羧甲基茯苓多糖阻遏亚慢性应激诱发的抑郁样行为

探讨羧甲基茯苓多糖在缓解亚慢性应激诱发的抑郁样行为中的作用。通过连续2周温和不可预知应激,在造模的后7 d,每日分别用0.1、0.2、0.4 g/kg羧甲基茯苓多糖干预模型小鼠。采用16S rRNA高通量测序法分析小鼠肠道菌群组成,ELISA法测定血清中炎性因子水平,分别用LC-MS和GC-MS法测定粪便中神经递质和短链脂肪酸含量,并通过强迫游泳、高架十字迷宫和旷场实验测定小鼠抑郁样行为。结果表明,与模型组相比,低、中剂量的羧甲基茯苓多糖均能不同程度改善抑郁样行为,并改变肠道菌群的组成,降低革兰氏阴性菌的相对丰度(P<0.05);中剂量能够显著降低血清中IL-6 (P<0.01)和IL-2 (P<0.05)的水平;各剂量可通过调节Lactobacillus和Parabacteroides的丰度,显著下调异戊酸、NE、5-HT以及Ach的含量,从而减少IL-6的过量释放。综上,羧甲基茯苓多糖可通过调节肠道菌群组成,抑制肠源性异戊酸、NE、5-HT以及Ach的释放,降低抑郁症相关的炎性因子IL-6和IL-2的水平,从而有效阻遏亚慢性应激诱发的抑郁样行为。

香蕉皮提取物通过调节肠道菌群和肠神经递质水平提高便秘模型小鼠肠动力

探究香蕉皮提取物对便秘小鼠肠动力的干预作用。本研究采用混合抗生素溶液构建便秘小鼠模型。用香蕉皮提取物溶液对便秘小鼠进行干预,并测定其对便秘小鼠的肠道菌群、肠神经递质水平和肠动力的影响。结果表明,高浓度香蕉皮提取物组小鼠的粪便含水量增加了137.5%、小肠推进率增加了3.4倍、首粒黑便排出时长减少了73.7%(P<0.05),且基本恢复到空白组小鼠水平。便秘模型小鼠菌群紊乱,部分有益菌缺失,经低浓度香蕉皮提取物干预后,属水平上Trabulsiella(特布尔西菌属)和Unclassified-f-Enterobacteriaceae的相对丰度增加了6倍,肠道Bacteroides(拟杆菌属)的相对丰度减少了94.4%。在神经递质中,低浓度香蕉皮提取物组小鼠的去甲肾上腺素、多巴胺、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱的浓度显著增加了6.1%、17.6%、63.7%、52.6%。以上结果表明,香蕉皮提取物可调节肠道菌群和肠神经递质水平提高便秘小鼠肠动力。

不同方法提取红鳍笛鲷鱼鳞胶原蛋白的结构和理化特性研究

为探明不同提取方法对红鳍笛鲷(Lutjanus erythropterus)鱼鳞胶原蛋白理化特性的影响,以红鳍笛鲷为原料,分别提取酸溶性胶原蛋白(acid soluble collagen,ASC)、酶溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen,PSC)及热水溶性胶原蛋白(hot water soluble collagen,HSC),对比分析3种胶原蛋白提取率、得率及纯度的差异,并测定其氨基酸组成、分子质量、二级结构、Zeta电位、溶解性以及微观结构等理化特性。结果表明,热水法提取率最高,为45.25%,其次为胃蛋白酶法;HSC、ASC、PSC的亚氨酸含量分别为18.28%、17.54%和18.30%。HSC、ASC和PSC均为I型胶原蛋白,包含两条α链(α1和α2),ASC比PSC的β链含量高,HSC、PSC的γ带消失;ASC、PSC具有相似的红外光谱,且保留了完整的三螺旋结构,HSC的三螺旋结构被破坏;HSC、ASC、PSC的净电荷零点为5~6;ASC、PSC在pH 5~11中溶解度较低;扫描电镜显示,ASC呈无序纤维状结构,PSC呈致密多孔网状结构,HSC则基本为薄片状。3种提取方法提取的胶原蛋白均有I型胶原蛋白特征,其结构特征及理化性质均存在差异,可根据需求选择特定的胶原蛋白提取方法用以开发特定的产品。

不同分子质量虾源壳寡糖的抗菌抗氧化活性差异研究

为明确虾源壳寡糖的抗菌抗氧化活性与其数均分子质量之间的相关性,该研究采用乙醇分级沉淀法分离虾源壳聚糖酶解物,得到4种不同分子质量的壳寡糖产品(COS50、COS60、COS70、COS70 s),数均分子质量分别为2365、2807、3105、1390 Da。比较4种壳寡糖产品的抑菌抗氧化活性,发现COS50(数均分子质量为2362 Da)对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞菌和希瓦氏菌均有较强的抑菌效果,对上述各种菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值分别为2.50、1.25、1.25、0.62、0.16 mg/mL;壳寡糖的抗氧化能力整体上随着数均分子质量的增加而减弱,COS50清除DPPH自由基的能力最强,清除自由基一半所需浓度(IC 50)为0.90 mg/mL,COS70 s的总还原力最强(每克相当于9.87 mg抗坏血酸的还原力),COS50次之。综合考虑抗菌抗氧化活性,COS50(数均分子质量为2362 Da)为具备抗菌抗氧化性能的最优壳寡糖。该研究为虾源壳寡糖的开发应用提供理论参考。

基于模糊数学评价法优化低钠盐腌制即食红鱼片工艺

探究腌制料配比和加工工艺对即食红鱼片品质的影响,研发一种低钠盐腌制的即食红鱼片产品。以红鱼作为研究对象,模糊数学感官评价法为主要考察指标,利用质构、色差等技术,研究低钠盐腌制工艺和烘干油炸工艺对即食红鱼片品质的影响。确定的最佳腌制料配比:低钠盐6 g/100 g、白砂糖5 g/100 g、生抽3.0 g/100 g、料酒150 g/100 g、白醋2.0 g/100 g、碳酸氢钠0.6 g/100 g、辣椒面9 g/100 g,最佳的加工条件:烘干温度50℃、烘干时间3 h、油炸温度160℃、油炸时间3.0 min。该配方下得到的低钠盐腌制即食红鱼片色泽金黄,有嚼劲,咸淡适中。

腌制时间对低钠盐腌制红鳍笛鲷鱼干感官及质构品质的影响

【目的】揭示腌制时间对低钠盐腌制红鳍笛鲷(Lutianus erythropterus)鱼干(下称“红鱼干”)感官品质及质构状态的影响,为优质低钠盐腌制红鱼干的加工工艺优化提供理论依据。【方法】以NaCl和KCl分别按照质量分数85%和15%的比例制备低钠盐,再以鱼体质量30%的用量,通过覆抹式干腌、清水脱盐、自然日晒等加工工艺制备红鱼干,考察不同腌制时间(2、4、6、8、10 h)对低钠盐腌制红鱼干成品的感官、色度、质构、肌肉纤维结构、盐分及水分质量分数、水分分布和迁移等指标的影响。【结果】随着腌制时间的递增,红鱼干的咸度、鲜味、腌腊味、硬度、嚼劲和金黄色泽等感官品质均显著提高(P<0.05),此时盐分的增多使鱼干内部的水分逐渐向外迁移,蛋白与水分的结合力增强,肌纤维最终收缩密集;腌制时间超出8 h后,红鱼干的亮黄色度、咀嚼性、NaCl质量分数和水分整体自由度均显著下降(P<0.05),灰绿色度明显上升。【结论】低钠盐腌制时间对红鱼干的感官及质构品质具有显著影响。本研究条件下,8h的腌制时间可保证低钠盐腌制红鱼干处于较优的感官品质及质构状态。

酿酒酵母转化方法的新探索

在现有电转化和聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)诱导的化学转化的基础上,进一步研究和探索了酿酒酵母感受态细胞不同预处理及相应的转化条件对转化效率的影响。结果表明:处于对数生长早期(OD600=0.6)的酵母细胞的转化效果最佳;电转化中分别以120 mmol/L的DTT和300 mmol/L的LiAc预处理感受态酵母菌10 min,可以得到较高的转化效果;联合使用120 mmol/L DTT和300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到7.15×105cfu/μg,PEG/LiAc诱导的化学转化中使用300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到2.75×105cfu/μg,远高于文献报道的水平。同时证明了改进后的转化方法同样能够提高外源DNA同源重组转化效率。

以Lorke法为基础的半致死剂量分析法在油酸和化香树果序及黄连素抗镉减毒评价中的应用

镉污染严重威胁着农业的健康发展,如何有效抗镉减毒是保障农业生产安全的重要措施。然而,目前缺乏高效的抗镉药物及简便易行的评价方法。本试验借助Lorke法为基础的半致死剂量(LD_(50))分析方法 ,检测了油酸、化香树果序、黄连素等不同潜在的抗镉化合物的减毒作用。通过改良后的Lorke法测定不同抗镉药物对小鼠的经口镉LD_(50)的影响。结果表明,与200 mg/kg V_C相比,灌胃200 mg/kg油酸、化香树果序、黄连素能够减轻镉的毒性,提高镉的LD_(50)。LD_(50)由140～160 mg/kg分别上升至300～320 mg/kg(油酸组)、280～300 mg/kg(化香树果序组)和320～340 mg/kg(黄连素组)。以上结果表明,以Lorke法为基础的LD_(50)分析方法,能够评价出油酸、化香树果序、黄连素的减镉毒作用及其剂量-效应关系。以上结果同时证明了相同剂量下黄连素效果要优于油酸、优于化香树果序。

食品毒理学教学中存在的问题及策略分析

食品毒理学课堂教学中存在基础薄弱、互动性差和多媒体滥用等问题,导致教学质量下滑。本文旨在总结食品毒理学教学中存在的主要问题,分析其成因,提出了相应的解决对策。

基于“互联网+”多元教学理念探索一流《食品毒理学》教学新模式

单一教学模式严重制约食品毒理学等核心课程的建设和发展,难以满足“双一流”“双万计划”的高要求。而要培养符合国家要求的“六卓越一拔尖”,努力培养一大批具有引领未来发展能力的各类卓越人才,必须为学生提供一个实践创新思维的多元化学习平台。如何将“互联网+”多元教学模式在食品毒理学研究生教学实践成果运用到本科教学中去,是创建“双一流”食品毒理学课程的关键。本文通过在学习通等互联网平台,经过三年的教学实践,深入探究了基于“互联网+”多元教学理念的《食品毒理学》教学新模式,并对比了过去传统教学模式下的关键指标参数,发现新模式下,学生学习效果、互动情况及课堂表现等指数有显著改善。本研究论证了“互联网+”多元教学模式的可行性,相关结果将为《食品毒理学》的在线教学提供重要参考数据。

鳜(Siniperca chuatsi)生长激素基因克隆和原核表达

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从鳜脑垂体总RNA中扩增生长激素(GH)成熟肽基因,将成熟生长激素的cDNA定向克隆到表达载体pET-32a(+),并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,鳜生长激素(GH)基因含开放阅读框(ORF)615个核苷酸,编码204个氨基酸,蛋白分子量为23kDa,等电点为7.07,其中酸性氨基酸占10.78%,碱性氨基酸占12.74%,疏水氨基酸为占44.12%,极性氨基酸占32.35%。在IPTG终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h的最佳诱导表达条件下,鳜生长激素基因(GH)在大肠杆菌中获得高效表达,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为43kDa的鳜生长激素与硫氧还蛋白(Thioredoxni,Trx)融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白58%。Western印迹分析也证实含6×His标签的重组融合蛋白能够很好地与抗6×His单抗发生反应。本研究为下一步鳜生长激素基因(GH)的生物学功能及应用奠定了基础。

降温及生态冰温条件对凡纳滨对虾无水存活时间的影响

【目的】确定凡纳滨对虾无水存活流通的关键工艺参数。【方法】通过观察明确休眠临界温度,计时测定,确定降温程序、氧气含量及生态冰温保藏温度对存活时间的影响。【结果】凡纳滨对虾生态冰温区为-2~10℃。设定4种降温方式,其梯度降温均为≥18、18~15、15~10℃等3个区段,第Ⅰ种方式对应区段的降温速率为4、1、0.5℃/h,第Ⅱ种为4、2、0.5℃/h,第Ⅲ种为4、1、1℃/h,第Ⅳ种为4、4、4℃/h。第Ⅰ种方式下的存活时间(12.48±0.56)h,显著大于第Ⅱ种(8.75±0.77)h、第Ⅲ种(8.29±0.58)h和第Ⅳ种(6.19±0.62)h(P<0.05)。在99.9%氧气含量且维持生态冰温5℃的无水条件下可使存活时间进一步延至(23.82±0.77)h,之后常温新鲜海水中5 min可复苏至鲜活状态,成活率在98.5%以上。【结论】通过调整降温及生态冰温条件可显著延长凡纳滨对虾无水存活时间。

4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮对单增李斯特菌AI-2类群体感应的干扰效应

利用群体感应抑制剂靶向干扰病源菌已成为有效控制致病性危害的突破口。本研究通过测定菌体浓度、哈氏弧菌BB170报告菌的发光值,研究不同浓度4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮(DMHF)作用下单增李斯特菌(L.m)的生长与信号分子AI-2活性;通过半固体穿刺法、结晶紫法及溶血平板法检测L.m的动力、生物膜及溶血性,来评价DMHF对L.m AI-2类QS的干扰效应。结果表明,≤200μg/m L的DMHF能推迟L.m的生长,且明显抑制了L.m AI-2的活性,实验组的AI-2活性值均低于阴性对照组的40%,由此可判定DMHF是AI-2类QS的抑制剂;当DMHF浓度为100μg/mL时能明显抑制L.m的运动能力; 50、100和200μg/m L的DMHF对L.m生物膜的形成抑制率分别为29.72%、44.88%和75.27%; 200μg/m L的DMHF完全抑制溶血环的产生,本研究为利用DMHF作AI-2类QS的抑制剂提供依据。

乙醇提取酵母泥谷胱甘肽工艺优化

酵母泥是啤酒发酵过程中的主要副产物之一,约占啤酒产量的1.5%,啤酒废酵母中谷胱甘肽(GSH)含量较高。为提高酵母泥中GSH提取效率,采用乙醇提取法,并通过响应面法对乙醇提取新鲜酵母泥GSH工艺条件进行优化,在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken实验设计原理,运用Design-Expert 8.0.6数据统计分析软件,采用三因素三水平的响应面分析法,研究乙醇体积分数、提取温度和提取时间3个因素及其交互作用对提取工艺的影响。确定最优工艺参数是:乙醇体积分数30.98%,提取温度35.81℃,提取时间59.39 min,GSH理论得率0.258%。与优化后的实际得率非常接近,与传统热水提法(0.168%)相比有明显优势,得到的GSH提取条件具有实际应用价值。

一种简单高效的酵母单菌落PCR方法

目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落PCR方法。方法:以Leu2MX6基因同源重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基因组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制备PCR模板进行重组克隆鉴定,并对6种PCR模板制备方法的效果进行比较与分析;对加热提取法进行优化并进行重组子的提取和验证。结果与结论:直接以1 mm2单克隆菌株95℃处理5 min后的酵母菌落水悬浮液为模板进行单菌落PCR,是一种简单高效的酵母重组克隆鉴定方法。该方法能弥补传统方法的不足,且简便快速、结果稳定,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段。同时,这种单菌落PCR法也可应用于重组毕赤酵母的阳性克隆筛选。

翘嘴鳜生长激素cDNA克隆及其真核表达载体的构建

根据GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列(收录号:AY155227)设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)脑垂体中克隆了生长激素基因(scGH)编码区序列并对其真核表达载体的构建进行了研究。结果显示:扩增片段全长615 bp,共编码204个氨基酸。该序列与GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列同源性为99.84%。将scGHcDNA序列定向插入pYES2/CT真核表达载体中,经过筛选、酶切和测序,证明重组子中确实插入了翘嘴鳜GH片段。

湛江地区水产品中单增李斯特菌的分离及耐药性分析

水产品质量安全关系到我国消费者的健康,影响公共卫生安全,是各级政府广泛关注的热点。本研究对湛江市售的冰鲜水产品、即食水产品、鱼糜制品和干制水产品进行单增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的分离与耐药性分析。参考国家标准检测方法和LM特异性基因序列的测定进行LM的筛选与鉴定,用Kirby-Bauer法对目标菌株进行耐药性分析。结果表明,从采集的4类样品共319份水产食品中,检出LM 5株,检出率为1.57%,分别分离于1月的冰鲜白鲢,6月的带子螺、墨鱼干和梅香鱼干及10月的即食包装金针鱼。通过5株LM对13种抗生素的耐药性分析,发现其中12种抗生素对LM有较强的抑制作用,LM未产生耐药性;LM生长对磷霉素表现不敏感,产生了耐药性。研究表明,湛江市区4类水产食品及其制品中存在LM食物中毒的风险,应加强食品安全意识,继续加大力度对LM的耐药监测,确保食品安全及人类健康。

低温贮藏凡纳滨对虾中单增李斯特菌生长预测模型的建立

建立低温(-20、0、2、4、6℃)贮藏下凡纳滨对虾中李斯特菌的生长预测模型,为冷藏对虾生产过程中该菌的有效控制提供理论依据。通过origin8.5和DMFit软件分别拟合Logisitic、Sweibull、Gompertz和Baranyi模型,分析R2得出最优一级模型。通过计算得到最大比生长速率(μm)和迟滞期(λ),再分别用Arrhenius方程和回归方程拟合对应的二级模型。结果表明修正的Logisitic模型在5个实验温度下R2均0.98,能够描述低温贮藏下LM的生长动态。采用Arrhenius方程和回归方程构建的二级模型R2分别为0.9903和0.9997,方差分析均为p<0.001,表明温度对最大比生长速率(μm)和迟滞期(λ)均呈现良好的线性关系。在5℃条件下对模型进行验证,得到偏差度Bf=1.0152、准确度Af=1.0798,均在可接受范围,说明建立的生长预测模型有效可靠。

半胱氨酸通过抑制氧化应激和炎症减轻镉诱导的小鼠肝脏脂质代谢紊乱

为探究半胱氨酸对镉致小鼠肝损伤的保护效应及机制。将SPF小鼠分为对照组、镉组(腹腔注射氯化镉)、镉与低剂量半胱氨酸共处理组(腹腔注射氯化镉+灌胃低剂量半胱氨酸)、镉与高剂量半胱氨酸共处理组(腹腔注射氯化镉+灌胃高剂量半胱氨酸)。给药结束后,测定小鼠血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)活性及肝组织中总胆固醇(total cholesterol, TC)和三酰甘油(triacylglycerol, TG)含量;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肝组织病理学变化;微量法检测肝脏组织中丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性;ELISA法检测肝脏中IL-6、IL-1β和TNF-α含量;实时荧光定量PCR检测肝脏中脂质代谢相关基因的表达水平。结果表明,与对照组相比,镉暴露小鼠血清ALT与AST活性显著升高(P<0.01),肝组织发生明显肝损伤病理学变化,肝脏中TC和TG含量明显上升(P<0.01),肝脏组织MDA含量显著升高,SOD和CAT活性极显著下降(P<0.01)。半胱氨酸补充可显著改善以上各项指标的异常变化(P<0.05或P<0.01)。此外,补充半胱氨酸可提高镉暴露期间的抗炎潜能,并使促炎细胞因子水平正常化。半胱氨酸还使镉干扰的脂质代谢相关基因的表达正常化,以改善脂质积累,有助于减轻肝损伤。半胱氨酸治疗可降低氧化应激和炎症反应,这可能有助于预防镉诱导的脂质代谢紊乱和肝损伤。

双乙酸钠对小鼠肠道菌群结构和功能的影响

肠道菌群在功能和代谢方面的研究日益成熟,但针对食品添加剂双乙酸钠对人体肠道菌群作用的研究目前仍鲜少有报道。为了探究其对肠道菌群及人体健康的潜在益处及危害,以小鼠为模型,以双乙酸钠为干预物质,干预剂量为0.3 g/(kg·d),干预1周后,收集实验小鼠和空白对照组小鼠的粪便并用菌群16S rDNA高通量测序进行肠道菌群的物种鉴定和丰度检测。对所得数据进行分析,得到小鼠肠道菌群的多样性与丰度比例等指标。结果显示,实验剂量下的双乙酸钠干预后,小鼠的肠道菌群无论是菌群种类还是丰度都有了显著改变,属水平新增447种,减少142种。根据丰度比例变化最显著的9种菌,如拟杆菌属(Bacteroides)、AKK(Akkermansia)等,并结合菌群代谢功能预测,脂肪酸合成显著上调,碳水化合物代谢、氨基酸代谢、脂代谢等明显下调,推测摄入高剂量的双乙酸钠可能有增加肥胖、过敏、慢性炎症和肠胃炎的风险。