U937细胞激活试验方法的建立及应用

建立U937细胞系激活试验(U-SENS^(TM))方法,并评价该方法作为体外替代方法用于评估化妆品原料的皮肤致敏性检测的可行性。参照经合组织(OECD)化学品检测指南的TG 442E中U-SENS^(TM)试验流程,对16种化学物质进行检测,并在4个实验室进行8种参考物质的盲样检测。结果显示,其中15种受试物检测结果与小鼠局部淋巴结试验(LLNA)方法的结果均一致,与LLNA相比总体准确性为100%(15/15),与人体数据相比总体准确性为85%(11/13);4个实验室对8种OECD参考物质检测的准确率均为100%。成功建立了U-SENSTM试验方法,为筛选皮肤致敏原提供参考。

化妆品原料的过敏性体外方法——氨基酸衍生化反应法(ADRA)方法转化与验证

在皮肤致敏不良结果通路(AOP)的第一个关键事件中化学反应为亲电物质与皮肤蛋白中的亲核中心共价结合,即皮肤与物质接触后,可能与皮肤上的蛋白结合形成抗原,导致不良反应。采用半胱氨酸和赖氨酸衍生物替代皮肤组织,模拟皮肤蛋白与化合物结合,通过计算半胱氨酸和赖氨酸衍生物反应后耗竭值(百分比)将物质分类,以此区分皮肤敏化剂和非敏化剂,此种方法称之为氨基酸衍生化反应法(ADRA)。本实验选择10种致敏性已知的物质,探究ADRA方法用于化合物致敏性评价的准确度,并在10种物质中随机选取几种物质采用国内已转化验证过的方法直接反应多肽法(DPRA)对结果进行验证。结果表明,10种物质致敏性判定结果符合样品自身致敏性,认定ADRA致敏性判定准确度较好,可作为皮肤致敏AOP的第一个关键事件替代实验方法。

皮肤致敏替代方法和整合策略研究进展及思考

皮肤致敏性评估是化妆品原料和产品安全性评价的一个重要组成部分。为保护动物福利,基于有害结局通路(Adverse outcome pathway,AOP)原理研发的致敏替代方法发展迅速。由于单一致敏替代方法无法完全替代动物试验,因此对致敏替代方法整合策略的研究也不断丰富完善。对致敏替代方法及整合策略的研究进展进行综述,以期为我国化妆品致敏替代试验整合测试与评估体系的建立提供参考。

皮肤致敏替代方法LuSens的建立与应用

建立皮肤致敏性体外检测方法LuSens试验,同时评估该方法对我国化妆品原料致敏反应应用的可行性。参考OECD TG442D(Test Guideline No.442D)标准指南建立方法,确定试验可转移性。对13种化妆品原料组分进行检测,其中10种受试物结果与小鼠局部淋巴结试验(local lymph node assay,LLNA)方法的结果一致,与LLNA相比总体准确性为83%(10/12);11种受试物结果与人体数据一致,与人体数据相比总体准确性为100%(11/11)。成功建立了LuSens检测方法并用于部分化妆品原料的致敏性检测,可较好地筛选皮肤化学致敏原。

基于体外消化/Caco-2细胞模型分析乌药水煎液中铅、镉和砷的生物可给量及累积风险评估

为了考察乌药水煎液中铅(Pb)、镉(Cd)和砷(As)的生物可给量,并对其风险进行评估,本研究采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定乌药中Pb、Cd和As的残留量;建立体外模拟消化/Caco-2细胞模型考察乌药水煎液中Pb、Cd和As的生物可给量;采用靶器官毒性剂量(TTD)法对于乌药中Pb、Cd和As的残留总量以及水煎液中生物可给量联合暴露产生的累积风险进行评估。结果表明:乌药中Pb、Cd和As的残留总量分别为2.901~3.872、1.299~1.800和0.062~0.216 mg·kg^(-1)。经Caco-2细胞转运后,乌药水煎液中Pb、Cd、As的生物可给浓度分别为0.045~0.080、0.070~0.112和0.004~0.018 mg·kg^(-1)。风险评估结果表明:以乌药中重金属残留总量计算,对于作用终点神经系统,三样品中重金属联合暴露产生的累积风险较高。然而,煎煮并经过Caco-2细胞转运后,对于作用终点心血管、血液、神经系统、肾脏、睾丸,所有批次乌药中TTD法修正的危害指数(hazard index,HI)值<1,健康风险可接受。该项目研究将为准确评价中药中重金属及有害元素的健康风险、建立更科学的重金属及有害元素限量标准奠定理论和技术基础。