中和抗体检测应用于新型冠状病毒mRNA疫苗效力分析

目的 通过对新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)mRNA疫苗(新冠mRNA疫苗)免疫小鼠后产生的中和抗体进行检测,探索中和抗体检测法应用于mRNA疫苗体内效力评价的可行性。方法 采用6~8周BALB/c小鼠进行后肢肌肉免疫,检测不同免疫剂量和不同免疫程序的中和抗体滴度。并对8家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫的小鼠血清进行中和抗体和IgG抗体检测。结果 2、5、10μg不同剂量mRNA疫苗按照不同免疫程序免疫小鼠后中和抗体检测结果显示,抗体阳转率均为100%,中和抗体反应有明显的剂量-效应关系。2针间隔14 d加强免疫组抗体滴度显著高于间隔7 d加强免疫组及1针组(F=57.13,P<0.001)。2μg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)分别为218和468,差异有统计学意义(t=3.40,P=0.003);5μg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为499和1 436,差异有统计学意义(t=3.62,P=0.002);10μg剂量间隔7 d加强免疫和间隔14 d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为608和1 909,差异有统计学意义(t=3.23,P=0.005)。国内8家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫小鼠后均可产生高滴度的IgG抗体(104.5~107.5)和中和抗体(102.6~104.8),效力测定结果均符合企业质量标准。各企业生产的mRNA疫苗的中和抗体滴度结果差异有统计学意义(F=70.03,P<0.001)。结论 小鼠免疫后中和抗体检测可用于mRNA疫苗的体内效力评价。

重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)腺相关病毒qPCR检测方法的验证

目的对重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)检测方法进行验证。方法以基因组两末端的反向末端重复序列(inverted terminal repeat,ITR)为目的基因,对重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)的腺相关病毒进行qPCR检测。对该方法进行线性范围、重复性、准确度、中间精密度、定量限、耐用性和适用性验证。结果AAV浓度在2×10^(2)~2×10^(7) copies/μL范围内线性良好(R2>0.999);重复性验证CV<10%;准确度验证回收率在91%~114%;中间精密度验证CV<10%;定量限为100 copies/μL;耐用性验证CV<10%;并且3种不同重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)均未检出腺相关病毒。结论重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)腺相关病毒qPCR检测方法的线性范围、重复性、准确度、中间精密度、定量限和耐用性均符合可接受标准,适用于重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)中腺相关病毒的检测及质量控制。