脂肪干细胞复合载杜仲醇提取物支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的探讨杜仲醇提取物对脂肪干细胞成骨分化的促进作用及脂肪干细胞复合载杜仲醇提取物支架材料应用于颌骨缺损修复的可行性。方法将48只新西兰大白兔随机分为4组,并制备双侧下颌骨缺损模型。A组植入脂肪干细胞复合载杜仲醇提取物支架材料;B组植入脂肪干细胞复合羟磷灰石材料;C组单植入羟磷灰石材料;D组为空白组。分别于术后2、4、8、12周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、苏木精-伊红(HE)染色、扫描电镜(SEM)检测,并对影像学分析值及成骨情况进行评价,采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析。结果影像学检查及组织学染色显示A组骨缺损处愈合程度、成骨速度及其质量明显优于其他3组。SEM观察可见,A组复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应。统计牙CT分析数据及新生骨面积,A组的成骨情况优于其他3组(P<0.05)。结论杜仲醇提取物有促进脂肪干细胞向成骨细胞转化的作用,脂肪干细胞复合载杜仲醇提取物支架材料也具有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复下颌骨缺损的新型材料。

骨髓间质干细胞介导用于颌面整形的动物实验研究

目的体外扩增小型猪骨髓间质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs),研究其介导颌面整形的可行性。方法分离培养小型猪BMMSCs,扩增后接种到预制的羟基磷灰石/磷酸三钙(hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP)材料上,分别自体回植入小型猪额骨骨膜下,定期行X线、CT检查。术后12周和20周分别处死动物,取材后进行组织学和扫描电镜检查分析。结果动物额部外形术后明显改变。植入之BMMSCs-HA/TCP复合体与额骨表面紧密融合,强度似骨,复合体内广泛分布着新生骨组织,成骨性好。结论经培养扩增的BMMSCs与HA/TCP复合植入额骨骨膜下在额骨表面形成骨组织,可用来改变面部形态,为颌面整形治疗提供了新的思路。

兔髁突来源骨髓间充质干细胞体内对骨缺损修复的实验研究

目的:研究兔下颌骨髁突来源骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)的体外分离、培养、鉴定及其体内成骨情况。方法:从兔下颌骨髁突中分离干细胞进行培养,对BMMSCs向成骨、成骨骼肌细胞的分化进行鉴定。实验组将BMMSCs复合于载黄芪多糖(APS)支架材料上,植入骨缺损区;对照组1植入单纯珊瑚羟基磷灰石(CHA)材料;对照组2植入APS/CHA复合材料;空白组不植入任何材料。应用组织学和扫描电镜观察,并比较植入材料与骨组织交界处的成骨修复情况。结果:细胞经过传代后形态一致,呈梭形;ALP染色呈阳性,成骨诱导后形成钙结节;成骨骼肌诱导后desmin免疫细胞化学染色阳性。植入体内修复骨缺损12周,实验组见大量新生骨及活跃的骨细胞;对照组1仅在材料表面见少量新骨形成;对照组2材料内有部分新骨形成;空白组基本未见骨修复。结论:从兔下颌骨髁突中分离、培养出的BMMSCs,具有体内、体外成骨的能力。

髂骨松质骨修复牙槽突裂18例临床分析

目的：自体髂骨松质骨修复牙槽突裂的临床应用。方法：对2000-06～2006-10收治的18倒牙槽突裂髂骨松质骨植骨修复的回顾性研究。结果：应用该方法治疗18例牙槽突裂患者，术后随访3个月以上，临床观察牙槽突裂已修复，患侧口腔前庭饱满，牙槽突骨质基本同正常骨质。结论：利用自体髂骨松质骨修复牙槽突裂，能保证牙槽突高度、牙弓连续性的恢复，有较好的术后愈合效果，是一种比较理想的修复方法。

脂肪干细胞复合载淫羊藿苷支架材料对兔下颌骨缺损的修复

目的:研究脂肪干细胞(ADSCs)作为种子细胞复合淫羊藿苷支架材料修复兔下颌骨缺损的效果。方法:体外培养ADSCs,茜素红染色检测骨向分化。实验组在骨缺损处植入ADSCs复合载淫羊藿苷支架材料;对照组1植入单纯纳米羟基磷灰石(n-HA)材料;对照组2植入淫羊藿苷/n-HA复合材料;空白组不植入任何材料。应用X线、组织学、扫描电镜观察并比较植入物与骨组织交界处的成骨修复情况。结果:实验组骨缺损区完全被骨组织修复,边界已融合;对照组1部分修复,有少量炎性渗出;对照组2大部分已修复,边界模糊;空白组基本未见修复。结论:ADSCs复合载淫羊藿苷支架材料具有骨缺损修复能力,其效果优于淫羊藿苷/n-HA材料及单纯n-HA材料。

兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定

目的:探讨兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外分离、培养并对下颌骨来源的BMMSCs进行鉴定,为骨组织工程提供种子细胞。方法:取兔下颌骨中的骨松质,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁培养,取P2或P3代BMMSCs进行检测。倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线;克隆形成实验计算克隆形成率;向成骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞多向诱导分化;流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:细胞经传代后形态一致,呈梭形或三角形;细胞生长曲线显示,下颌骨BMMSCs经历潜伏期、对数生长期和平台期;克隆形成率为37%;成骨及成脂诱导形成钙结节及脂滴,茜素红及油红O染色呈阳性;成骨骼肌诱导desmin抗原标记阳性;流式细胞仪检测结果显示,所获得的下颌骨BMMSCs纯度较高,CD90和CD146表面标记阳性率分别为98.7%、98.1%。结论:从兔下颌骨分离的BMMSCs纯度较高,有强大的自我复制、增殖特性和体外多向诱导分化潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞。

杜仲水/醇提取物促进兔脂肪基质干细胞增殖及成骨分化

背景：传统中药杜仲可以促进脂肪间充质干细胞成骨分化。目的：探讨杜仲水/醇提取物对脂肪基质干细胞的增殖作用和成骨分化影响。方法：取兔脂肪组织体外培养脂肪基质干细胞,传代3次后进行细胞增殖及成骨诱导分化。分为诱导培养基中分别含有杜仲水/醇提取物0.2,0.3,0.4,0.5g/L4个稀释度,对照组加入等量磷酸盐缓冲液。成骨诱导6d后进行各组细胞增殖活力的检测和碱性磷酸酶的测定,14d进行茜素红染色及钙化结节计数。结果与结论：杜仲水/醇提取物对脂肪基质干细胞的增殖无明显影响,但均可明显刺激上调碱性磷酸酶的活性,相同稀释度下杜仲醇提取物的调节作用大于水提取物,且在0.4~0.5g/L稀释度下对钙化结节的形成状况和数量有显著促进作用（P〈0.05）。说明杜仲水/醇提取物有促进脂肪基质干细胞向成骨细胞转化的作用,杜仲醇提取物作用优于杜仲水提取物。

环氧化酶2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白在唾液腺恶性肿瘤中的表达及意义

目的:检测环氧化酶2(Cox-2)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在唾液腺腺样囊性癌(ACC)与黏液表皮样癌(MEC)中的表达,探讨两者在唾液腺恶性肿瘤发生、发展中的作用及相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测95例唾液腺恶性肿瘤(包括50例ACC、45例MEC)、10例多形性腺瘤及10例正常唾液腺组织中Cox-2和XIAP的表达情况,使用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Cox-2、XIAP在唾液腺恶性肿瘤中高表达,在多形性腺瘤和正常唾液腺组织中不表达或低表达。Cox-2、XIAP的表达与唾液腺恶性肿瘤组织临床分期和远处转移呈正相关(P<0.05),而与肿瘤部位无相关性(P>0.05)。结论:Cox-2和XIAP在唾液腺恶性肿瘤中高表达,可能在唾液腺恶性肿瘤发生、发展过程中具有重要作用。

BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的:探讨BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料修复兔下颌骨缺损的实验研究的可行性。方法:36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只,双侧下颌骨制备缺损模型。A组植入BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料;B组植入BMSCs复合载蛇床子素支架材料,C组单植入纳米羟基磷灰石支架材料。分别于术后2、4、8、12周处死实验动物,制备组织标本,行大体观察、影像学分析、HE染色、扫描电镜检测,并对影像学分析值及成骨情况加以评价,对分析数据结果使用SPSS17.0统计软件进行分析,P<0.05有统计意义。结果:影像学检查及组织学染色显示A组骨缺损处愈合程度,成骨速度及其质量明显优于B组C组;扫描电镜显示A组该复合材料与组织相容性好,无炎症刺激反应;统计牙CT分析数据及新生骨面积,A组的成骨情况明显优于B组与C组(P<0.05)。结论:BMSCs/PRF复合载蛇床子素支架材料有明显骨诱导作用,是一种新型复合材料,可望成为临床应用中修复颌骨缺损的新型材料。

兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性

背景:以往研究表明骨髓间充质干细胞的获取来源主要是股骨或髂骨,但下颌骨来源骨髓间充质干细胞的研究至今少有报道。目的:观察兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞体外分离、培养及其生物学特性。方法:体外分离培养兔下颌骨骨髓间充质干细胞,取第2或3代检测。MTT法检测细胞增殖,克隆形成试验检测细胞的克隆形成率变化,并对其进行成骨和成脂肪诱导分化。结果与结论:MTT法检测细胞增殖,细胞生长曲线显示下颌骨骨髓间充质干细胞经历潜伏期、对数生长期和平台期。细胞克隆形成实验显示,细胞呈成纤维集落形成单位外观。茜素红、油红O染色结果显示,成骨诱导、成脂诱导后形成钙结节及脂滴。结果证实,兔下颌骨分离出的骨髓间充质干细胞有强大的自我复制及增殖能力,具有多向诱导分化的潜能。

兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞生物学行为及其体内成骨的研究

目的:探讨兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外分离、培养及其生物学行为,评价下颌骨BMMSCs体内成骨的效果。方法:取兔下颌骨中的松质骨,贴壁培养,取第P2或P3代检测:1)倒置显微镜下观察细胞生长状态;2)MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线;3)向成骨细胞和脂肪细胞诱导分化;4)将P3代BMMSCs与羟基磷灰石/磷酸三钙(Hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP)复合,自体回植;单纯HA/TCP植入做对照。术后8周和20周,通过组织学观察评价体内成骨的效果。结果:1)细胞经传代后形态一致;2)细胞生长曲线显示下颌骨BMMSCs经历潜伏期、对数生长期和平台期;3)成骨诱导、成脂诱导后形成钙结节及脂滴,茜素红、油红O染色呈阳性;4)体内成骨显示术后8周BMMSCs-HA/TCP组空隙内新骨形成;术后20周大量新骨形成,HA/TCP大部已降解。单纯HA/TCP植入组术后8周未见新骨形成;20周大部HA/TCP降解,仍未见新骨形成。结论:兔下颌骨分离出的BMMSCs,具有强大的自我复制、增殖能力及多向诱导分化的潜能,并能体内成骨。

不同表面处理对两种纤维桩粘结强度的影响

目的比较玻璃纤维桩和石英纤维桩分别经3种表面处理后的粘结强度。方法选取40颗单根管人离体上颌前牙,随机分成8组,随机取4组用于玻璃纤维桩,另外4组用于石英纤维桩。2种纤维桩表面分别经24%过氧化氢处理、喷砂处理、硅烷偶联剂处理,对照组不处理。处理后纤维桩粘固于根管内,将牙根切成2mm厚薄片制成试件,采用万能试验机进行微推出实验测试粘结强度。结果玻璃纤维桩粘结强度:24%过氧化氢组>喷砂组>硅烷偶联剂组>对照组。硅烷偶联剂组和对照组无显著性差异(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。石英纤维桩粘结强度:喷砂组>24%过氧化氢组>硅烷偶联剂组>对照组。各组间均有统计学差异(P<0.05)。结论 24%过氧化氢处理后玻璃纤维桩粘结强度最大;喷砂后石英纤维桩粘结强度最大。硅烷偶联剂对璃纤维桩粘结强度影响不大,但可增强石英纤维桩粘结强度。

小型猪牙周膜细胞体外培养及与三维支架材料的生物相容性研究

目的建立小型猪牙周膜细胞的体外培养方法,研究其与三维支架材料的生物相容性,为牙齿再生和牙周组织工程研究提供依据。方法无菌条件下,拔除12月龄小型猪上颌尖牙,剥离牙根外牙周组织,用3g/LI型胶原酶和4g/L Dispase37℃消化1h,用70μm滤网收集细胞,1000r/min离心10min,培养液重新悬浮成单细胞悬液,α-MEM(α-modification of Eagle's medium)培养基培养。每天用倒置显微镜观察细胞生长情况,流式细胞仪检测抗Stro-1抗体的表达情况。取第3代牙周膜细胞接种于HA/TCP上,扫描电镜观察培养3天和5天后细胞在三维支架材料上的生长情况。结果原代培养的小型猪牙周膜细胞生长良好,呈多角形或梭性。流式细胞仪结果显示,分离培养的牙周膜细胞中有7·6%抗Stro-1抗体表达阳性。扫描电镜观察结果表明,牙周膜细胞在HA/TCP三维支架上生长良好。结论小型猪牙周膜细胞可被成功的分离培养,在三维支架材料HA/TCP上表现出良好的生长状态,有望为牙齿再生和牙周组织工程研究提供有用的细胞来源。

人参皂苷Rg1/ADSCs辅以透明质酸为基质对兔颞下颌关节骨关节病的改善作用

目的:探讨人参皂苷Rg1/ADSCs辅以透明质酸为基质对兔颞下颌关节骨关节病的治疗效果。方法:32只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、对照组、实验组,每组8只。通过关节腔内注射木瓜蛋白酶法建立骨关节病模型,对照组与实验组造模成功2周后开始药物治疗。对照组关节上腔注射人参皂苷Rg1/ADSCs悬液0.6mL,实验组注射透明质酸/人参皂苷Rg1/ADSCs复合物0.6mL,每周1次。各组动物分别于用药第3、9周后处死,每次16只,每组4只。制备标本,行髁突软骨扫描电镜、组织学观察及实时定量PCR检测,采用SPSS17.0软件包对数据进行方差分析及t检验。结果:扫描电镜与组织学观察可见,实验组软骨病变区改善情况优于对照组。与模型组比较,实时定量PCR结果显示,实验组MMP-13表达与空白组相对持平但低于对照组,差异有显著性(P<0.05);实验组TIMP-1表达与空白组相对持平但高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1/ADSCs辅以透明质酸为基质对改善兔颞下颌关节骨关节病有明显作用。

仿头模在口腔颌面外科学教学中的应用

口腔颌面外科学（oral and maxillofacial surgery）是一门以外科治疗为主,以研究口腔器官（牙、牙槽骨、唇、颊、舌、腭、咽等）、面部软组织、颌面诸骨（上颌骨、下颌骨、颧骨等）、颞下颌关节、唾液腺以及颈部某些疾病的防治为主要内容的学科。它是一门集科学性、技巧性、实践性很强的临床医学学科,它不仅要求学生掌握扎实的基础理论知识,更要求学生具备高超的临床操作技能和分析解决实践中各种问题的能力。

人口底鳞癌裸鼠原位移植模型的建立及其生物学特性

目的:建立一种与临床更为相关的人口底鳞癌动物模型。方法:30只6周龄裸鼠,雌雄各半。对人口底鳞癌细胞HSC-2传代培养、消化、离心后调整细胞浓度达4×108。口底黏膜下注射细胞悬液0.1mL。4周后切除移植瘤并剪成1mm3瘤块,植入裸鼠口底一瘤块,共传5代。观察记录移植成功率,生长潜伏期,每周2次测量瘤体体积。对每代移植瘤和裸鼠口底,颌下组织,肉眼可见的淋巴组织以及下颌骨进行病理学检查,透射电镜观察第5代瘤体,制备染色体标本进行染色体分析。结果:移植成功率为93%。移植瘤病理检查结果符合鳞状细胞癌典型特征,染色体检查表明其属于人类染色体。7只裸鼠发生口底和颌下浸润,其中一只转移至颌下淋巴结。癌细胞呈侵袭性生长,浸润肌肉,神经和周围血管。透射电镜观察:肿瘤成巢状生长,细胞分化高,核成圆形,细胞器发达。结论:本模型客观的反应了人口底鳞癌的生物学行为,为口底鳞癌的生物学及实验治疗的研究提供了较为理想的动物模型。

腮腺区域性切除术治疗沃辛瘤63例临床分析

沃辛瘤（Warthin tumor）又称乳头状淋巴囊腺瘤（papillary cystadenoma lymphomatosum）或腺淋巴瘤（adenolym-phoma）,是一种较为常见的涎腺良性肿瘤,好发于腮腺,发病率仅次于多形性腺瘤，居第二位。我们总结了佳木斯大学附属口腔医院颌面外科1999～2009年10年间收治的沃辛瘤63例进行临床分析，均采用腮腺区域性切除术进行治疗沃辛瘤，疗效满意。