具有CT影像示踪功能口服益生乳酸菌微胶囊的构建

目的:制备具有CT影像实时示踪功能的口服益生菌药物载体。方法:利用海藻酸钠、硫酸钠作为喷入液,氯化钡为接收液通过静电喷雾一步法合成含有硫酸钡的海藻酸微球,通过壳聚糖表面包覆、枸橼酸三钠液化制备壳聚糖/海藻酸@硫酸钡微胶囊(Cs/al@BaSO_4微胶囊)。通过模拟胃液和肠液,检测Cs/al@BaSO_4微胶囊对乳酸菌的保护作用和乳酸菌释放度;建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠肠炎模型,通过测量肠炎小鼠体重、结肠长度并切除结肠制作标本进行HE染色,观察Cs/al@BaSO_4微胶囊包裹的乳酸菌的治疗效果;通过CT影像检测乳酸菌微胶囊在消化道内的迁移过程。结果:成功制备形貌均一、粒径为200μm的Cs/al@BaSO_4微胶囊。Cs/al@BaSO_4微胶囊的外壁具有规则的分层结构,内部硫酸钡沉淀具有规则的晶体结构。Cs/al@BaSO_4微胶囊可显著提升乳酸菌抵抗胃酸等不良环境的能力并实现肠溶靶向释放。Cs/al@BaSO_4微胶囊介导的乳酸菌靶向肠道给药,可有效缓解DSS诱导的小鼠实验性肠炎,增加肠炎小鼠的体重和结肠长度,肠壁组织内炎性细胞逐渐恢复到正常水平。Cs/al@BaSO_4微胶囊具有较强的X-射线衰减能力。结论:成功构建双功能的乳酸菌载体,显著提升口服益生菌活性,为体内益生菌研究提供了可视化工具。

sRNA_EsR240调控迟缓爱德华菌胞内生存及其毒力

目的:探讨非编码小RNA(sRNA_EsR240)调控迟缓爱德华菌( Edwardsiella tarda , Et )胞内生存和毒力的作用。方法:根据转录组测序,结合生物信息学方法分析ET13菌sRNA。采用RT - PCR检测在不同应激(低酸、营养缺乏、氧化和高盐)条件下sRNA的转录水平,筛选高表达的sRNA;Northern blotting和RACE试验检测EsR240的长度及转录起始和终止位点。采用BLAST软件对EsR240的保守性进行分析;IntaRNA软件预测EsR240靶基因;qRT - PCR检测这些靶基因的表达水平。采用自杀质粒同源重组的方法构建ET13菌的EsR240缺失株和互补株。比较野生株ET13、EsR240缺失株和互补株在胞外不同应激条件下的存活率,及其在巨噬细胞胞内存活能力和对小鼠毒力的差异。结果:根据ET13菌RNA测序的结果,与蛋白库注释基因相比对;比对不上的候选sRNA与sRNA库比对;用软件发现13个具有启动子和ρ-非依赖型终止子新的sRNA,RT - PCR显示其中8个sRNA在各种应激条件下的转录水平不一,EsR128、EsR139和EsR240转录水平均较高。Northern blotting验证了EsR240在 Et 生长期和稳定期均转录,大小是596 bp。RACE试验确定了EsR240的转录起始和终止位点。BLAST软件分析显示,EsR240在 Et 中普遍存在,符合sRNA的特征。 IntaRNA软件预测EsR240靶基因及qRT - PCR结果显示,EsR240调控大部分预测靶基因的表达,这些靶基因注释可能为三磷酸腺苷结合盒(ATP binding cassette,ABC)- F转运体、FtsH蛋白酶的调控子YccA、Na +/H +反向转运体和糖苷水解酶等;在不同条件下,EsR240调控靶基因数目不同。EsR240的缺失明显影响 Et 在胞外不同应激条件下存活率和胞内生存能力,而且影响 Et 对小鼠的毒力。结论: EsR240通过调控靶基因影响 Et 的胞内生存,是一个正调控 Et 对小鼠毒力的sRNA。