含氯消毒剂对纯化病毒RNA消除效果及影响因素研究

目的研究含氯消毒剂对病毒RNA的消除效率,对其影响因素进行分析。方法以纯化流感病毒RNA作为研究对象,对前期研究有效的含氯消毒剂,基于化学成分、作用浓度及时间、载体特性等因素进行分析,以荧光定量聚合酶链反应(PCR)反映消除效率。结果经中和剂鉴定试验选用含0.5%硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液(PBS)中和残留消毒剂后,实验结果表明以有效氯含量为500 mg/L含氯消毒剂可实现对RNA的完全清除,且不同化学成分、不同类型载体对消毒剂清除效率的影响较小,进一步降低作用浓度至10 mg/L,经浸泡作用5 min也能实现对RNA污染的有效清除。模拟现场测试表明,玻璃、塑料和桌面上的RNA污染均可经1000 mg/L含氯消毒剂以擦拭或喷洒消毒的方式去除,而仅以物理擦拭或冲刷的方式未能清除RNA污染。结论与物理擦拭方式相比,含氯消毒剂充分接触作用后对纯化的病毒RNA具有很好的消除效果。

规模化猪场流行性高热症的临床表现类型与治疗方法

近年来，各地规模化养猪场中出现一种以体温升高的流行性和传染性较强的疾病，主要表现为体温升高至42．5℃，精神高度沉郁，食欲不振或废绝，呼吸困难、喘气，浆液性及黏液性鼻液，全身皮肤潮红，两耳、腹底及后躯皮肤呈现紫色；腹底皮下弥漫灰紫色小点；毛孔有出血点。粪便干硬，呈球状；病程长的皮肤苍白，被毛粗乱无光泽，哺乳仔猪大多出现腹泻，有的出现呕吐；

一种次溴酸发生装置的消毒性能初步研究

目的观察一种次溴酸发生装置产生的消毒液的杀菌效果,探索其应用的可行性。方法采用理化分析方法和悬液定量杀菌试验,对该含溴消毒液的理化性能和杀菌效果进行实验室观察。结果在设定条件下,发生装置可生产出含有效溴约1300 mg/L的消毒液。用含有效溴100 mg/L的该消毒液作用5 min,对悬液内大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均>5.00;用含有效溴200 mg/L该消毒液作用2 min,对铜绿假单胞菌的平均杀灭对数值>5.00,对白念珠菌的平均杀灭对数值>4.00;用含有效溴500 mg/L该消毒液作用15 min,对枯草杆菌黑色变种芽孢的平均杀灭对数值>5.00;用含有效溴500 mg/L该消毒液作用10 min,对脊髓灰质炎病毒的平均杀灭对数值>4.00。有效溴含量500 mg/L该消毒液浸泡金属片72 h后,对不锈钢、铜、铝轻度腐蚀,对碳钢中度腐蚀。结论该消毒液对细菌繁殖体、真菌、细菌芽孢和脊髓灰质炎病毒有良好的杀灭效果。

2009—2019年北京市朝阳区甲型H1N1流感病毒HA基因特征分析

目的分析北京市朝阳区2009—2019年甲型H1N1流感病毒(H1N1)血凝素(hemagglutinin,HA)基因特征,了解朝阳区H1N1变异情况,为评估流感疫苗有效性提供依据。方法从GenBank数据库和GISAID平台下载2009—2019年流感疫苗推荐株以及各分支主要流行株和代表株序列,与北京市朝阳区46株H1N1北京分离株的HA基因序列进行系统进化分析和氨基酸变异分析。利用MEGA 5.0软件邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树并查看氨基酸变异位点,同时采用NetNGlyc 1.0在线软件分析HA基因潜在的糖基化位点。结果北京市朝阳区46株H1N1分离株HA基因分别属于Clade 7、Clade 8、6B、6B.1、6B.2及6C等分支。除2009年以外,2012—2019年H1N1北京市朝阳区分离株与对应年度疫苗株比较接近,同源性为90%以上。各年份H1N1北京市朝阳区分离株在4个抗原决定簇区均有氨基酸变异发生,近年H1N1北京市朝阳区分离株所在的6B.1分支序列均有S74R(Cb区)、S164T(Sa区)共同氨基酸变异;除了6B.1A2分支,其余6B.1分支序列均增加1个糖基化位点162 NQTY,其中6B.1新分支同时在162位点(Sa区)上发生氨基酸共同变异导致其糖基化位点162 NQTY转变为162 NQSY;其中,A/Beijing-Chaoyang/SWL465/2019北京市朝阳区分离株的受体结合部位发现氨基酸共同变异位点,分别位于190螺旋的D/V187A位和220环的R223Q位。结论2009—2019年北京市朝阳区H1N1分离株的HA基因不断发生变异,总体与对应年度疫苗株比较接近,但仍有抗原决定簇和受体结合部位发生氨基酸变异、糖基化位点增加,提示持续监测H1N1的HA基因的必要性,并可为流感疫苗筛选和疫情防控提供参考。

流感病毒对聚合酶抑制剂类药物敏感性的检测方法研究

流感病毒(Influenza virus,Ⅳ)是引起季节性流感流行和流感大流行的主要病原体。抗流感药物是控制流感病毒感染的重要方法,其中,流感病毒的聚合酶抑制剂是最有前途的药物之一。为了对聚合酶抑制剂类药物抗流感病毒药物敏感性的检测方法进行优化,本研究确定不同型别/亚型的季节性流感病毒在不同培养板进行空斑实验的培养时间和药物稀释梯度等条件,并比较免疫染色和结晶紫染色2种方法,在此基础上,利用空斑减少实验检测季节性流感病毒对T-705的敏感性。结果显示:在12孔板中,甲型流感病毒A/Beijing/2/2018(pdmH1N1)和A/Switzerland/8060/2018(H3N2)培养2d为最佳时间,乙型流感病毒B/Beijing/1/2018(B Yamagata)培养2.5d为最佳时间;在96孔板中,A/Beijing/2/2018(pdmH1N1)和A/Switzerland/8060/2018(H3N2)培养20h、B/Beijing/1/2018(B Yamagata)培养24h为最佳时间;0.5 log10为合适的药物稀释度。12孔板和96孔板均可用于季节性流感病毒对T-705的敏感性试验。在12孔板中,2种染色方法无显著性差异;96孔板只能使用免疫染色法。本研究提示,在进行流感病毒对聚合酶抑制剂类药物的敏感性检测中,需严格控制病毒的培养时间和药物的稀释度,12孔板或96孔板均可定量流感病毒以及测定病毒的药物敏感性,微孔板较传统大孔板具有通量高、可自动读取等优势。本研究为其他实验室开展类似检测提供了参考。

2017—2018年中国流感样病例暴发疫情分析

目的分析我国2017—2018年流感样病例暴发疫情的流行病学特征。方法数据来源于中国流感监测信息系统和突发公共卫生事件管理信息系统中中国各级疾病预防控制中心报告的2017年4月3日至2018年4月1日流感样病例暴发疫情的数据(不含中国香港、澳门和台湾数据),对实验室确诊为流感的暴发疫情进行描述性流行病学分析。结果2017—2018年共报告流感样病例暴发疫情2398起(指病例数≥10例的暴发疫情),累计报告病例87084例,其中,流感暴发疫情2323起,病例数为85531例。南、北方流感暴发疫情均主要集中于2017年11月至2018年1月,最高峰均出现在2017年12月。南方报告流感样病例暴发共1850起(77.15%),北方为548起(22.85%)。暴发疫情发生的主要场所是中小学及幼托机构,共报告2210起(92.16%)。流感暴发规模以10~29例的小规模聚集性病例为主,共1606起(66.97%)。实验室检测结果显示,整个年度流感暴发疫情以B型流感为主,占62.76%(1505起)。结论中国2017—2018年流感暴发疫情主要集中于秋冬季,南方是流感样病例暴发疫情报告的高发地区;中小学和幼托机构是暴发疫情的高发场所,引起暴发疫情的主要病原是B型流感。

理化条件对人感染H9N2禽流感病毒灭活效果的评价

目的评价温度、紫外线以及3种消毒剂对人感染H9N2禽流感病毒的灭活效果,确定H9N2病毒的灭活条件。方法含有10^10.67TCID50/ml病毒悬液分别在50℃、56℃、60℃、65℃温度下作用10~60 min;紫外线(UV)照射从10 min至80 min,每间隔10 min取样。物理条件作用的病毒残留活性在MDCK细胞上测定,通过Reed-Muench方法计算组织半数感染剂量(TCID50)来评估物理灭活效果。含有1010.37EID50/ml病毒悬液与等体积的10%的84消毒液、75%乙醇、1%浓度Virkon溶液作用1~15 min后接种SPF鸡胚,通过病毒鸡胚培养是否阴性来评估杀灭效果。当病毒滴度下降4 lgTCID50/ml或鸡胚病毒培养阴性视为该方法有效。结果人感染H9N2禽流感病毒经56℃15 min处理后病毒滴度下降4.02 lg TCID50,而作用30 min后病毒活性将降低到检测水平以下;60℃和65℃热灭活大于10 min,病毒活性将降低到检测水平以下。在UV照射20 min后病毒活性下降5.67 lgTCID50,作用70 min后病毒将降低到检测水平以下。10%84消毒剂、75%乙醇消毒液、1%Virkon作用3 min之后不能检测到病毒增殖。结论人感染H9N2禽流感病毒需要在特定条件下才能被有效灭活,我们的研究为人感染H9N2禽流感病毒的生物安全操作提供了实验依据。