CDHR2 过表达通过抑制 PI3K/Akt 通路抑制乳腺癌细胞增殖

目的研究CDHR2通过PI3K/Akt信号通路抑制乳腺癌细胞生长和细胞周期的作用机制。方法利用生物信息学分析CDHR2在乳腺癌中的表达及生存预后情况,并利用免疫组化验证,采用qRT-PCR、Western blot检测5株乳腺癌细胞株与正常乳腺上皮细胞中CDHR2的表达,并分析CDHR2的表达情况。筛选出CDHR2表达量低的乳腺癌细胞系MDA-MB-231及MCF7进行质粒转染过表达CDHR2,分为NC组(空白质粒对照)和CDHR2组(CDHR2质粒过表达组)。利用CCK-8增殖实验、EdU增殖实验及细胞周期实验探究CDHR2对乳腺癌细胞生长和细胞周期的影响,通过Western blotting检测CDHR2过表达对PI3K/Akt信号通路和周期通路蛋白表达的影响。结果生物信息学分析显示在乳腺癌及癌旁中CDHR2表达量均较低且两者间差异无统计学意义(P>0.05),但高表达CDHR2乳腺癌患者预后更好(P<0.05)。免疫组化、qRT-PCR及Western blot实验提示,CDHR2在乳腺癌组织及乳腺癌细胞中表达均显著下调(P<0.01),CDHR2可以抑制乳腺癌细胞增殖及阻滞乳腺癌细胞的细胞周期(P<0.01),CDHR2能够抑制PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制周期蛋白Cyclin D1的表达。结论过表达CDHR2可能通过PI3K/Akt信号通路抑制乳腺细胞生长及阻滞乳腺癌细胞的细胞周期。

ARHGAP21通过失活WNT信号通路抑制非小细胞肺癌中的上皮间质转化

目的探究Rho GTPase激活蛋白21(ARHGAP21)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、转移的影响并探讨其作用机制。方法通过TCGA、CPTAC数据库和临床资料确定ARHGAP21在NSCLC中的表达与患者预后的关系;通过免疫印迹(Western blot)和免疫组化验证ARHGAP21在NSCLC的基础表达;通过慢病毒稳转构建敲低ARHGAP21的NSCLC细胞系;通过Transwell实验和划痕愈合实验检测敲低ARHGAP21对肺癌细胞体外迁移能力的影响;通过裸鼠肺转移肿瘤模型的构建检测敲低ARHGAP21对肿瘤细胞体内转移能力的影响;通过生物信息学分析预测ARHGAP21的可能作用机制;通过Western blot实验验证其相关机制。结果ARHGAP21的低表达与不良预后相关(P<0.05);与正常组织相比,ARHGAP21在肺癌组织中表达下调(P<0.001);Transwell和划痕愈合实验结果显示敲低ARHGAP21促进了肺癌细胞迁移能力(P<0.001)。裸鼠尾静脉肺转移模型结果显示与阴性对照组相比,敲低ARHGAP21组肺部肿瘤转移结节数量更多(P<0.05)且具有更高表达水平的N-钙粘蛋白和波形蛋白。生物信息学分析表明,APC、GSK3β、Axin和ARHGAP21之间存在高度相关性(P<0.001)。Western blot结果显示敲低ARHGAP21能够降低β-catenin的泛素化,上调N-钙黏蛋白并激活WNT信号通路。结论ARHGAP21的下调能够显著促进NSCLC的迁移、转移能力,这可能与ARHGAP21基因下调后激活WNT信号通路,影响APC、GSK3β、Axin的表达从而降低β-catenin的泛素化有关。