转染过表达WWOX质粒的胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力变化及其机制

目的观察转染过表达WW域的氧化还原酶(WWOX)质粒对胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法胆囊癌细胞株GBC-SD分为实验组、NEG组、空白对照组,实验组转染WWOX过表达质粒,NEG组转染空载质粒,空白对照组不做处理。采用细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。采用Transwell实验测算各组穿膜细胞数,以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中WWOX、P73、E-cadherin、Vimentin mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中WWOX、P73、Ecadherin、Vimentin蛋白。结果实验组、NEG组、空白对照组细胞迁移率分别为50.42%±3.47%、74.81%±1.04%、77.82%±2.71%,其中实验组细胞迁移率与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组、NEG组、空白对照组穿膜细胞数分别为(77.33±8.65)、(173.33±6.18)、(187.33±6.94)个,其中实验组穿膜细胞数与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组WWOX、P73、E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均高于NEG组和空白对照组(P均<0.05),实验组Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于NEG组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染过表达WWOX质粒的GBC-SD细胞株迁移、侵袭能力降低,其机制可能与P73表达上调进而抑制GBC-SD细胞的上皮-间充质转化过程有关。

WWOX对胆囊癌细胞迁移、侵袭的调控作用及机制

目的探讨含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胆囊癌细胞迁移、侵袭的调控作用及机制。方法培养胆囊癌细胞(GBC-SD),WWOX过表达的慢病毒质粒和包装质粒共转染293T细胞获得慢病毒颗粒。将GBC-SD细胞随机分为三组,分别加入等量的WWOX过表达的慢病毒(WWOX组)、阴性对照慢病毒(NEG组)、完全培养液(GBC-SD组)。用qRT-PCR检测细胞内WWOX、TGF-β_(1) mRNA表达,用Western blotting法检测细胞内WWOX、TGF-β_(1)蛋白表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,用ELISA法检测GBC-SD细胞上清液中TGF-β_(1)。结果与NEG组、GBC-SD组比较,WWOX组细胞WWOX mRNA及蛋白相对表达量较高(P均<0.05);NEG组、GBC-SD组细胞WWOX mRNA及蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与NEG组、GBC-SD组比较,WWOX组细胞划痕愈合度低、细胞侵袭数少(P均<0.05),NEG组、GBC-SD组细胞划痕愈合度、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与NEG组、GBC-SD组比较,WWOX组细胞内TGF-β_(1) mRNA、蛋白相对表达量低,细胞上清液中TGF-β_(1)水平低(P均<0.05);NEG组、GBC-SD组细胞内TGF-β_(1) mRNA、蛋白相对表达量,细胞上清液中TGF-β_(1)水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论WWOX过表达可抑制GBC-SD细胞迁移、侵袭,其机制可能与抑制TGF-β_(1)的表达及胞外分泌有关。