨成年人群内脂素基因rs61330082、rs4730153位点多态性与血脂水平及急性冠脉综合征(ACS)发病风险的相关性,方法采用病例-对照研究,选取2016年1月-2019年12月在新疆医科大学第一附属医院住院行冠状动脉造影的患者,根据纳入及排除标准,最终入选ACS患者935例和对照者919例进行研究,采用SNPscanTM多重SNP分型试剂盒对1854个样本SNP进行分型,对内脂素基因rs61330082、rs4730153位点与ACS患病风险进行关联分析,并分析该基因多态性与血脂指标的交互作用对ACS的影响。结果对于rs61330082位点,三种基因型在ACS组分布频率为:GG型33.26%,GA型48.34%,AA型18.40%,在对照组人群中的分布频率为:GG型32.43%,GA型50.60%,AA型16.97%,显性模型、隐性模型、附加模型及等位基因在两组基因型分布无明显差异(P均>0.05)。rs4730153位点ACS组频率分别为:AA型5.24%,AG型27.81%,GG型66.95%,在对照组人群中的分布频率分别为:AA型2.39%,AG型28.51%,GG型69.10%,ACS组AA基因型分布频率高于对照组(P=0.006),显性模型差异具有统计学意义(P=0.001),隐性模型、附加模型及等位基因在两组基因型分布差异无统计学意义(P均>0.05)。携带rs4730153位点AA基因型的人群血脂水平显著高于AG+GG型人群。多因素回归分析显示高胆固醇血症、高低密度脂蛋白血症显著增加ACS的发病风险(P<0.01),rs4730153基因多态性也和ACS的发病风险相关,携带AA基因型者患ACS风险是AG+GG基因型的2.26倍(P<0.01)。rs4730153显性模型与高低密度脂蛋白血症(P=0.02)及高胆固醇血症(P=0.03)存在交互作用,使人群患ACS风险增加为4.11倍和5.40倍。结论内脂素基因rs4730153位点与ACS的遗传易感性相关。携带rs4730153位点AA基因型的人群血脂水平显著高于AG+GG型人群。rs4730153显性模型与高胆固醇血症及高低密度脂蛋白血症存在交互作用。

小鼠不同器官组织脱水方法的改进

目前由于科研工作的需要,不同种类实验动物的组织石蜡切片应用日益广泛。在医学科研工作中,实验标本多来自于动物模型,如小鼠、大鼠、兔及犬等,其中尤以小鼠最为普遍[1]。人体标本与动物标本的组织处理,以及同一种属动物不同脏器间的处理程序也不尽相同,必须根据其组织结构特点,采用不同于人体组织的处理方法[2]。实验动物组织柔软,含水分多,在固定、脱水、透明和浸蜡等过程中若处理不当则很容易出现组织块变脆、收缩过度等现象,影响切片的成功率[3]。本实验室通过近年来的工作实践,重点对小鼠各常规器官组织的脱水方法进行了实验和改进,现报告如下。

多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及其免疫诊断价值初步评价

目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx)基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用RT-PCR方法获取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-EmTPx,转化大肠埃希菌BL21进行目的蛋白的诱导表达及纯化,免疫小鼠制备抗EmTPx重组蛋白(rEmTPx)的多抗血清。通过Western blot对rEmTPx的免疫学特性进行鉴定,通过间接ELISA试验评价其免疫诊断价值。结果 PCR扩增EmTPx基因片段长度为582 bp,测序证实重组表达质粒pET-28a-EmTPx构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为26×10^3,与理论值相符。Western blot显示该蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清识别,以rEmTPx为抗原采用间接ELISA法检测AE患者血清,特异抗体的敏感性为66.2%,特异性为87.5%。结论成功构建了pET28a-EmTPx原核表达载体,表达蛋白具有Em原头蚴天然TPx的生物学功能表位,且具有一定的免疫学诊断价值,可作为AE血清学诊断的候选靶抗原。